1 206例呼吸道感染兒童肺炎支原體DNA檢測(cè)結(jié)果分析

鐘偉明，郭 靜，陳 俏

（廣西貴港市婦幼保健院檢驗(yàn)科，廣西貴港 537100）

肺炎支原體（mycoplasma pneumoniae，MP）是小兒呼吸道感染的重要病原體之一，除呼吸道感染（咽炎、支氣管炎、肺炎）外，MP尚可通過(guò)血行播散或免疫機(jī)制引起腦炎、腎炎、心肌炎等多種肺外并發(fā)癥[1-2]，對(duì)兒童健康有較大危害性。近年來(lái)MP感染的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)[3]。多項(xiàng)研究顯示，10%～30%的社區(qū)獲得性肺炎病例由MP引起[4]，而兒童社區(qū)獲得性肺炎中，有近40%由MP引起。肺炎支原體性肺炎（MPP）通常表現(xiàn)為一類(lèi)非典型的肺炎，常見(jiàn)癥狀：頭痛、肌痛、咽喉炎、干咳等，白細(xì)胞計(jì)數(shù)正常或輕度升高。但其癥狀、體征及胸部X線缺乏特異性，確診需依靠病原學(xué)檢查。

以往認(rèn)為MPP為自限性疾病，臨床經(jīng)過(guò)和預(yù)后較好。但是近年發(fā)現(xiàn)部分MPP患兒病程長(zhǎng)、癥狀重、甚至?xí)z留肺部損害和肺外表現(xiàn)[5]，因此，MPP早期診斷及治療越來(lái)越來(lái)受到重視。本研究采用FQ-PCR對(duì)1 206例呼吸道感染患兒的咽拭子標(biāo)本檢測(cè)MP-DNA，為臨床診斷MPP提供準(zhǔn)確快速的診斷依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 對(duì)象

2008年2月～2009年3月我院兒科收治1 206例呼吸道感染患兒中，男698例，女508例；入院年齡1月齡～12歲；病程2～20 d。經(jīng)臨床檢查，均為呼吸道感染，有發(fā)熱、咳嗽等癥狀，已排除其他病因。

1.2 標(biāo)本采集

用濕潤(rùn)了的無(wú)菌生理鹽水咽拭子，采集患兒上腭懸雍后部分泌物，置于干燥試管中，密封立即送檢。

1.3 試劑與方法

儀器為中山大學(xué)達(dá)安基因股份公司DA7600實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增儀，試劑為中山大學(xué)達(dá)安基因股份公司生產(chǎn)的肺炎支原體核酸擴(kuò)增熒光定量檢測(cè)試劑盒，嚴(yán)格按試劑說(shuō)明書(shū)操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)分析采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件包處理，計(jì)數(shù)資料的比較采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

咽拭子MP-DNA的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 不同年齡組兒童MP感染的檢出率（例）Tab.1 Detection rate of MP infection in different age children(case)

2.1 MP總檢出率

1 206例呼吸道感染患兒中，MP-DNA陽(yáng)性435例，總檢出率為36.0%。

2.2 不同性別患兒MP檢出率

受檢男性患兒698例，檢出陽(yáng)性254例，檢出率為36.4%；受檢女性患兒508例，檢出陽(yáng)性181例，檢出率為35.6%。男女性別之間MP檢出率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.07，P＞0.05）。

2.3 不同年齡組兒童MP感染的檢出率

1 206例呼吸道感染的患兒中MP-DNA總陽(yáng)性數(shù)為435例，其中小于1歲141例，1～3歲198例，4～6歲60例，7～14歲36例，陽(yáng)性者主要為1～3歲的患兒。各年齡組之間檢出率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.33，P＞0.05）。

3 討論

支原體是一種介于病毒和細(xì)菌之間能獨(dú)立生活的最小微生物，廣泛存在于自然界中。MP是對(duì)人類(lèi)有致病性的主要支原體，主要通過(guò)呼吸道飛沫傳播，是各年齡段兒童急性呼吸道感染的常見(jiàn)病原。近年來(lái)，肺炎支原體感染明顯上升，不僅引起嚴(yán)重的肺炎，還引起嚴(yán)重的并發(fā)癥或持久的后遺癥，嚴(yán)重的肺炎也可導(dǎo)致死亡。MPP一年四季均有發(fā)生，并可在學(xué)校、幼兒園等人群密集場(chǎng)所暴發(fā)流行，學(xué)齡兒童及嬰幼兒普遍易感。

本研究使用MP熒光定量PCR進(jìn)行檢測(cè)，男性患兒檢出率為36.4%，女性患兒為35.6%；男女之間MP檢出率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。MP總檢出率為36.0%，與方紅等[6]的報(bào)道基本一致。

