SUFU在胰腺癌組織中的表達(dá)及其臨床意義

王云鋒 滿曉華 高軍 杜奕奇 龔燕芳 李兆申 金晶 吳紅玉

·論著·

SUFU在胰腺癌組織中的表達(dá)及其臨床意義

王云鋒 滿曉華 高軍 杜奕奇 龔燕芳 李兆申 金晶 吳紅玉

目的探討SUFU蛋白在胰腺癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理特征之間的關(guān)系。方法應(yīng)用免疫組化法檢測SUFU蛋白在28例胰腺癌手術(shù)切除標(biāo)本、20例癌旁胰腺組織及4例正常胰腺組織中的表達(dá)，分析其與胰腺癌臨床病理特征間的關(guān)系。結(jié)果SUFU蛋白陽性表達(dá)于胰腺導(dǎo)管癌細(xì)胞的胞質(zhì)和胞核，陽性表達(dá)率為78.6%(22/28)，其中+ 6例，++ 13例，+++ 3例。癌旁胰腺組織及正常胰腺組織中導(dǎo)管、腺泡和胰島均未見SUFU蛋白表達(dá)，與胰腺癌組織比較，相差顯著(P<0.05)。胰腺癌組織SUFU蛋白高表達(dá)與患者的年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤大小、淋巴轉(zhuǎn)移和肝轉(zhuǎn)移無關(guān)，而與腫瘤的臨床分期之間呈正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論SUFU蛋白在胰腺癌組織中高表達(dá)，對胰腺癌發(fā)病具有一定作用。

胰腺腫瘤； 免疫組織化學(xué)； Hedgehog通路； SUFU

胰腺癌是一種惡性程度極高的腫瘤，在美國惡性腫瘤病死原因中居第4位，消化道腫瘤中病死率僅次于結(jié)腸癌，美國每年新病例約37 680例，病死約34 290例，平均5年生存率僅5%[1]。Hedgehog通路異常激活與胰腺癌發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，SUFU(suppressor of fused)是Hedgehog通路核心成員之一。近期文獻(xiàn)報(bào)道，與果蠅屬不同，在哺乳動物中SUFU是Hedgehog通路的主要負(fù)性調(diào)節(jié)因子[2]。本實(shí)驗(yàn)檢測SUFU在胰腺癌及相應(yīng)癌旁胰腺組織中的表達(dá)，分析其與胰腺癌臨床病理特征的關(guān)系，探討其在胰腺癌發(fā)病中的作用。

材料與方法

一、標(biāo)本來源

收集2007年3月至2008年3月在長海醫(yī)院接受手術(shù)治療的28例胰腺癌患者，其中男21例，女7例，年齡33～82歲，平均59歲。獲得胰腺癌組織28例，均經(jīng)病理證實(shí)；獲得相應(yīng)癌旁組織20例，病理檢查未見癌細(xì)胞。按2002年UICC(國際抗癌聯(lián)盟)制定的TNM分期，Ⅰ、Ⅱ期10例，Ⅲ、Ⅳ18例。4例正常胰腺組織標(biāo)本為長海醫(yī)院消化內(nèi)科實(shí)驗(yàn)室保存。

二、SUFU 蛋白檢測

手術(shù)切除標(biāo)本固定、石蠟包埋、連續(xù)切片，采用免疫組化EnVision染色法檢測SUFU蛋白表達(dá)。兔抗SUFU單克隆抗體(Novus Biologicals)1∶300稀釋。SUFU定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，陽性染色為棕黃色或棕褐色。免疫組化結(jié)果判斷根據(jù)陽性細(xì)胞在全部組織細(xì)胞中所占比例以及陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度判定。按陽性細(xì)胞數(shù)：≤5%為10分,>5%～≤25%為1分，>25%～≤50%為2分，>50%為3分；按細(xì)胞顯色深淺：無著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。將兩分值相乘， 0分為-，1～2分為+，3～4分為++，6～9分為+++。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用χ2檢測及Fisher精確概率法分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著標(biāo)準(zhǔn)。

結(jié) 果

一、胰腺癌組織SUFU蛋白表達(dá)

