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    保健品欣源通膠囊安全性的初步評價

    2010-11-27 01:46:06
    長江大學學報(自科版) 2010年2期
    關鍵詞:灌胃陰性小鼠

    盧 夢

    (長江大學動物科學學院,湖北 荊州 434025)

    楊文祥

    (湖北省疾病預防控制中心,湖北 武漢 430079)

    保健品欣源通膠囊安全性的初步評價

    盧 夢

    (長江大學動物科學學院,湖北 荊州 434025)

    楊文祥

    (湖北省疾病預防控制中心,湖北 武漢 430079)

    采用小鼠急性經(jīng)口毒性試驗、二項致突變試驗(小鼠骨髓細胞微核試驗、小鼠精子畸形試驗)和30 d喂養(yǎng)試驗,評價了欣源通膠囊作為保健品的安全性。結(jié)果表明,欣源通膠囊對2種性別的SPF級昆明種小鼠急性經(jīng)口毒性試驗,24 h 2次灌胃量達20.0 g/kgBW,2周觀察期內(nèi)動物未見明顯中毒癥狀,亦無動物死亡。按急性毒性分級標準評價,該受試樣品屬無毒級;二項致突變試驗結(jié)果均為陰性。30 d喂養(yǎng)試驗結(jié)果表明受試樣品各劑量組對Wistar大鼠體重、進食量、食物利用率、血液學、血液生化、臟器重量、臟/體比值以及病理組織學等指標與正常對照組比較,均無顯著性差異,未發(fā)現(xiàn)該受試物有明顯的毒性作用??梢?,欣源通膠囊作為保健品是安全的,可以通過一、二階段的毒理學安全性評價。

    欣源通膠囊;安全性評價;保健品

    欣源通膠囊是由某公司研制的內(nèi)容物為棕色粉末的一種保健品[1],主要功能是提高缺氧耐受力[2],主要適用于在高原、高山、高空、井下等缺氧環(huán)境工作或生活的人群[3],也適用于在缺氧環(huán)境中短期工作或海拔高度一般在3 000 m以上旅游參觀的人員。為確定欣源通膠囊作為保健品的安全性,筆者對欣源通膠囊進行了一、二階段的安全性評價。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    受試欣源通膠囊來源于某藥業(yè)公司研制,先將受試樣品粉末用蒸餾水配制成相應濃度的均勻混懸液,供試驗用。SPF級昆明種小鼠、Wistar大鼠及飼料均由湖北省實驗動物研究中心提供。實驗動物及飼料生產(chǎn)許可證號:SCXK(鄂)2003~0005。大、小鼠分別飼養(yǎng)于湖北省實驗動物研究中心SPF級大、小鼠實驗室,實驗動物使用許可證號:SYXK(鄂)2003~0014。動物體重依各項試驗要求而定,實驗室溫度20~24 ℃,濕度40%~70%。

    1.2 方法

    (1)小鼠急性毒性試驗 參照文獻[4]選用SPF級昆明種小鼠,體重為18~22 g,雌雄各10只,灌胃前16 h 動物禁食不禁水,將先期配制好的濃度為0.5 g/mL的受試樣品充分搖勻后進行灌胃,灌胃容量為0.2 mL/10 gBW,分2次進行,間隔4 h,累計總劑量為20 g/kgBW。灌胃當天連續(xù)觀察,以后每天觀察2次直至第14天,并記錄動物中毒癥狀及死亡數(shù),試驗結(jié)束時未死亡動物。

    (2)遺傳毒性試驗 參照文獻[5]小鼠骨髓細胞微核試驗:選用體重為25~30 g的昆明種小鼠,雌雄各25只,隨機分成5組, 每組雌雄各5只。設A組為陰性對照組、E組為環(huán)磷酰胺陽性對照組,小鼠灌胃劑量為40 mg/kgBW; B、C、D組為受試樣品組,受試樣品劑量分別為2.5、5.0、10.0 g/kgBW。受試樣品采用蒸餾水配制成0.125、 0.250、0.500 g/mL的濃度,環(huán)磷酰胺用蒸餾水配制成0.002 g/mL的濃度,各組小鼠灌胃容量均為0.2 mL/10 gBW,陰性對照組灌胃給予等容量蒸餾水。各試驗組小鼠均采用30 h試驗法,即2次給予受試物間隔24 h,于第2次給予受試物后6 h處死動物,取股骨骨髓涂片,自然干燥后甲醇固定,Giemsa染色。每只動物油鏡下觀察1 000個嗜多染紅細胞(PCE),記錄出現(xiàn)微核的嗜多染紅細胞數(shù),其微核發(fā)生率以含微核的PCE千分率計,并用χ2檢驗進行統(tǒng)計;計數(shù)200個嗜多染紅細胞數(shù),同時計數(shù)成熟紅細胞數(shù),并計算PCE占紅細胞(RBC)總數(shù)的百分比[PCE個數(shù)/(PCE個數(shù)+成熟紅細胞個數(shù))]。

