Akt和磷酸化Akt1在胰腺癌組織中的表達(dá)及意義

劉俊 裘正軍 江弢 黃陳 孫晶 孫紅成 鐘福全 金宇彪 胡宏慧

·論著·

Akt和磷酸化Akt1在胰腺癌組織中的表達(dá)及意義

劉俊 裘正軍 江弢 黃陳 孫晶 孫紅成 鐘福全 金宇彪 胡宏慧

目的了解Akt和磷酸化Akt1(p-Akt1)蛋白在胰腺癌組織中的表達(dá)情況，探討其臨床意義。方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)74例胰腺癌組織、10例正常胰腺組織中Akt和p-Akt1蛋白的表達(dá)，并分析其與臨床病理學(xué)特征及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果Akt和p-Akt1蛋白在胰腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為87.8%和83.8%，而正常胰腺組織均陰性表達(dá)，相差非常顯著(Plt;0.05)。癌組織中Akt和p-Akt1蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)性(r=0.274,P=0.018)。Akt和p-Akt1蛋白表達(dá)與年齡、性別、腫瘤生長(zhǎng)部位、腫瘤大小、病理學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期及神經(jīng)浸潤(rùn)均無(wú)顯著相關(guān)性(Pgt;0.05)，但p-Akt1蛋白高表達(dá)與病理學(xué)T分期及TNM分期相關(guān)(P=0.002)。Akt和p-Akt1蛋白高表達(dá)者的中位生存期分別為(16.0±5.7)個(gè)月和(23.0±5.5)個(gè)月，明顯高于低表達(dá)者的(9.3±0.2)個(gè)月和(11.1±1.8)個(gè)月(P分別為0.007和0.004)。結(jié)論胰腺癌組織中p-Akt1蛋白表達(dá)的程度與良性預(yù)后有關(guān)，檢測(cè)胰腺癌中p-Akt1蛋白的表達(dá)具有一定的臨床意義。

胰腺腫瘤； 免疫組織化學(xué)； 蛋白激酶類； Akt； p-Akt1； 預(yù)后

Akt是一個(gè)絲/蘇氨酸激酶，可被很多生長(zhǎng)因子激活，進(jìn)而通過(guò)抑制凋亡和調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖在腫瘤的發(fā)生以及耐藥中起著重要作用[1-2]。Akt有三個(gè)亞型(Akt1、Akt2和Akt3)，在腫瘤中的作用不同[3]。磷酸化Akt(p-Akt)為其活化狀態(tài)，在胰腺癌的作用存在爭(zhēng)議[4-5]。為此，本研究檢測(cè)胰腺癌組織和正常胰腺組織中Akt和p-Akt1蛋白的表達(dá)，分析其與臨床病理學(xué)特征及預(yù)后的關(guān)系。

材料與方法

一、病例資料

收集上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院1993年8月至2009年1月手術(shù)切除的胰腺癌標(biāo)本74例，其中男50例，女24例，平均年齡(64±10)歲(40～80歲)。另取10例正常胰腺組織標(biāo)本作為對(duì)照。通過(guò)電話和直接上門(mén)相結(jié)合的方式進(jìn)行隨訪。

二、Akt和p-Akt1蛋白表達(dá)的檢測(cè)

采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)，嚴(yán)格按試劑盒(上海明睿公司)說(shuō)明書(shū)操作。參考Shah等[6]的標(biāo)準(zhǔn)，隨機(jī)選擇5個(gè)高倍視野，每視野計(jì)數(shù)500個(gè)細(xì)胞，無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞為-,陽(yáng)性細(xì)胞lt;10%為+，10%～50%為++，gt;50%為+++。-和+為低表達(dá)組，++和+++為高表達(dá)組。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS17.0軟件分析。Akt和p-Akt1的相關(guān)性采用Spearman等級(jí)檢驗(yàn)分析，Akt和p-Akt1表達(dá)與臨床病理資料間關(guān)系用χ2檢驗(yàn)，生存分析采用Kaplan-meier法，Plt;0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、胰腺癌組織中Akt和p-Akt1蛋白的表達(dá)

