• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    鹽酸左氧氟沙星在大鼠胰腺的藥代動(dòng)力學(xué)研究

    2010-11-24 01:26:03劉德鼎肖和平王卓周佳宋彬楊琳劉瑞黃怡
    中華胰腺病雜志 2010年2期
    關(guān)鍵詞:藥代氧氟沙星探針

    劉德鼎 肖和平 王卓 周佳 宋彬 楊琳 劉瑞 黃怡

    ·論著·

    鹽酸左氧氟沙星在大鼠胰腺的藥代動(dòng)力學(xué)研究

    劉德鼎 肖和平 王卓 周佳 宋彬 楊琳 劉瑞 黃怡

    目的研究鹽酸左氧氟沙星在大鼠胰腺組織的藥代動(dòng)力學(xué)。方法采用微透析技術(shù)對(duì)大鼠胰腺組織和血液進(jìn)行同步取樣,聯(lián)合反相高效液相色譜實(shí)時(shí)檢測(cè)胰腺組織和血液中鹽酸左氧氟沙星的濃度變化,所得藥物濃度數(shù)據(jù)用WinNonlin軟件處理。結(jié)果大鼠血液中的游離左氧氟沙星濃度在給藥后10 min時(shí)最高,為(65.23±12.9) μg/ml,胰腺組織在20 min到達(dá)峰濃度(30.56±3.22) μg/ml,然后持續(xù)下降;給藥后20 min時(shí)胰腺組織的藥物濃度開始高于血清,并持續(xù)至100 min,然后下降,兩者濃度始終保持接近。血液、胰腺的藥時(shí)曲線下面積分別為(2914.38±205.73)min·μg-1·ml-1和(2465.11±258.56)min·μg-1·ml-1。結(jié)論微透析采樣技術(shù)聯(lián)合反相高效液相色譜檢測(cè)方法可以準(zhǔn)確客觀地反映藥物在組織和血液中的藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn),鹽酸左氧氟沙星具有較高的胰腺組織藥物濃度。

    左氧氟沙星; 微透析; 藥代動(dòng)力學(xué); 藥效學(xué); 高效液相色譜法

    胰腺感染是重癥急性胰腺炎(SAP)患者病死的主要原因,約占80%。鹽酸左氧氟沙星是新一代氟喹諾酮類抗菌藥,系氧氟沙星的光學(xué)S-(-)異構(gòu)體,其作用機(jī)制為抑制細(xì)菌拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ的活性,抑制細(xì)菌DNA復(fù)制而起到殺菌作用。它具有較好的臨床藥動(dòng)學(xué)特性、較佳的組織臟器及細(xì)胞滲透性,對(duì)大多數(shù)腸桿菌科細(xì)菌有較強(qiáng)的抗菌活性[1],在急性胰腺炎(AP)并發(fā)感染時(shí)臨床醫(yī)師常經(jīng)驗(yàn)性選用此藥[2]。復(fù)習(xí)文獻(xiàn),僅有環(huán)丙沙星、氟康唑、厄他培南和莫西沙星在胰腺的藥代動(dòng)力學(xué)報(bào)道[3-6],故本實(shí)驗(yàn)同步測(cè)定鹽酸左氧氟沙星在大鼠胰腺和血液中的濃度,觀察其在胰腺組織的藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)。

    材料與方法

    一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和儀器、試劑

    SD大鼠6只,SPF級(jí),體重220~250 g,雄性,第二軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物中心提供。微透析設(shè)備為瑞典CMA公司產(chǎn)品,包括微量泵(CMA402)、微量收集器(CMA820)、1 ml注射器、血管及胰腺探針(CMA/20 PES)。探針內(nèi)透析膜長(zhǎng)度10 mm,直徑0.5 mm,截留分子量100 000。LC-2010AHT高效液相色譜儀為日本島津公司產(chǎn)品,Kromasil C-18柱150 mm×4.6 mm,5μm。流動(dòng)相由0.4%磷酸/三乙胺(pH 3.58)與甲醇(v/v)以70∶30組成,流速1.0 ml/min,柱溫40℃,檢測(cè)波長(zhǎng)295 nm,進(jìn)樣量10 μl。

    試劑包括鹽酸左氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)品,鹽酸左氧氟沙星原料藥(武漢合中生化制造有限公司,純度99%,批號(hào)20090901),戊巴比妥鈉(Sigma公司,純度≥98%,批號(hào)P3761),ACD液(枸櫞酸鈉22 mg/ml,枸櫞酸8 mg/ml,葡萄糖24.5 mg/ml,上海輸血技術(shù)有限公司,批號(hào)09081621B),甲醇(TEDIA,色譜純),超純水,以及分析純級(jí)的三乙胺和磷酸。

