遼東楤木對(duì)過(guò)度訓(xùn)練大鼠腎自由基代謝的影響

李麗，常波

（1.嘉應(yīng)學(xué)院體育學(xué)院，廣東 梅州 514015；2.沈陽(yáng)體育學(xué)院 運(yùn)動(dòng)人體科學(xué)系，遼寧 沈陽(yáng) 100102）

長(zhǎng)期過(guò)度訓(xùn)練引起持續(xù)大量蛋白尿，因其具有腎毒性而可能會(huì)導(dǎo)致腎臟慢性進(jìn)行性損傷。這不僅會(huì)影響訓(xùn)練和比賽，還會(huì)影響運(yùn)動(dòng)員的健康，由此成為過(guò)度疲勞發(fā)生發(fā)展的一個(gè)影響因素。運(yùn)動(dòng)引起腎功能氧化損傷的主要恢復(fù)手段之一是服用抗氧化劑，如維生素E、枸杞等單味藥，或復(fù)方中藥［1，2］。楤木屬（Aralia L.）是最接近人參屬（Panax L.）的一群植物，遼東楤木是其中的一種。其根皮有祛風(fēng)除濕、活血止痛、補(bǔ)氣安神、強(qiáng)精滋腎等功能［3］。國(guó)外研究發(fā)現(xiàn)楤木根皮提取物可提高糖尿病大鼠腎臟的抗氧化能力［4］，而運(yùn)動(dòng)引起的腎損傷也與自由基代謝關(guān)系密切。本文通過(guò)6周遞增負(fù)荷游泳訓(xùn)練建立大鼠過(guò)度訓(xùn)練模型，并試圖從中藥抗自由基損傷的角度來(lái)研究遼東楤木對(duì)過(guò)度訓(xùn)練大鼠運(yùn)動(dòng)性腎氧化損傷的預(yù)防作用，為探討運(yùn)動(dòng)性腎損傷的中藥防治提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象

實(shí)驗(yàn)用Wistar雄性大鼠45只，體重200g左右，由沈陽(yáng)市雙義實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供，在嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件下分籠飼養(yǎng)。

1.2 藥物

楤木根皮提取物，深棕色顆粒，主要有效成分為黃酮類(lèi)、皂甙類(lèi)化合物，由沈陽(yáng)藥科大學(xué)植化教研室提供。

1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

根據(jù)隨機(jī)設(shè)計(jì)原則，將實(shí)驗(yàn)大鼠按體重隨機(jī)分為三組，分組情況如下：

給藥前用蒸餾水配制成等臨床劑量的楤木藥液，按18.75mg楤木/kg體重進(jìn)行給藥［5］；NC、EC組每天灌服蒸餾水；灌胃量均為1ml/100g體重。EC、AE組按朱全等［6］建立的超負(fù)荷訓(xùn)練大鼠游泳模型略加改進(jìn)進(jìn)行訓(xùn)練（見(jiàn)表1）。水池100cm×60cm×70cm，水溫34±2℃，水深50cm,每只大鼠游泳面積＞300cm2。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 取尿樣最后一次訓(xùn)練結(jié)束后，隨機(jī)剔出多余大鼠，使每組大鼠均為8只。24h后結(jié)扎大鼠的外尿道口，并用準(zhǔn)備好的蒸餾水進(jìn)行灌胃，水的體積總量（ml）為體重（g）的2%［7］。灌胃1h［8］后處死，用一次性注射器穿刺膀胱取尿，并分裝保存。

1.4.2 指標(biāo)的測(cè)定采用分光光度法、免疫比濁法、放射免疫法分別測(cè)定運(yùn)動(dòng)后尿TP，mAlb 和β2-MG；腎組織SOD、GSH和MDA。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS10.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，顯著性水平在P＜0.05和P＜0.01。

2 結(jié)果

2.1 過(guò)度訓(xùn)練模型的建立

2.1.1 形態(tài)學(xué)觀察 經(jīng)過(guò)6周的遞增負(fù)荷運(yùn)動(dòng)，運(yùn)動(dòng)組大鼠表現(xiàn)為毛發(fā)脫落，毛色晦暗，目光呆滯、易受驚嚇；運(yùn)動(dòng)能力下降，運(yùn)動(dòng)期間需多次休息，游至力竭的時(shí)間縮短，游后精疲力竭、喘息不止，運(yùn)動(dòng)后恢復(fù)很慢。

2.1.2 生化指標(biāo)的測(cè)定與NC組相比較：EC組血睪酮（T）、血睪酮/皮質(zhì)酮（T/C）、血紅蛋白（Hb）水平均顯著下降，P＜0.01。皮質(zhì)酮（C）、血尿素氮（BUN）水平均顯著升高，P＜0.01。根據(jù)朱全、浦鈞宗提出的判斷過(guò)度訓(xùn)練的標(biāo)準(zhǔn)［6］，運(yùn)動(dòng)組大鼠已處于過(guò)度訓(xùn)練狀態(tài)（見(jiàn)表2）。

表2 the changes of T, C, T/C in serum of rats after swimming for six weeks（）

表2 the changes of T, C, T/C in serum of rats after swimming for six weeks（）

注：compared with NC: △△ P＜0.01

Group T(ng/ml)C(ng/ml)T/CBUN(mg/L)Hb(g/L)NC 1.877±0.71724.18±3.880.0806±0.0331103.72±20.18148.38±3.74 EC 0.488±0.104△△47.81±7.31△△0.0105±0.0029△△214.90±20.59△△118. 50±3.59△△