Akt和p-Akt1蛋白主要在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)，少數(shù)在細(xì)胞核中表達(dá)(圖1)。Akt和p-Akt1蛋白在胰腺癌組織中總的陽(yáng)性表達(dá)率分別為87.8%和83.8%，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≥10%的表達(dá)率分別為73.0%和55.4%，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≥50%的表達(dá)率為28.4%和21.6%，而正常胰腺組織中均呈陰性表達(dá)(Plt;0.05)。

二、胰腺癌Akt和p-Akt1蛋白表達(dá)的相關(guān)性

胰腺癌組織Akt和p-Akt1蛋白的表達(dá)具有正相關(guān)性(表1，r=0.274,P=0.018)。

三、胰腺癌組織Akt和p-Akt1蛋白表達(dá)與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系

胰腺癌Akt蛋白表達(dá)與年齡、性別、腫瘤生長(zhǎng)部位、腫瘤大小、病理分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期及神經(jīng)浸潤(rùn)均無(wú)顯著相關(guān)性。而p-Akt1高表達(dá)與腫瘤T分期及TNM分期相關(guān)(表2)，與其他特征無(wú)顯著相關(guān)性(Pgt;0.05)。

四、Akt和p-Akt1蛋白表達(dá)與預(yù)后

胰腺癌患者總的中位生存期為(14.3±1.4)個(gè)月。Akt高表達(dá)者的中位生存期為(16.0±5.7)個(gè)月，明顯高于低表達(dá)者的(9.3±0.2)個(gè)月(圖2a，P=0.007)。p-Akt1高表達(dá)者的中位生存期為(23.0±5.5)個(gè)月，明顯高于低表達(dá)者的(11.1±1.8)個(gè)月(圖2b，P=0.004)。多因素分析顯示，TNM分期為胰腺癌預(yù)后差的因素(r=1.436，P=0.041)，p-Akt1為胰腺癌良性預(yù)后因素(r=0.421，P=0.010)。

表1 胰腺癌組織Akt和p-Akt1蛋白的表達(dá)(例數(shù))

圖1正常胰腺和胰腺癌組織中Akt和p-Akt1的表達(dá)(SP ×400)。(a)正常胰腺Akt陰性表達(dá)，(b～e)胰腺癌中Akt表達(dá)(-、+、++、+++)；(f)正常胰腺p-Akt1陰性表達(dá)；(g～j)胰腺癌中p-Akt1表達(dá)(-、+、++、+++)

表2胰腺癌組織中Akt和p-Akt1蛋白表達(dá)與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系

參 數(shù)例數(shù)Akt蛋白低表達(dá)高表達(dá)p-Akt1蛋白低表達(dá)高表達(dá)年齡 ≤60歲244201212 gt;60歲5016342129性別 男5011392426 女24915915腫瘤部位 胰頭6517482936 胰體尾93645分化程度 高分化15411411 中分化4713342324 低分化103764淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 無(wú)4611352224 有289191117T分期 T1+T228622622a T34614322719TNM分期 Ⅰa+Ⅰb19514415a Ⅱa27621189 Ⅱb+Ⅲ+Ⅳ289191117神經(jīng)浸潤(rùn) 無(wú)3410241616 有307231317腫瘤大小 ≤2cm101928 gt;2cm6419453133

注：aPlt;0.01

圖2胰腺癌組織Akt(a)和p-Akt1(b)蛋白表達(dá)與患者生存期的關(guān)系

討 論

Hutchinson等[7]報(bào)道Akt1高表達(dá)可加速ErbB-2介導(dǎo)的乳腺腫瘤的發(fā)生，但抑制腫瘤的侵襲能力。Maroulakou等[8]報(bào)道，不表達(dá)Akt1的腫瘤更具有侵襲性。Chadha等[4]報(bào)道，Akt蛋白在胰腺癌的高表達(dá)率為71.8%。在很多胰腺癌細(xì)胞株中Akt也高表達(dá)[9]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，胰腺癌組織Akt蛋白的高表達(dá)率為73.0%，明顯高于正常胰腺組織。而且p-Akt1蛋白高表達(dá)與腫瘤病理學(xué)T分期及TNM分期相關(guān)，提示Akt1的高表達(dá)可能與胰腺癌的局部侵襲能力下降有關(guān)，與上述文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果一致。