    小鼠精子畸形試驗:參照文獻[6]選用體重為25~30 g的雄性昆明種小鼠25只,隨機分成5組,每組5只。設A組為陰性對照組,E組為環(huán)磷酰胺陽性對照組,小鼠灌胃劑量為40 mg/kgBW;B、C、D組為受試樣品組,受試樣品的劑量分別為2.5、5.0、10.0 g/kg BW。受試樣品采用蒸餾水配制成0.125、0.250、0.500 g/mL的濃度,環(huán)磷酰胺用蒸餾水配制成0.002 g/mL的濃度,按0.2 mL/10 gBW灌胃給予,陰性對照組小鼠灌胃給予等容量蒸餾水。各試驗組小鼠均連續(xù)5 d給予相應的受試物后再繼續(xù)喂養(yǎng)30 d。在首次給受試物后的第35天處死動物,取兩側(cè)附睪置于0.5 mL生理鹽水中,用眼科剪將附睪縱向剪1~2刀,用4層擦鏡紙過濾后涂片,空氣干燥后,甲醇固定,再用1%伊紅染色。每只動物高倍鏡下觀察1 000個精子,記錄畸形精子數(shù),計算畸形精子發(fā)生率(以千分率計),并進行統(tǒng)計處理。

    (3)30 d喂養(yǎng)試驗 參照文獻[4]選體重65~85 g Wistar大鼠共80只,雌雄各半,隨機分成1個陰性對照組和3個劑量組,每組雌雄各10只大鼠,飼養(yǎng)方法為單籠喂養(yǎng)。各組受試樣品劑量分別為0.0、1.5、3.0、6.0 g/kgBW(其中,低、中、高劑量組分別相當于人群推薦日攝入量0.03 g/kgBW的50、100、200倍)。受試樣品先配制為0.1、0.2、0.4 g/mL的濃度,再按1.5 mL/100 gBW經(jīng)口灌胃給予,連續(xù)飼喂30 d。

    試驗前后測量體重、記錄進食量,并計算總食物利用率,測量臟器重量,計算臟/體比值。試驗結(jié)束時測定血紅蛋白(HB),計數(shù)紅細胞(RBC)、白細胞(WBC),并測定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶 (AST)、血清尿素氮(BUN)、總膽固醇(TCH)、甘油三酯(TG)、肌酐(Cr)、血糖(GLu)、血清白蛋白(Alb)、總蛋白(TP)等指標[7]。

    1.3 數(shù)據(jù)處理

    試驗數(shù)據(jù)采用Microsoft Excel 2003進行處理,其中計量資料采用t檢驗,計數(shù)資料采用非參數(shù)統(tǒng)計法,并按動物性別分別統(tǒng)計。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 小鼠急性經(jīng)口毒性試驗

    在2周觀察期內(nèi),動物未見明顯中毒癥狀,亦無動物死亡,按急性毒性分級標準[4]評價,該受試樣品屬無毒級。

    2.2 遺傳毒性試驗

    (1)小鼠骨髓細胞微核試驗 由表1可知,陽性對照組雌雄小鼠微核率與陰性對照組比較有極顯著差異(Plt;0.01),而受試樣品各劑量組雌雄小鼠微核率與之比較均無顯著性差異(Pgt;0.05),表明在本實驗劑量范圍內(nèi),該受試樣品對骨髓細胞微核試驗結(jié)果為陰性[5]。受試物各組未成熟紅細胞占紅細胞總數(shù)的比例(PCE/RBC總數(shù))均不少于陰性對照組的20%。

    (2)小鼠精子畸形試驗 由表2可知,陽性對照組小鼠精子畸形發(fā)生率與陰性對照組比較有極顯著差異(Plt;0.01),而受試樣品各劑量組與之比較均無顯著性差異(Pgt;0.05),表明在本試驗劑量范圍內(nèi),該受試樣品精子畸形試驗結(jié)果為陰性[6]。