    二、探針回收率測(cè)定

    采用反向透析法。大鼠麻醉后固定于37℃保溫墊,取腹正中切口進(jìn)腹,循血管間隙將微透析探針植入胰腺實(shí)質(zhì),并固定關(guān)腹。采用經(jīng)左側(cè)股靜脈途徑將血管探針植入下腔靜脈[7]。探針植入成功后,胰腺探針灌注Ringer液;血管探針灌注ACD抗凝液,以防止探針透析膜部發(fā)生凝血[8]。經(jīng)過術(shù)后2 h穩(wěn)定期,更換各含鹽酸左氧氟沙星(中國藥品生物制品檢定所,純度99.8%)1 μg/ml的Ringer和ACD液,以2 μl/min的恒定速率分別對(duì)胰腺、血管進(jìn)行灌流。灌注液(Cperf)和透析液(Cdial)中的藥物濃度均用HPLC測(cè)定。探針的在體回收率(Rdial)用下列公式計(jì)算:Rdial=(Cperf-Cdial)/Cperf。體內(nèi)實(shí)際藥物濃度(Cu)可由體內(nèi)連續(xù)監(jiān)測(cè)所得透析液濃度(Cm)經(jīng)公式Cu=Cm/Rdial轉(zhuǎn)化獲得。

    三、藥代動(dòng)力學(xué)分析

    鹽酸左氧氟沙星模擬人體常用給藥劑量(400 mg/d),大鼠給藥量為42 mg/kg體重[9]。經(jīng)大鼠尾靜脈15 min內(nèi)推注完畢,隨即開始收集透析樣品,前240 min每間隔10 min收集一次樣品,以后每20 min收集一次樣品,至360 min時(shí)結(jié)束,同步監(jiān)測(cè)給藥后360 min內(nèi)的大鼠血液及胰腺藥物濃度變化。

    使用Phoenix WinNonlin(Pharsight Corporation,Version 6.1,2009)軟件以非房室模型法獲得藥動(dòng)學(xué)數(shù)據(jù)。根據(jù)測(cè)量值計(jì)算曲線下面積(AUC),AUC=AUC(0-t)+AUC(t-inf)=AUC(0-t)+Clast/λz ;一階矩曲線下面積(AUMC),AUMC=AUM Clast+(tlast×Clast/λz )+Clast/(λz )2;平均駐留時(shí)間(MRT),MRT=AUMC/AUC。其中λz 為對(duì)數(shù)藥物濃度-時(shí)間曲線尾段指數(shù)段的斜率,Clast和tlast為最后(360 min時(shí))的濃度和時(shí)間。血液與胰腺的藥物分布系數(shù)用AUC胰腺/AUC血液計(jì)算,鹽酸左氧氟沙星對(duì)血胰屏障的通透率(penetration ratio,PR)用C胰腺/C血液計(jì)算。

    結(jié) 果

    一、鹽酸左氧氟沙星的色譜條件考查

    在本實(shí)驗(yàn)條件下,透析液中無內(nèi)源性干擾物質(zhì),左氧氟沙星峰形良好,分離度良好,保留時(shí)間為3.58 min。

    準(zhǔn)確稱取鹽酸左氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)品,加超純水配成系列溶液,平行操作3份,取10 μl進(jìn)樣,HPLC測(cè)定并記錄峰面積,其最低定量限為0.0304 μg/ml。以左氧氟沙星峰面積(Y)對(duì)濃度(X)進(jìn)行線性回歸,所得標(biāo)準(zhǔn)曲線為:Y=54680.4X-12610.8(r2=0.9998),表明透析液中左氧氟沙星在0.0304~125 μg/ml的濃度范圍內(nèi)線性良好。

    取左氧氟沙星低、中、高3個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液,在1 d內(nèi)連續(xù)測(cè)定6次,日內(nèi)精密度(RSD)分別為0.62%、6.45%、3.18%;連續(xù)3 d測(cè)定,各濃度的日間精密度分別為0.87%、6.28%、5.55%。精密度和準(zhǔn)確度均符合生物樣品測(cè)定要求。

    二、鹽酸左氧氟沙星的藥代動(dòng)力學(xué)

    6只大鼠血液和胰腺探針的平均回收率分別為(58±2)%和(34±1)%。1只大鼠胰腺探針的回收率較低,僅為27%,其余的回收率在34%~37%。樣品收集完成后,所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物行剖腹探查,未發(fā)現(xiàn)胰腺出血及異常液體積聚。后將探針留置于胰腺內(nèi)行石蠟切片,證實(shí)探針植入部位為胰腺實(shí)質(zhì)。

    非房室模型參數(shù)詳見表1。血液中鹽酸左氧氟沙星濃度在給藥后10 min時(shí)最高,Cmax為(65.23±12.9) μg/ml,個(gè)體最高值為104.76 μg/ml;胰腺中藥物在20 min時(shí)達(dá)峰值,Cmax為(30.56±3.22) μg/ml,然后持續(xù)下降。20 min時(shí)胰腺組織的藥物濃度開始高于血清,并持續(xù)至100 min,期間9個(gè)取樣點(diǎn)的血胰屏障通透率(PR)=1.09±0.1,最高為1.27;從110 min起胰腺藥物濃度低于血清,直至取樣結(jié)束,期間20個(gè)取樣點(diǎn)的PR=0.87±0.05,最低值為0.79。血液、胰腺的藥時(shí)曲線下面積AUC(0-inf)分別為(2914.38±205.73)min·μg-1·ml-1和(2465.11±258.56)min·μg-1·ml-1。其中外推法估算的AUC(t-inf)占AUC(0-inf)的比值在血液為(8.86±0.03)%,胰腺為(9.52±0.04)%。血液與胰腺的藥物分布系數(shù)為0.85±0.35。尾靜脈推注鹽酸左氧氟沙星后各時(shí)間點(diǎn)胰腺、血清中藥物濃度對(duì)數(shù)圖見圖1,藥物對(duì)血胰屏障通透率-時(shí)間曲線見圖2。