SUFU蛋白陽性表達(dá)于胰腺導(dǎo)管癌細(xì)胞的胞質(zhì)和胞核(圖1)，陽性表達(dá)率為78.6%(22/28)，其中+ 6例；++ 13例；+++ 3例。癌旁胰腺組織及正常胰腺組織中導(dǎo)管、腺泡和胰島均未見SUFU蛋白表達(dá)。胰腺癌和癌旁胰腺組織中SUFU蛋白的表達(dá)存在顯著差異(P<0.05)。

圖1 SUFU蛋白在胰腺癌組織(a)、癌旁胰腺組織(b)和正常胰腺組織(c)中的表達(dá)(免疫組化 ×100)

二、胰腺癌組織的SUFU表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

胰腺癌組織SUFU蛋白表達(dá)與腫瘤的臨床分期呈正相關(guān)(P<0.05)，而與患者的年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤大小、淋巴轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處(肝)轉(zhuǎn)移均無關(guān)(表1)。

表1胰腺癌組織SUFU蛋白表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系

臨床參數(shù)例數(shù)SUFU表達(dá)陽性例數(shù)陰性例數(shù)陽性率(%)P年齡(歲) ≤601613381.3>0.05 >60129375.0性別 男2117481.0>0.05 女75271.4腫瘤部位 胰頭部1814477.8>0.05 體尾部108280.0腫瘤直徑 ≤4cm1814477.8>0.05 >4cm108280.0TNM分期 Ⅰ～Ⅱ105550.0<0.05 Ⅲ～Ⅳ1817194.4淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 有1311284.6>0.05 無1511473.3遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移 有550100.0>0.05 無2317673.9

討 論

Hedgehog信號通路是胚胎發(fā)育過程中一個重要的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)。胚胎形成后，Hedgehog活性消失。若成體組織中其異常激活或成員突變可導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。Hedgehog信號通路異常活化可由部分成員的突變或配體依賴性成員高表達(dá)所致。目前研究證實(shí)，Hedgehog通路異常激活與肺癌、消化道腫瘤和前列腺癌的發(fā)生有關(guān)。在消化道腫瘤發(fā)生中，Hedgehog信號通路主要以配體依賴性成員高表達(dá)發(fā)揮作用；而成員突變主要參與皮膚、小腦和骨骼肌等處腫瘤的發(fā)生[2]。Hedgehog信號通路由Hedgehog配體、兩個跨膜蛋白受體Ptch和Smo、SUFU、COS2、下游轉(zhuǎn)錄因子GLI蛋白等組成。在哺乳動物中存在3種Hedgehog配體，即Sonic Hedgehog(Shh)、Indian Hedgehog(Ihh)及Desert Hedgehog(Dhh)，均為分泌性蛋白。Ptch和Smo是位于細(xì)胞膜上的跨膜蛋白，其中Ptch為Hedgehog的受體，能與三種Hedgehog蛋白(Shh、Ihh和Dhh)結(jié)合。當(dāng)Hedgehog蛋白缺乏時(shí)，Ptch抑制Smo的活性，進(jìn)而抑制下游基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。當(dāng)Hedgehog蛋白與Ptch結(jié)合時(shí)，對Smo的抑制效應(yīng)被解除，激活下游的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子GLI，即可誘導(dǎo)目標(biāo)基因的表達(dá)。SUFU位于胞質(zhì)或細(xì)胞核內(nèi)，不通過PTCH和Smo而直接作用于GLI，調(diào)節(jié)Hedgehog活性。Varjosalo等[3]采用RNA干擾技術(shù)沉默SUFU后可充分激活GLI介導(dǎo)的Hedgehog信號通路。Thayer等[4]報(bào)道，26株胰腺癌細(xì)胞系均表達(dá)GLI1，但只有部分胰腺癌細(xì)胞株對環(huán)杷明敏感，還有部分細(xì)胞株不敏感，這提示對環(huán)杷明不敏感的胰腺癌細(xì)胞可能是因Smo下游通路某成員異常表達(dá)導(dǎo)致胰腺癌的發(fā)生。