Akt在PI3K或缺氧微環(huán)境的刺激下發(fā)生磷酸化，其中T308位點(diǎn)和S473位點(diǎn)的同時(shí)磷酸化為Akt活化所必需。激活的Akt從細(xì)胞質(zhì)募集至胞膜或轉(zhuǎn)位到胞核，使底物蛋白特定部位的絲氨酸、蘇氨酸磷酸化。p-Akt通過(guò)抑制凋亡促進(jìn)細(xì)胞的存活，在腫瘤的發(fā)生中起重要作用。Ng等[9]報(bào)道，p-Akt1在很多胰腺癌細(xì)胞株中高表達(dá)。本結(jié)果顯示，p-Akt在胰腺癌組織中也高表達(dá)，且Akt和p-Akt1蛋白的表達(dá)存在明顯的正相關(guān)，提示Akt的磷酸化激活與Akt的異常過(guò)表達(dá)有關(guān)。

至于p-Akt對(duì)胰腺癌預(yù)后的意義存在爭(zhēng)議。Chadha等[4]認(rèn)為，p-Akt是胰腺癌預(yù)后良好的指標(biāo)之一，而Yamamoto等[5]認(rèn)為，p-Akt在胰腺癌的高表達(dá)與預(yù)后差相關(guān)。本結(jié)果顯示，Akt和p-Akt1蛋白高表達(dá)者的中位生存期均明顯高于低表達(dá)者，多因素分析提示p-Akt1高表達(dá)為良性預(yù)后因素。這可能與p-Akt1高表達(dá)者胰腺癌的局部浸潤(rùn)少有關(guān)。

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2009-07-15)

(本文編輯：屠振興)

ExpressionandclinicalsignificanceofAktandphosphoryledAkt1inpancreaticcarcinoma

LIUJun,QIUZheng-jun,JIANGTao,HUANGCheng,SUNJing,SUNHong-cheng,ZHONGFu-quan,JINYu-biao,HUHong-hui.

DepartmentofGeneralSurgery,FirstPeople′sHospitalofShanghai,ShanghaiJiaotongUniversity,Shanghai200080,China

QIUZheng-jun,Email:qiuwryb@online.sh.cn

ObjectiveTo investigate the expression of Akt and phosphoryled Akt (p-Akt1) protein in pancreatic carcinoma and to determine the clinical significance.MethodsIn 74 cases of pancreatic carcinoma and 10 cases of normal pancreatic tissue samples, the expression of Akt and p-Akt1 were detected by immunohistochemical method, and the its relationship with clinicopathologic characteristics and prognosis were analyzed.ResultsThe positive expression rate of Akt and p-Akt1 in pancreatic carcinoma were 87.8% and 83.8% respectively, while there was no expression of Akt and p-Akt1 in normal pancreatic tissue, and the difference was statistically significant (plt;0.05). There was a positive correlation between the expression of Akt and p-Akt1 in pancreatic carcinoma (r=0.274,P=0.018). The expression of Akt and p-Akt1 was not significantly associated with the age, sex, location, size, pathology stages, lymph nodes metastasis, clinical stages and nerve invasion of the tumor (Pgt;0.05). But the higher expression of p-Akt1 was associated with T stages and TNM staging (p=0.002). Patients with high intensity of Akt and p-Akt1 expression showed a significantly longer median survival time [(16.0±5.7) month and (23.0±5.5) month, respectively] than those with low intensity expression [(9.3±0.2) month and (11.1±1.8) month (P=0.007 andP=0.004) respectively].Conclusionsp-Akt1 expression is a significant positive prognostic factor for pancreatic carcinoma and detection of p-Akt1 expression may be of clinical value.

Pancreatic neoplasms； Immunohistochemistry； Protein kinases; Akt； p-Akt1； Prognosis

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2010.02.018

200080 上海，上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院普外科(劉俊、裘正軍、江弢、黃陳、孫晶、孫紅成、鐘福全)，病理科(金宇彪 、胡宏慧)

裘正軍，Email: qiuwryb@online.sh.cn