    參 數(shù)血 液胰 腺t1/2(min)125.23±43.33136.73±44.77Cmax(μg/ml)65.23±12.930.56±3.22tmax(min) 1020AUC0-inf(min·μg-1·ml-1)2914.38±205.732465.11±258.56AUC0-t(min·μg-1·ml-1)2645.07±179.652213.14±221.67MRT(min)132.87±31.5147.01±38.24

    注:Cmax和tmax分別為藥物在組織中的峰濃度和到達(dá)峰濃度時(shí)間;AUC0-inf、AUC0-t分別表示曲線下總面積和截止至終末觀察點(diǎn)時(shí)的曲線下面積;MRT為藥物分子在體內(nèi)的平均駐留時(shí)間

    討 論

    以往使用的胰腺藥代動(dòng)力學(xué)研究方法,包括胰腺組織勻漿法、胰瘺管和內(nèi)鏡導(dǎo)管法均有較大缺陷,所獲數(shù)據(jù)不能準(zhǔn)確反映胰腺組織間液游離態(tài)藥物代謝情況[10]。近來雖有一些非侵襲性手段,如PET(positron emission topography)和NMR(nuclear magnetic resonance)的出現(xiàn)并應(yīng)用于胰腺藥代動(dòng)力學(xué)研究[11],但其科研成本極高,且依然無法對(duì)細(xì)胞內(nèi)與組織間液進(jìn)行精確定位。微透析是日漸興起的一種新型生物采樣技術(shù),主要利用物質(zhì)沿濃度梯度擴(kuò)散和半透膜對(duì)小分子化合物具有通透性的原理,對(duì)細(xì)胞外液(ECF)的物質(zhì)進(jìn)行采樣,可將胰腺和血漿中蛋白結(jié)合態(tài)藥物截留于探針透析膜外,所測(cè)樣品為游離態(tài)藥物濃度,結(jié)合探針透析率,可計(jì)算出同一個(gè)體靶組織細(xì)胞外液密集時(shí)間點(diǎn)的對(duì)應(yīng)藥物濃度,具有良好的時(shí)間和空間分辨性,是進(jìn)行藥動(dòng)學(xué)研究的良好工具。

    血液微透析技術(shù)多采用經(jīng)頸靜脈向右心房插管法植入探針。本實(shí)驗(yàn)采用經(jīng)左側(cè)股靜脈植入下腔靜脈,回收率平均為58%,最高達(dá)65%,高于頸靜脈探針植入法所獲得的回收率[12],且回收率較穩(wěn)定,個(gè)體間差異小。這是因?yàn)椋?1)下腔靜脈的血液流動(dòng)快,可避免血流速度慢對(duì)探針回收產(chǎn)生的影響,更真實(shí)地反映血藥濃度;(2)能夠避免對(duì)重要臟器血供的干擾;(3)下腔靜脈具備理想的直行長(zhǎng)度,允許透析部較長(zhǎng)的探針充分發(fā)揮透析功能,提高探針回收率。

    圖1 10~360 min內(nèi)各采樣點(diǎn)的血液和胰腺濃度對(duì)數(shù)圖

    圖2各采樣點(diǎn)的鹽酸左氧氟沙星對(duì)大鼠血胰屏障通透率(PR)

    在胰腺微透析采樣中,動(dòng)物個(gè)體差異對(duì)探針回收率造成的影響并不顯著。因?yàn)楸緦?shí)驗(yàn)所使用的探針為商品化CMA探針,探針物理性質(zhì)穩(wěn)定,胰腺微透析所選取的部位較為固定,均為胃底靠近脾臟部,探針植入點(diǎn)周圍主干血管及毛細(xì)血管解剖分布基本相同,故微循環(huán)對(duì)藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)在不同個(gè)體間相似,所測(cè)探針回收率在個(gè)體間差異較小。

    鹽酸左氧氟沙星的AUC0-inf呈劑量依賴性[13],本實(shí)驗(yàn)大鼠所用藥物劑量相當(dāng)于人體給藥400 mg/d,血液到胰腺的藥物分布系數(shù)為0.85±0.35,表明鹽酸左氧氟沙星具有較高的胰腺組織穿透力,這與血胰屏障多脂類成分的結(jié)構(gòu)及左氧氟沙星脂溶性強(qiáng)的特點(diǎn)有關(guān)。分析藥物在胰腺組織的分布過程,靜脈給藥后20 min,胰腺組織的藥物濃度開始高于血清,并持續(xù)至100 min, PR=1.09±0.1,提示血胰屏障中可能存在藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體。胰腺的左氧氟沙星分布是由被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)與主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)共同調(diào)控,Ito等[14]曾在腎臟中發(fā)現(xiàn)左氧氟沙星的主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)系。藥物在胰腺組織的清除率及平均駐留時(shí)間與血液基本一致,表明兩者代謝消除過程基本相似。從110 min至取樣結(jié)束,胰腺藥物濃度低于血清,PR=0.87±0.05,無明顯差異,可能與藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)清除在兩個(gè)方向達(dá)到飽和有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)的PR數(shù)據(jù)均低于馬珂等[15]的報(bào)道,而血漿中的藥物半衰期無明顯差異。我們認(rèn)為,除大鼠個(gè)體差異影響,本文采用微透析技術(shù)所測(cè)對(duì)象為組織間液游離態(tài)藥物濃度,不包括蛋白結(jié)合態(tài)藥物及細(xì)胞內(nèi)藥物,因此可能低于組織勻漿法所獲的數(shù)據(jù)。