關(guān)于SUFU調(diào)節(jié)GLI的機(jī)制尚有爭議，目前文獻(xiàn)報(bào)道，其可能通過兩種方式調(diào)控GLI： (1)SUFU與GLI在細(xì)胞質(zhì)中結(jié)合，從而抑制GLI進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)發(fā)揮其轉(zhuǎn)錄活性；(2)SUFU在細(xì)胞核內(nèi)與其他蛋白共同作用發(fā)揮GLI的輔阻遏物作用。它在不同組織中的作用機(jī)制可能不同。Humke等[5]研究顯示，SUFU主要功能區(qū)域在胞質(zhì)，在Kif3a協(xié)助下調(diào)控GLI3，從而調(diào)控Hedgehog信號通路，且SUFU-GLI3是Hedgehog通路的主要調(diào)控靶點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，SUFU蛋白在胰腺癌組織細(xì)胞的胞質(zhì)和胞核均陽性表達(dá)；而癌旁胰腺組織及正常胰腺組織中導(dǎo)管、腺泡和胰島均未見SUFU蛋白表達(dá)，與Humke等的研究結(jié)果一致。本結(jié)果還顯示，SUFU蛋白表達(dá)與胰腺癌患者臨床分期有關(guān)，與患者的年齡、性別和腫瘤的部位、大小無關(guān)，提示其在胰腺癌組織中高表達(dá)為惡性表型之一。

[1] Jemal A,Siegel R,Ward E,et al.Cancer Statistics,2008.CA Cancer J Clin,2008.58:71-96.

[2] Cheng SY,Yue S.Role and regulation of human tumor suppressor SUFU in Hedgehog signaling.Adv Cancer Res,2008,101:29-43.

[3] Varjosalo M,Li SP,Taipale J,et al.Divergence of hedgehog signal transduction mechanism between Drosophila and mammals. Dev Cell,2006,10:177-186.

[4] Thayer SP,di Magliano MP,Heiser PW,et al.Hedgehog is an early and late mediator of pancreatic cancer tumorigenesis.Nature, 2003,425:851-856.

[5] Humke EW,Dorn KV,Milenkovic L,et al.The output of Hedgehog signaling is controlled by the dynamic association between Suppressor of Fused and the Gli proteins.Genes Dev,2010,24:670-682.

2009-04-10)

(本文編輯：屠振興)

ExpressionandsignificanceofSUFUinpancreaticcarcinoma

WANGYun-feng,MANXiao-hua,GAOJun,DUYi-qi,GONGYan-fang,LIZhao-shen,JINJing,WUHong-yu.

DepartmentofGastroenterology,ChanghaiHospital,SecondMilitaryMedicalUniversity,Shanghai200433,China

LIZhao-shen,Email:lizhaoshen111@yahoo.com.cn

ObjectiveTo investigate the expression of SUFU protein in human pancreatic carcinoma tissues and to explore the relationship between the expression of SUFU protein and the clinicopathologic parameters.MethodsThe expression of SUFU protein in 28 samples of pancreatic cancer tissues and 20 adjacent normal pancreatic tissues and 4 normal pancreatic tissues was detected by immunohistochemical method. And the relationship between the expression of SUFU protein and the clinicopathologic parameters were determined.ResultsSUFU protein was positively expressed in cytoplasm and nucleus of pancreatic carcinoma cells, while it was not expressed in the duct, acinar and islet of tumor-adjacent tissues and normal pancreatic tissues, and difference was statistically significant (P<0.05). The high SUFU protein expression was related to the clinical stage (P<0.05), but not the age, gender, tumor location ,tumor size, lymph node metastasis and liver metastasis.ConclusionsSUFU protein was highly expressed in pancreatic cancer, and SUFU may play certain role in the pathogenesis of pancreatic cancer.

Pancreatic neoplasm; Immunohistochemistry; Hedgehog signal pathway; Suppressor of fused

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2010.06.013

國家科技支撐計(jì)劃(2006BAI02A12)

200433 上海，第二軍醫(yī)大學(xué)長海醫(yī)院消化內(nèi)科

李兆申，Email:lizhaoshen111@yahoo.com.cn