    2.3 30 d喂養(yǎng)試驗

    經(jīng)過30 d的飼喂,受試樣品各劑量組大鼠總食物利用率及增重與陰性對照組比較均無顯著性差異(Pgt;0.05,表3)。各劑量組大鼠血液常規(guī)指標,血清ALT、AST、BUN、TCH、TG、Cr、GLu、Alb、TP等與陰性對照組比較也均無顯著性差異(Pgt;0.05),且均在正常值范圍內(nèi)(表4,表5)。各劑量組大鼠臟器重量及臟/體比值與對照組比較也無顯著性差異(表5)。

    病理組織大體解剖肉眼可見,各劑量組雌雄性大鼠的心、肝、脾、腎、胃腸與正常對照組比較,其外觀顏色和臟器大小正常,均未見明顯滲出、增生、水腫、萎縮等病變。鏡檢查結(jié)果也表明,與對照組比較,各劑量組結(jié)果均在正常形態(tài)學范圍內(nèi),未見明顯中毒性病理改變。

    表1 小鼠骨髓細胞微核試驗結(jié)果Table 1 Micronucleus test results of bone marrow cells in mice

    注:**為與陰性對照組比較結(jié)果(Plt;0.01),表2同。

    表2 小鼠精子畸形試驗結(jié)果Table 2 Sperm deformity test results of mice

    表3 各組大鼠增重及總食物利用率Table 3 The weight increase and food utilization ratio of each rat group

    3 小結(jié)

    本研究結(jié)果表明,欣源通膠囊對2種性別的SPF級昆明種小鼠急性經(jīng)口毒性試驗,累計2次灌胃劑量達20 g/kgBW(相當于人群推薦日攝入量0.03 g/kgBW的667倍),在14 d的觀察期內(nèi)動物未見明顯中毒癥狀和死亡,依據(jù)急性毒性分級評價標準規(guī)定,該受試樣品屬無毒級; 二項致突變試驗(小鼠骨髓細胞微核試驗和精子畸形試驗)結(jié)果均為陰性。將受試樣品按1.5、3.0、6.0 g/kg BW劑量(分別相當于人群推薦日攝入量1.8 g/60 kgBW,即0.03 g/kgBW的50、100、200倍)對SPF級Wistar大鼠連續(xù)給予30 d,動物未見明顯的中毒癥狀和死亡。受試樣品各劑量組大鼠體重、進食量、食物利用率、血液學、血液生化、臟器重量、臟/體比值以及病理組織學等指標與陰性對照組比較,均無顯著性差異,未發(fā)現(xiàn)該受試樣品有明顯的毒性作用。由此表明,欣源通膠囊作為保健食品是安全的[5],可以進行進一步的功能研究。

    表4 各組大鼠血液常規(guī)檢測結(jié)果Table 4 The blood tests results of each rat group

    表5 各組大鼠血液生化檢測結(jié)果(n=10)Table 5 The blood biochemical index of each rat group(n=10)

    [1]鄭建仙.功能性食品[M].北京:中國輕工業(yè)出版社,1997.261~272.

    [2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京:化學工業(yè)出版社,2005.

    [3]劉宏雁,趙 宏.性別和環(huán)境溫度對小鼠急性缺氧耐受性的影響[J].白求恩醫(yī)科大學學報,2000,26(2):123~125.

    [4]中華人民共和國衛(wèi)生部衛(wèi)生法制與監(jiān)督司.保健食品檢驗與評價技術規(guī)范[M].北京:清華同方電子出版社,2003.

    [5]GB15 193.5-94,骨髓微核試驗[S]. 北京:中國標準出版社,1995.

    [6]GB15 193.7-94,小鼠精子畸形試驗[S]. 北京:中國標準出版社,1995.

    [7]張之南.血液病診斷及療效標準(第2版)[M].北京:科學出版社,1998.10~16.

    [8]中華人民共和國衛(wèi)生部.GB15193.1-94,食品安全性評價程序[S].北京:中國標準出版社,1995.

    2009-12-03

    盧 夢(1987-),女,湖北恩施人,研究方向為動物醫(yī)學.

    10.3969/j.issn.1673-1409(S).2010.01.017

    R994.4

    A

    1673-1409(2010)01-S067-04

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