既往認(rèn)為MP感染多見(jiàn)于學(xué)齡兒童及青少年，但近年來(lái)，報(bào)道嬰幼兒感染病例逐漸增多。本文中小于1歲組的檢出率為35.8%，1～3歲組的檢出率為37.9%，顯示嬰幼兒發(fā)病率有增高趨勢(shì)，呈現(xiàn)低齡化趨勢(shì)[7]。其原因可能包括：①肺炎支原體感染年齡前移；②實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)進(jìn)步；③臨床醫(yī)師對(duì)肺炎支原體感染的重視程度及診斷意識(shí)不斷提高。這兩年齡組MP感染發(fā)病人數(shù)最多，MP檢出率也最高，分析其原因是嬰幼兒免疫功能不健全，易被各種病原體感染。各年齡組MP-DNA檢出率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，以1～3歲組最高，為37.9%。

肺炎支原體感染的臨床表現(xiàn)、肺部X線表現(xiàn)均不具特異性，故本病的診斷主要根據(jù)實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果。實(shí)驗(yàn)室診斷方法有支原體分離培養(yǎng)、血冷凝集實(shí)驗(yàn)、支原體特異性抗體檢測(cè)及PCR等方法。分離培養(yǎng)MP對(duì)診斷和鑒別診斷有決定性意義，但是其要求高且需要時(shí)間長(zhǎng)，而且檢出率低，難以被臨床接受，因而限制了其在臨床的推廣應(yīng)用。以往臨床依賴(lài)血冷凝集試驗(yàn)進(jìn)行診斷，但病程在1周以上才會(huì)有陽(yáng)性結(jié)果，而且與其他感染有一定的交叉反應(yīng)，無(wú)法滿(mǎn)足早期診斷和早期治療的目的?？筂P-IgM是機(jī)體受支原體感染最早出現(xiàn)的特異性抗體，它于發(fā)病后1周左右可檢出，10～20 d達(dá)高峰，12～16周轉(zhuǎn)陰，易受以下因素影響。①患兒年齡：因嬰幼兒免疫系統(tǒng)發(fā)育尚未完全，在MP感染后抗體生成不足，影響檢出率；②病程：MP-IgM發(fā)病后1周左右才開(kāi)始上升，對(duì)于小于1周病程的易造成漏診、誤診；③免疫功能狀態(tài)：對(duì)于免疫低下患兒，其免疫反應(yīng)低，IgM升高幅度很低，抗MPIgM檢出率低。因此，MP-IgM存在一定的局限性[8]。

PCR技術(shù)用于病原體的檢測(cè)，其敏感性、穩(wěn)定性是以往其他檢測(cè)技術(shù)無(wú)法比擬的，但存在基因高效擴(kuò)增造成增產(chǎn)物污染而導(dǎo)致假陽(yáng)性的可能。1995年出現(xiàn)的以標(biāo)記特異性熒光探針為特點(diǎn)的熒光定量PCR技術(shù)完全閉管式操作，大大減少了擴(kuò)增物污染的機(jī)會(huì)，提高了檢測(cè)特異性，并可對(duì)擴(kuò)增物進(jìn)行精確定量[9]。FQ-PCR技術(shù)巧妙地利用了PCR的DNA高效擴(kuò)增、探針技術(shù)高特異性和光譜技術(shù)的敏感性及定量分析的優(yōu)點(diǎn)，解決了以上問(wèn)題，可作為肺炎支原體感染的早期診斷的有效方法。

本研究結(jié)果表明，采用FQ-PCR檢測(cè)MP-DNA法既有利于早期診斷，又能提高診斷的準(zhǔn)確性。肺炎支原體感染率較高，對(duì)小兒呼吸道感染患者進(jìn)行MP-DNA檢測(cè)，有利于支原體肺炎的早期診斷及合理治療。

[1]趙順英.肺炎支原體感染的臨床表現(xiàn)和肺外并發(fā)癥[J].實(shí)用兒科臨床雜志,2007,22(4):249-250.

[2]Daxboeck F,Blacky A,Seidl R,et al.Diagnosis,treatment,and prognosis of mycoplasma pneumoniae childhood encephalitis:systematic review of 58 cases[J].J Child Neurol,2004,19(11):865-871.

[3]陸權(quán),陸敏.肺炎支原體感染的流行病學(xué)[J].實(shí)用兒科臨床雜志,2007,22(4):241-243.

[4]Liebeman D,Schlaeffer F,Lieberman D,et al.Mycoplasma pneumoniae community-aquired pneumonia a review of 101 hospitalized adult patients[J].Respiration,1996,63(5):261-266.

[5]Samransamruajkit R,Jitchaiwat S,Wachirapaes W,et al.Prevalence of mycoplasma and chlamydia pneumonia in severe community pneumonia among hospitalized children in Thailand[J].Jpn J Infect Dis,2008,61(1):36-39.

[6]方紅,楊雪香,陳冬蓮.不同年齡兒童呼吸道感染肺炎支原體IgM與DNA的相關(guān)性研究[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2007,17(8):1024-1025.

[7]劉建平,黃莉,季偉,等.特異性IgG,IgM定量檢測(cè)在小兒肺炎支原體感染中的臨床意義[J].蘇州大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版,2007,27(6):910.

[8]懂傳莉,謝懷珍.不同年齡組支原體肺炎臨床分析[J].蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2008,33(3):333-335.

[9]Heid CA,Stevens J,Livak KJ,et al.Real time quantitative PCR[J].Genome Res,1996,6:986-994.