    對(duì)于胰腺抗感染治療,病原學(xué)是抗菌藥物選擇的重要依據(jù)。不同病因引發(fā)胰腺感染的病原學(xué)特點(diǎn)并不相同,如非手術(shù)治療中革蘭陰性桿菌是胰腺感染的主要病原體,包括大腸桿菌、克雷伯菌屬及厭氧菌等,而膽源性胰腺炎合并膽道梗阻的患者,銅綠假單胞菌、厭氧類桿菌、腸球菌等為主要致病菌。張菁等[16]報(bào)道,左氧氟沙星對(duì)溶血性鏈球菌、卡他莫拉菌具有高度抗菌活性,但甲氧西林耐藥金葡菌(MRSA)、大腸埃希菌、鮑曼不動(dòng)桿菌及大多數(shù)腸球菌對(duì)左氧氟沙星呈現(xiàn)耐藥。一般認(rèn)為氟喹諾酮類藥物的Cmax/MIC達(dá)8~10時(shí),可獲得良好的臨床和細(xì)菌學(xué)療效,并可減少細(xì)菌對(duì)該類藥物耐藥性的產(chǎn)生,但治療嚴(yán)重革蘭陰性桿菌感染,AUC0-24 h/MIC90應(yīng)為100~125。故在胰腺抗感染治療中,雖然鹽酸左氧氟沙星具有較高的胰腺組織穿透力,但并非對(duì)所有菌群都能產(chǎn)生良好的抗菌作用,提高給藥劑量是增強(qiáng)療效、減少細(xì)菌耐藥的方法,但仍需分辨病因,依據(jù)病原學(xué)特點(diǎn)有針對(duì)性的選擇抗感染藥物。

    [1] 梁錦芬,江秀麗,蔡萍,等.左氧氟沙星的臨床應(yīng)用及不良反應(yīng).中華臨床醫(yī)學(xué)研究雜志,2006,12:634-635.

    [2] 葉華進(jìn),吳小彤.急性胰腺炎治療中抗菌藥物使用分析.醫(yī)學(xué)研究雜志,2008,37:90-92.

    [3] Büchler M,Malfertheiner P,Frieb H,et al. Human pancreatic tissue concentration of bactericidal antibiotics. Gastroenterology,1992,103:1902-1908.

    [4] Bassi C,Pederzoli P,Vesentini S,et al. Behavior of antibiotics during human necrotizing pancreatitis.Antimicrob Agents Chemother,1994,38:830-836.

    [5] Wittau M,Wagner E,Kaever V,et al.Intraabdominal tissue concentration of ertapenem.J Antimicrob Chemother,2006,57:312-316.

    [6] Wacke R,F?rster S,Adam U,et al.Penetration of moxifloxacin into the human pancreas following a single intravenous or oral dose.J Antimicrob Chemother,2006,58:994-999.

    [7] Evrard PA,Deridder G,Verbeeck RK.Intravenous microdialysis in the mouse and the rat:development and pharmacokinetic application of a new probe.Pharm Res,1996,13:12-17.

    [8] Wu JW,Tsai TH.Effect of silibinin on the pharmacokinetics of pyrazinamide and pyrazinoic acid in rats.Drug Metab Dispos,2007,35:1603-1610.

    [9] Murillo O,Doménech A,Garcia A,et al.Efficacy of high dose of levofloxacin in experimental foreigh-body infection by methicillin-susceptible staphylococcus aureus.Antimicrob Agents Chemother,2006,50:4011-4017.

    [10] 王剛,孫備,姜洪池.血胰屏障及其臨床意義.中國實(shí)用外科雜志,2008,28:389-391.

    [11] Fischman AJ,Babich JW,Bonab AA,et al.Pharmacokinetics of [18F] trovafloxacin in healthy human subjects studied with positron emission tomography.Antimicrob Agents Chemother,1998,42:2048-2054.

    [12] Marchand S,Frasca D,Dahyot-Fizelier C,et al.Lung microdialysis study of levofloxacin in rats following intravenous infusion at steady state.Antimicrob Agents Chemother,2008,52:3074-3077.

    [13] Destache CJ,Pakiz CB,Larsen C,et al.Cerebrospinal fluid penetration and pharmacokinetics of levofloxacin in an experimental rabbit meningitis model.J Antimicrob Chemother,2001,47:611-615.