2.2 各組大鼠腎組織SOD、GSH、MDA的變化

與NC組相比較，EC組MDA水平顯著上升，P＜0.01；SOD、GSH水平顯著下降，P＜0.01。

與EC組相比較，AE組MDA水平顯著下降，P＜0.01，SOD、GSH 水平明顯上升，P＜0.05（見(jiàn)表3）。

表3 the changes of NO, iNOS in kidney of rats after swimming for six weeks（）

表3 the changes of NO, iNOS in kidney of rats after swimming for six weeks（）

注：compared with NC: △△ P＜0.01 compared with EC: ? P＜0.05; ?? P＜0.01

groupSOD (U/mgpro)GSH (U/mgprot)MDA(nmol/mgprot)NC108.25±12.868.6092±0.92681.1716±0.1278 EC96.61±13.77△△7.1352±0.6956△△1.4179±0.0866△△AE102.93±13.51?8.3485±1.1175?1.2411±0.1002??

3 討論

3.1 過(guò)度訓(xùn)練對(duì)大鼠腎自由基代謝的影響

過(guò)度訓(xùn)練可導(dǎo)致機(jī)體多器官功能紊亂，其中腎臟也會(huì)受到不同程度的影響。有學(xué)者報(bào)道，大鼠長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)動(dòng)或遞增負(fù)荷力竭性運(yùn)動(dòng)后，腎組織氧自由基（O-2·）信號(hào)強(qiáng)度明顯增強(qiáng)，超氧化物歧化酶（SOD）活性顯著下降，腎組織超微結(jié)構(gòu)發(fā)生變化等［9，10］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示運(yùn)動(dòng)24h后運(yùn)動(dòng)組大鼠腎MDA水平顯著上升，SOD、GSH水平顯著下降，Tb含量仍顯著增加，推測(cè)6周的過(guò)度訓(xùn)練引起大鼠腎臟自由基代謝顯著增強(qiáng)，因而引起運(yùn)動(dòng)性腎損傷，產(chǎn)生運(yùn)動(dòng)性蛋白尿。

3.2 遼東楤木對(duì)過(guò)度訓(xùn)練大鼠腎自由基代謝的影響

遼東楤木〔Aralia elata (Miq.) Seem〕，又稱(chēng)刺龍牙，其根味辛，性平，歸肝、胃、腎經(jīng)，有小毒［3］。有祛風(fēng)除濕、活血止痛、補(bǔ)氣安神、強(qiáng)精滋腎等功能。且與人參相似，具有“適應(yīng)原樣”作用。其根皮提取物的主要有效成分是皂甙類(lèi)和黃酮類(lèi)化合物。皂甙類(lèi)化合物因其具有異環(huán)二烯結(jié)構(gòu)而具有較強(qiáng)的抗炎的作用［11］，另外，皂甙類(lèi)中的齊墩果酸還可清除自由基，減緩自由基對(duì)機(jī)體的損傷［12］。黃酮類(lèi)化合物也是一類(lèi)很強(qiáng)的自由基捕捉劑和淬滅劑，其結(jié)構(gòu)中的2，3雙鍵和4位羰基以及3或5位羥基易于氧化，可清除體內(nèi)的自由基，對(duì)抗脂質(zhì)過(guò)氧化［13］。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示楤木組大鼠腎SOD和GSH活性明顯提高。提示遼東楤木可提高SOD和GSH活性，減少自由基對(duì)腎臟的損傷。有學(xué)者報(bào)道黃酮類(lèi)化合物有鈣離子拮抗作用［13］，并可以促進(jìn)SOD和GSHmRNA表達(dá)上調(diào)，使SOD和GSH活性增強(qiáng)［14，15］。推測(cè)遼東楤木提取物可能是通過(guò)減少細(xì)胞內(nèi)Ca2+內(nèi)流，防止鈣超載（因過(guò)度訓(xùn)練導(dǎo)致腎多次相對(duì)缺血/再灌注而引起鈣超載），進(jìn)而減少鈣超載引起的前列腺素G2前列腺素H2（兩者屬于過(guò)氧化物，具有活性氧的性質(zhì)和作用）等物質(zhì)的生成［16］，及促進(jìn)SOD和GSHmRNA表達(dá)上調(diào)和直接淬滅O-2·［12，13］，來(lái)提高SOD和GSH的活性。國(guó)外學(xué)者研究了黃柏與遼東楤木（1 : 1）混合物的水提取物對(duì)糖尿病大鼠腎臟脂質(zhì)過(guò)氧化的影響，結(jié)果表明其抑制糖尿病大鼠腎氧化損傷［4］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明楤木組大鼠腎MDA含量顯著下降、尿TP顯著下降。提示遼東楤木可減少過(guò)度訓(xùn)練引起的腎脂質(zhì)過(guò)氧化，保護(hù)腎臟結(jié)構(gòu)及功能，進(jìn)而對(duì)運(yùn)動(dòng)性腎自由基損傷起到預(yù)防作用。

4 結(jié)論

遼東楤木可通過(guò)提高抗氧化酶活性，減少自由基的生成，減緩過(guò)度訓(xùn)練后腎臟脂質(zhì)過(guò)氧化水平，對(duì)過(guò)度訓(xùn)練后大鼠腎臟的氧化損傷具有一定的預(yù)防作用。

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