中藥復(fù)明片治療大鼠白內(nèi)障的實驗研究

宋念藝，劉連生 (長江大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院， 湖北 荊州 434023)

中藥復(fù)明片治療大鼠白內(nèi)障的實驗研究

宋念藝，劉連生
(長江大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院， 湖北 荊州 434023)

目的：研究復(fù)明片對硒性白內(nèi)障的治療作用。方法：給Wistar大鼠幼鼠注射亞硒酸鈉復(fù)制白內(nèi)障模型。實驗分為模型組、治療組Ⅰ和治療組Ⅱ，未注射亞硒酸鈉的同齡幼鼠作為空白對照組。定期觀察各組動物晶狀體混濁情況，實驗結(jié)束時檢測各組大鼠晶狀體超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。結(jié)果：治療組Ⅰ和治療組Ⅱ大鼠晶狀體混濁程度均低于模型組，且晶狀體SOD活性均明顯高于模型組(P<0.05)，而MDA含量則明顯低于模型組(P<0.05)。結(jié)論：復(fù)明片對硒性白內(nèi)障有較好的治療作用。

白內(nèi)障；亞硒酸鈉；大鼠；超氧化物歧化酶；丙二醛；復(fù)明片

白內(nèi)障是我國首要的致盲原因，目前其唯一而有效的治療方法是手術(shù)。但白內(nèi)障手術(shù)可能會出現(xiàn)一些嚴(yán)重的并發(fā)癥，這既會增加患者的痛苦，也會增加患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。因此，早期用藥物預(yù)防或治療白內(nèi)障就顯得十分重要。由于多數(shù)白內(nèi)障的發(fā)展緩慢，需長期用藥，而中草藥系純天然藥物，副作用小，適宜長期使用，因此對中草藥有效方劑的開發(fā)已成為近年來抗白內(nèi)障藥物研究的熱點之一。本課題試圖以大鼠硒性白內(nèi)障為動物模型，選用不同濃度的復(fù)明片灌胃，研究復(fù)明片對硒性白內(nèi)障的治療作用。現(xiàn)將我們所采用的方法和取得的結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1 實驗動物 健康純系Wistar大鼠乳鼠40只，雌雄兼用，鼠齡均為10d，體質(zhì)量14～19g(長江大學(xué)醫(yī)學(xué)院動物飼養(yǎng)室提供)。

1.1.2試劑與藥品 亞硒酸鈉結(jié)晶體(華中科技大學(xué)化學(xué)系提供)；復(fù)明片(西安碑林藥業(yè)生產(chǎn)，批號：Z61021134)；超氧化物歧化酶試劑盒、丙二醛試劑盒及考馬斯亮藍(lán)試劑盒(南京建成生物工程研究所生產(chǎn))。

1.1.3儀器 YZ-5CSI型裂隙燈顯微鏡(蘇州醫(yī)療器械廠生產(chǎn))；756MC型紫外可見分光光度計(上海精密科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn))；DS-200型控溫多用高速組織搗碎機(jī)(江蘇江陰市科研器械廠生產(chǎn))。

1.2方法

1.2.1 實驗分組與模型制備 。對照組大鼠不做任何處理。末次給藥后第3天用裂隙燈顯微鏡觀察大鼠晶狀體變化，晶狀體混濁為造模成功。

1.2.2 混懸液的配制及給藥 將復(fù)明片捻碎后用蒸餾水配成混懸液。配制不同質(zhì)量濃度，分別裝于玻璃瓶中，密封，置入4℃冰箱保存?zhèn)溆?。給治療組Ⅰ和治療組Ⅱ大鼠分別灌胃30mg/ml和60mg/ml的復(fù)明片。灌胃量均為2ml/100g體質(zhì)量，1次/d，持續(xù)30d。對照組與模型組大鼠不用任何藥物。

1.2.3 晶狀體檢查與分級 的標(biāo)準(zhǔn)分級：“-”示無混濁，即晶狀體透明；“+”示核混濁，即晶狀體核發(fā)生混濁，但皮質(zhì)部仍清亮；“*”示全混濁，即晶狀體核及皮質(zhì)均出現(xiàn)混濁。

1.2.4 晶狀體SOD活性與MDA含量測定 實驗結(jié)束時，用不銹鋼眼科剪處死各組實驗大鼠，立即取出雙側(cè)眼球。將眼球用0～4℃生理鹽水沖洗3次后，剝離晶狀體，用濾紙吸干，放在電子天平上稱重，并記錄。將雙側(cè)晶狀體放入5ml勻漿杯內(nèi)，按比例加入8.6g/l冰生理鹽水，用控溫多用高速組織搗碎機(jī)以10000r/min搗碎1.5min，制成3.5%晶狀體勻漿。再將勻漿以2000r/min低速離心8min后，取出上清液。用黃嘌呤氧化酶法測定SOD活性，用硫代巴比妥酸法測定MDA含量，用考馬斯亮藍(lán)法測定蛋白含量。具體步驟按南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒說明書進(jìn)行。