    [14] Ito T,Yano I,Masuda S,et al.Distribution characteristics of levofloxacin and grepafloxacin in rat kidney.Pharm Res,1999,16:534-539.

    [15] 馬珂,祁金文,俞佳,等.左旋氧氟沙星對(duì)大鼠血胰屏障的通透性,中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志,2002,19:237-239.

    [16] 張菁,郁繼誠,施耀國,等.左氧氟沙星藥代動(dòng)力學(xué)/藥效學(xué)研究,中華醫(yī)學(xué)雜志,2005,85:1926-1932.

    2009-11-26)

    (本文編輯:屠振興)

    Pharmacokineticsoflevofloxacininratpancreas

    LIUDe-ding,XIAOHe-ping,WANGZhuo,ZHOUJia,SONGBin,YANGLin,LIURui,HUANGYi.

    DepartmentofGeneralSurgery,ChanghaiHospital,SecondMilitaryMedicalUniversity,Shanghai200433,China

    HUANGYi,Email:huangliur@163.com,LIURui,Email:huangliur@163.com

    ObjectiveTo investigate the pharmacokinetics of levofloxacin in rat′s pancreatic tissue.MethodsPancreatic tissue and blood were sampled in vivo by microdialysis simultaneously. The concentrations of levofloxacin in both blood and tissues were measured by high performance liquid chromatography. All date were analyzed by WinNonlin software.ResultsThe maximum concentration of free levofloxacin in blood and pancreatic tissue were (65.23±12.9) μg/ml at 10min and (30.56±3.22) μg/ml at 20 min, respectively, then both continuously decreased. Concentration of free levofloxacin in pancreatic tissue was higher than that in blood from 20min to 100min, then returned to similar level. The area under the concentration curve (AUC) of unbound levofloxacin was (2465.11±258.56) min·μg-1·ml-1in pancreas, and (2914.38±205.73) min·μg-1·ml-1in blood.ConclusionsMicrodialysis with reversed phase high performance liquid chromatography established in this essay could be used to determine the pharmacokinetics of levofloxacin objectively. High concentration of levofloxacin in pancreatic tissue and blood was observed.

    Levofloxacin; Microdialysis; Pharmacokinetics; Pharmacodynamics; High performance liquid chromatography

    10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2010.02.007

    國家科技重大專項(xiàng)《復(fù)發(fā)性結(jié)核病治療的研究》(2008ZX10003-015)

    200433 上海,第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長(zhǎng)海醫(yī)院普外科(劉德鼎、劉瑞、宋彬、楊琳),呼吸內(nèi)科(黃怡),藥學(xué)部(王卓、周佳);上海市肺科醫(yī)院(肖和平)

    黃怡,Email:huangliur@163.com;劉瑞,Email:huangliur@163.com

    猜你喜歡
    藥代氧氟沙星探針
    多肽類藥物藥代動(dòng)力學(xué)研究進(jìn)展
    化工管理(2022年14期)2022-12-02 11:44:48
    依托咪酯在不同程度燒傷患者體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)
    “醫(yī)藥國17條”出臺(tái) 百萬藥代至十字路口
    多通道Taqman-探針熒光定量PCR鑒定MRSA方法的建立
    BOPIM-dma作為BSA Site Ⅰ特異性探針的研究及其應(yīng)用
    透射電子顯微鏡中的掃描探針裝置
    左氧氟沙星致癲癇持續(xù)狀態(tài)1例
    鹽酸左氧氟沙星治療盆腔炎的療效觀察
    左氧氟沙星及莫西沙星引起神經(jīng)毒性1例
    清肺湯聯(lián)合左氧氟沙星治療老年肺部感染40例
    婷婷色综合www| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 女人久久www免费人成看片| 99国产精品免费福利视频| 在线播放无遮挡| 国产伦理片在线播放av一区| 十八禁网站网址无遮挡| 久久久久久久久久成人| 成年人免费黄色播放视频| 18+在线观看网站| 十八禁网站网址无遮挡| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产有黄有色有爽视频| 精品人妻偷拍中文字幕| 久久免费观看电影| 国产欧美亚洲国产| 2022亚洲国产成人精品| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 成年人午夜在线观看视频| 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产精品国产av在线观看| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 999精品在线视频| 日韩欧美一区视频在线观看| 亚洲精品亚洲一区二区| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 亚洲熟女精品中文字幕| 久久韩国三级中文字幕| 18禁观看日本| 国产精品一区二区在线观看99| 哪个播放器可以免费观看大片| 欧美少妇被猛烈插入视频| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 亚洲av成人精品一区久久| 精品国产露脸久久av麻豆| 亚洲国产av新网站| 男男h啪啪无遮挡| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 亚洲精品一二三| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 十八禁高潮呻吟视频| 国产免费现黄频在线看| 美女主播在线视频| 美女内射精品一级片tv| 国产一区有黄有色的免费视频| 大陆偷拍与自拍| 精品久久久久久电影网| 免费大片18禁| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 亚洲三级黄色毛片| 久久99一区二区三区| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 国模一区二区三区四区视频| 老熟女久久久| 日本黄大片高清| 大码成人一级视频| 水蜜桃什么品种好| 在线精品无人区一区二区三| 又大又黄又爽视频免费| 国产免费一区二区三区四区乱码| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 免费高清在线观看日韩| 久久久久视频综合| 美女国产高潮福利片在线看| 国产午夜精品一二区理论片| 免费人妻精品一区二区三区视频| av国产精品久久久久影院| 国产视频内射| 妹子高潮喷水视频| 久久久久久久久久久丰满| 亚洲人成网站在线观看播放| 亚洲精品视频女| 丰满乱子伦码专区| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产免费又黄又爽又色| 久久久久久久久久久久大奶| 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲国产成人一精品久久久| 国产av精品麻豆| 七月丁香在线播放| 下体分泌物呈黄色| 欧美激情 高清一区二区三区| 一区二区三区精品91| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 99热这里只有是精品在线观看| 中国美白少妇内射xxxbb| 国产精品成人在线| av卡一久久| 新久久久久国产一级毛片| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 色吧在线观看| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国产日韩欧美在线精品| 视频在线观看一区二区三区| 国产av国产精品国产| 免费黄网站久久成人精品| 精品酒店卫生间| 亚洲怡红院男人天堂| 国产免费一区二区三区四区乱码| 99久久精品一区二区三区| 最新的欧美精品一区二区| 18禁在线播放成人免费| 久久精品国产亚洲av天美| 免费av不卡在线播放| 99久久中文字幕三级久久日本| 亚洲精品国产av成人精品| 国产色婷婷99| av播播在线观看一区| 亚洲精品久久午夜乱码| 久久久久久人妻| 熟女电影av网| 激情五月婷婷亚洲| 啦啦啦啦在线视频资源| 国产av精品麻豆| 一级片'在线观看视频| 水蜜桃什么品种好| av有码第一页| 3wmmmm亚洲av在线观看| 3wmmmm亚洲av在线观看| 伦精品一区二区三区| 免费av不卡在线播放| 国产精品 国内视频| 欧美日韩在线观看h| 夫妻午夜视频| 国产片特级美女逼逼视频| 高清毛片免费看| 久久久久久久久久成人| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 成人手机av| 777米奇影视久久| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 免费大片18禁| 日日摸夜夜添夜夜爱| 国产在视频线精品| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 免费黄网站久久成人精品| kizo精华| 亚洲第一区二区三区不卡| 成人国产麻豆网| 国产午夜精品一二区理论片| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 日本av免费视频播放| 一本色道久久久久久精品综合| 制服人妻中文乱码| a级毛片黄视频| 人妻 亚洲 视频| 久久99蜜桃精品久久| 久久韩国三级中文字幕| 人妻 亚洲 视频| 欧美日韩精品成人综合77777| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 久久这里有精品视频免费| av播播在线观看一区| 毛片一级片免费看久久久久| 国产av一区二区精品久久| 国产精品无大码| 亚洲成人手机| 熟女av电影| 久久久久精品久久久久真实原创| 在现免费观看毛片| 人妻一区二区av| 亚洲国产av新网站| 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产成人精品在线电影| 国产精品一区二区在线不卡| 国产色爽女视频免费观看| 国产黄色免费在线视频| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 中国美白少妇内射xxxbb| 亚洲怡红院男人天堂| 亚洲国产色片| 五月开心婷婷网| 国产成人精品婷婷| 中文字幕免费在线视频6| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| av在线播放精品| 老女人水多毛片| 人成视频在线观看免费观看| 嫩草影院入口| 精品一品国产午夜福利视频| 