2 結(jié) 果

表1 各組實驗大鼠晶狀體混濁情況

注： “-”示晶狀體透明；“+”示晶狀體核混濁，但皮質(zhì)仍清亮；“*”示晶狀體核及皮質(zhì)均出現(xiàn)混濁。

2.1實驗大鼠的觀察及晶狀體混濁分級情況模型組、治療組Ⅰ和治療組Ⅱ大鼠在注射亞硒酸鈉3次后的第3天，肉眼及裂隙燈顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)這些大鼠雙眼晶狀體均出現(xiàn)了不同程度的灰白色混濁，表明注射亞硒酸鈉后的大鼠100%形成了不同程度的白內(nèi)障，而對照組大鼠則無1例出現(xiàn)晶狀體混濁。于殺鼠的當(dāng)天，用裂隙燈顯微鏡檢查各組實驗大鼠晶狀體混濁情況，結(jié)果見表1。

2.2實驗大鼠晶狀體SOD活性和MDA含量的影響模型組大鼠晶狀體SOD活性明顯低于對照組，而MDA含量顯著高于對照組，其差異均具有顯著性意義。復(fù)明片2個劑量組的SOD活性均高于模型組，而MDA含量均低于模型組，其差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，表明復(fù)明片能提高白內(nèi)障大鼠的抗氧化能力。見表2。

表2 各組實驗大鼠晶狀體SOD活性和MDA含量的比較

注：﹡﹡與對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；▲與模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

3 討 論

白內(nèi)障是一種常見眼病，是全球性的主要致盲原因。我國目前盲人中約有半數(shù)是白內(nèi)障引起的，其中以老年性白內(nèi)障為多見。手術(shù)是目前白內(nèi)障最有效的治療手段，估計我國積存的急需手術(shù)治療的白內(nèi)障盲人有300多萬，我國每年新增白內(nèi)障盲人約為40萬。隨著人口增加和老齡化，這一數(shù)字還會增加，因此白內(nèi)障盲是我國防盲治盲最優(yōu)先考慮的眼病[2]。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為老年性白內(nèi)障乃腎陰虧損與肝脾兩虛所致，董斌、陽湘文等[3]通過臨床觀察證實，復(fù)明片根據(jù)中醫(yī)辨證施治原則，方中取熟地、山藥、人參、枸杞、山茱萸、女貞子等滋補(bǔ)肝腎、益精明目；生地、羚羊角、澤瀉、茯苓、檳榔等清熱滋陰，健脾利水；谷精草、夏枯草、石決明等有清肝明目、祛風(fēng)退翳的功效，對肝腎兩虧、精血不足或脾虛失運及肝經(jīng)郁熱等引起的老年性白內(nèi)障切中病機(jī)，復(fù)明片能加速眼前段血液循環(huán)和營養(yǎng)代謝，改善晶狀體囊的通透性，恢復(fù)其生理屏障效應(yīng)，促進(jìn)晶狀體蛋白質(zhì)代謝，增強(qiáng)可溶性蛋白的功能，有效控制晶狀體混濁，并能促進(jìn)混濁吸收。故他們認(rèn)為復(fù)明片是一種治療早中期老年性白內(nèi)障較好的藥物，對治療白內(nèi)障，延緩白內(nèi)障的發(fā)展及改善患者視力有明顯作用。

復(fù)明片2個治療組大鼠晶狀體混濁程度降低，且晶狀體SOD活性明顯升高，而MDA含量明顯降低，提示復(fù)明片治療硒性白內(nèi)障的作用可能是通過提高晶狀體抗氧化能力，降低脂質(zhì)過氧化來實現(xiàn)的，但由于中藥復(fù)明片的成分復(fù)雜，且為復(fù)方制劑，其作用機(jī)理究竟是怎樣的，尚有待進(jìn)一步研究。

[1]宋念藝，高秋華.補(bǔ)鋅對白內(nèi)障大鼠血液及晶狀體中LDH和CuZn-SOD的影響[J].眼科研究，2005，23(1)：40-42.

[2]趙堪興，楊培增.眼科學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：312-318.

[3]董斌，陽湘文.復(fù)明片治療初中期老年性白內(nèi)障的臨床觀察[J].國際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報，2006，12(6)：94-95.

[4]郝智慧，張炳仁，趙厚德.障復(fù)明治療大鼠硒性白內(nèi)障的實驗研究[J].實驗藥物與臨床，2007，10(1)：1-3.

[編輯] 何 勇

10.3969/j.issn.1673-1409(R).2010.03.005

R776.1

A

1673-1409(2010)03-R010-02