精品国产一区二区久久| 欧美xxxx性猛交bbbb| 大香蕉久久网| 搡老乐熟女国产| 亚洲av在线观看美女高潮| 91久久精品电影网| 99久久综合免费| 久久婷婷青草| 国产成人91sexporn| 午夜激情福利司机影院| 九九在线视频观看精品| 国产综合精华液| 一个人免费看片子| 日本午夜av视频| 国产精品久久久久成人av| 尾随美女入室| 亚洲内射少妇av| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 这个男人来自地球电影免费观看 | 赤兔流量卡办理| 看非洲黑人一级黄片| 亚洲av免费高清在线观看| 欧美+日韩+精品| 久久久久久久久大av| 99热全是精品| 两个人的视频大全免费| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 久久久久久久久久成人| 2018国产大陆天天弄谢| 亚洲国产成人一精品久久久| 免费高清在线观看视频在线观看| 亚洲色图综合在线观看| 欧美成人午夜免费资源| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 精品久久久久久久久亚洲| 亚洲国产精品专区欧美| 最近中文字幕高清免费大全6| 狂野欧美激情性bbbbbb| 精品一区二区三卡| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 日本wwww免费看| 精品国产国语对白av| 丝瓜视频免费看黄片| 女人久久www免费人成看片| 少妇人妻 视频| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 国产乱人偷精品视频| 黑丝袜美女国产一区| 久久久久久伊人网av| 美女cb高潮喷水在线观看| 亚洲性久久影院| 精品午夜福利在线看| 国产一级毛片在线| 母亲3免费完整高清在线观看 | 国产精品一国产av| 在线免费观看不下载黄p国产| 色网站视频免费| 青青草视频在线视频观看| 久久久久久久亚洲中文字幕| 亚洲美女视频黄频| 久热久热在线精品观看| 这个男人来自地球电影免费观看 | 久久99一区二区三区| 久久 成人 亚洲| 亚洲人成网站在线观看播放| 啦啦啦在线观看免费高清www| 亚洲av不卡在线观看| 久久免费观看电影| 色婷婷久久久亚洲欧美| .国产精品久久| xxx大片免费视频| 亚洲国产精品成人久久小说| 国产毛片在线视频| 亚洲熟女精品中文字幕| 国产片内射在线| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 久久久久久久久久成人| 亚洲av成人精品一二三区| 午夜免费鲁丝| 免费看av在线观看网站| 久久久久国产网址| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 午夜福利视频精品| 乱人伦中国视频| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 各种免费的搞黄视频| a级毛片黄视频| 日韩欧美一区视频在线观看| 亚洲精品视频女| 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 欧美日韩综合久久久久久| 人人澡人人妻人| 成年女人在线观看亚洲视频| 亚洲av福利一区| 99久久人妻综合| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| av不卡在线播放| 亚洲经典国产精华液单| 91精品国产国语对白视频| 午夜福利,免费看| 一级a做视频免费观看| 18禁观看日本| 97在线人人人人妻| 91aial.com中文字幕在线观看| 久久久久精品性色| 国产免费福利视频在线观看| 午夜老司机福利剧场| 成年人免费黄色播放视频| 国产高清国产精品国产三级| av视频免费观看在线观看| 日韩大片免费观看网站| 丁香六月天网| 一区二区av电影网| 亚洲美女搞黄在线观看| 精品久久久久久久久亚洲| 人妻系列 视频| 男的添女的下面高潮视频| 最近手机中文字幕大全| 国产熟女欧美一区二区| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 波野结衣二区三区在线| av卡一久久| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 久久青草综合色| kizo精华| 久久午夜综合久久蜜桃| 91精品一卡2卡3卡4卡| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 伊人久久国产一区二区| 精品久久久久久电影网| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 26uuu在线亚洲综合色| 久久99热6这里只有精品| 交换朋友夫妻互换小说| 女性被躁到高潮视频| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 久久精品久久精品一区二区三区| 亚洲国产日韩一区二区| 亚洲国产精品一区三区| 国产伦理片在线播放av一区| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 亚洲国产精品专区欧美| 亚洲少妇的诱惑av| 99热网站在线观看| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 久久精品国产自在天天线| 性色av一级| 亚洲精品自拍成人| 最近的中文字幕免费完整| 两个人的视频大全免费| 国产精品久久久久久精品电影小说| 久久人妻熟女aⅴ| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 久久99热这里只频精品6学生| 色5月婷婷丁香| 久久久久人妻精品一区果冻| 人妻一区二区av| 青春草亚洲视频在线观看| 午夜免费男女啪啪视频观看| 中国国产av一级| 亚洲人成网站在线观看播放| 中文字幕最新亚洲高清| 色5月婷婷丁香| 青春草亚洲视频在线观看| 午夜免费男女啪啪视频观看| 久久ye,这里只有精品| 赤兔流量卡办理| 欧美少妇被猛烈插入视频| 久久这里有精品视频免费| 国产男女内射视频| 国产av一区二区精品久久| 色哟哟·www| 黄色欧美视频在线观看| 有码 亚洲区| 久久婷婷青草| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 考比视频在线观看| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 爱豆传媒免费全集在线观看| 国产色婷婷99| 欧美另类一区| 国产毛片在线视频| av国产精品久久久久影院| 不卡视频在线观看欧美| 亚洲,一卡二卡三卡| 国产成人freesex在线| 日本爱情动作片www.在线观看| 亚洲在久久综合| 精品少妇久久久久久888优播| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产成人免费无遮挡视频| 伦理电影大哥的女人| 男男h啪啪无遮挡| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 亚洲成人手机| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 色婷婷久久久亚洲欧美| 性高湖久久久久久久久免费观看| 亚洲欧洲日产国产| 欧美亚洲日本最大视频资源| 九九在线视频观看精品| 男女高潮啪啪啪动态图| 99热这里只有精品一区| 午夜福利网站1000一区二区三区| 免费大片18禁| 午夜影院在线不卡| 69精品国产乱码久久久| 久久久久网色| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 青春草国产在线视频| 99精国产麻豆久久婷婷| 黑人欧美特级aaaaaa片| 免费黄频网站在线观看国产| 大香蕉久久成人网| 久久国内精品自在自线图片| 国产精品99久久久久久久久| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 欧美亚洲日本最大视频资源| 久久99一区二区三区| 卡戴珊不雅视频在线播放| a级片在线免费高清观看视频| 99久久中文字幕三级久久日本| 免费黄频网站在线观看国产| 国产精品免费大片| 亚洲欧美成人精品一区二区| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 久久鲁丝午夜福利片| 久久久久久久精品精品| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 欧美xxⅹ黑人| 亚洲精品成人av观看孕妇| 街头女战士在线观看网站| 蜜桃国产av成人99| 亚洲av成人精品一二三区| av在线app专区| xxx大片免费视频| 一区二区日韩欧美中文字幕 | 最近中文字幕高清免费大全6| 少妇高潮的动态图| av国产久精品久网站免费入址| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 国产老妇伦熟女老妇高清| 日韩一本色道免费dvd| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 哪个播放器可以免费观看大片| 自线自在国产av| 成人国语在线视频| 赤兔流量卡办理| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 九草在线视频观看| 美女cb高潮喷水在线观看| 亚洲av欧美aⅴ国产| 国产精品国产三级国产专区5o| 国产 一区精品| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 国产伦精品一区二区三区视频9| 国产深夜福利视频在线观看| 亚洲国产av影院在线观看| 久久久久久久国产电影| 国产熟女午夜一区二区三区 | 天堂8中文在线网| 国产精品不卡视频一区二区| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 五月玫瑰六月丁香| 最近中文字幕高清免费大全6| 天天影视国产精品| 亚州av有码| 国产色爽女视频免费观看| 我的女老师完整版在线观看| 十八禁高潮呻吟视频| 亚洲av成人精品一二三区| 秋霞在线观看毛片| 久久久亚洲精品成人影院| 日本黄色片子视频| 国产黄色免费在线视频| 亚洲国产精品成人久久小说| 91久久精品电影网| 男男h啪啪无遮挡| 伊人久久精品亚洲午夜| www.色视频.com| 99热这里只有精品一区| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 午夜激情av网站| 天堂中文最新版在线下载| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 九草在线视频观看| 青春草亚洲视频在线观看| 少妇的逼水好多| 男女国产视频网站| 两个人免费观看高清视频| 国产精品三级大全| 秋霞伦理黄片| 国产精品三级大全| 美女中出高潮动态图| 七月丁香在线播放| 久久精品国产亚洲av天美| 少妇人妻 视频| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 美女主播在线视频| 飞空精品影院首页| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 99热这里只有精品一区| 日韩精品有码人妻一区| 97在线人人人人妻| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 在线观看人妻少妇| 精品久久久久久电影网| 国产乱人偷精品视频| av免费观看日本| 亚洲成人一二三区av| 国产永久视频网站| 我要看黄色一级片免费的| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 97在线视频观看| 亚洲第一av免费看| 日韩制服骚丝袜av| 亚洲av在线观看美女高潮| 桃花免费在线播放| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 桃花免费在线播放| 一级爰片在线观看| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| videos熟女内射| 亚州av有码| 丝袜喷水一区| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 熟妇人妻不卡中文字幕| 日韩中字成人| 亚洲人成网站在线播| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 一个人免费看片子| 99热网站在线观看| 91成人精品电影| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 国产色婷婷99| a级毛片免费高清观看在线播放| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 91精品三级在线观看| 欧美国产精品一级二级三级| 亚洲人成网站在线观看播放| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产精品久久久久久精品古装| 永久免费av网站大全| 亚洲国产最新在线播放| 黄色配什么色好看| 最近最新中文字幕免费大全7| 国产成人精品一,二区| 国产男人的电影天堂91| 日韩一区二区视频免费看| 成人影院久久| 91精品一卡2卡3卡4卡| 在线观看美女被高潮喷水网站| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 日本wwww免费看| 国产69精品久久久久777片| 美女主播在线视频| 欧美丝袜亚洲另类| 久久久久久久久久久久大奶| 国产片特级美女逼逼视频| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 街头女战士在线观看网站| 美女视频免费永久观看网站| 亚洲av欧美aⅴ国产| 在线免费观看不下载黄p国产| 欧美日韩视频精品一区| 国产在线一区二区三区精| 久久久久视频综合| 少妇的逼水好多| 久久久久久久精品精品| 国产高清不卡午夜福利| 在线 av 中文字幕| 国产永久视频网站| 另类精品久久| 少妇人妻 视频| 亚洲国产成人一精品久久久| 又大又黄又爽视频免费| 丝袜喷水一区| 欧美精品国产亚洲| 精品视频人人做人人爽| 久久久精品94久久精品| 国产精品不卡视频一区二区| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 乱人伦中国视频| 又大又黄又爽视频免费| 18禁动态无遮挡网站| 最黄视频免费看| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 91国产中文字幕| 欧美成人精品欧美一级黄| 亚洲伊人久久精品综合| 日韩电影二区| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 免费av不卡在线播放| 在线 av 中文字幕| 国产精品偷伦视频观看了| 乱人伦中国视频| 黑人猛操日本美女一级片| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 毛片一级片免费看久久久久| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 久久久久网色| 边亲边吃奶的免费视频| 秋霞在线观看毛片| 男人操女人黄网站| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 一级毛片 在线播放| 国产免费又黄又爽又色| 成人影院久久| 黄色一级大片看看| 亚洲精品国产av成人精品| 天天操日日干夜夜撸| 麻豆乱淫一区二区| 人人妻人人澡人人看| 中文字幕久久专区| 91久久精品国产一区二区三区| 欧美激情国产日韩精品一区| 国产免费一区二区三区四区乱码| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 99热全是精品| 久久久久精品久久久久真实原创| 日本91视频免费播放| 爱豆传媒免费全集在线观看| 国产免费又黄又爽又色| 精品午夜福利在线看|