人參與五靈脂配伍后藥效及有效成分分析

李艷玲,梁 鶴

(1.鄭州牧業(yè)工程高等?？茖W校藥物工程系,河南鄭州450011;2.河南中醫(yī)學院,河南鄭州450008)

人參,五加科植物人參(Panax ginseng C.A Mey)的干燥根,傳統(tǒng)名貴藥材,其用藥已有兩千多年的歷史。其中人參皂苷是公認的有效成分,具有增強免疫力、抗腫瘤、抗衰老、益智、強心等藥理學作用。人參與五靈脂配伍為傳統(tǒng)中藥“十九畏”內(nèi)容之一,近年來,有些人從藥理、臨床方面對這兩組中藥的配伍進行研究,研究的結(jié)果存在分歧。有人認為五靈脂和人參配伍可以增強療效;有人認為五靈脂的加入降低了人參的藥效。為了進一步了解人參、五靈脂配伍實質(zhì),本試驗通過藥效學比較和有效成分分析,初步觀察了人參和五靈脂配伍的相關(guān)問題。

1 試驗材料

高效液相色譜儀(Waters2695,美國Waters公司),電磁爐,恒溫水浴鍋,恒溫培養(yǎng)箱,粉碎機,酸度計,分析天平;人參、五靈脂(安徽亳州藥材市場購得,經(jīng)河南中醫(yī)學院曹繼華教師鑒定均為正品)。人參皂苷 Rg1(批號：110703-200424)、Rb1(批號：110704-200420)、Re(批號：110754-200421)均由河南省藥品檢定所提供。實驗動物：昆明系小鼠。

2 藥理試驗方法與結(jié)果

2.1 抗疲勞試驗 健康小鼠50只,體重18～22 g,雄雌各半,隨機均分5組,分別灌胃生理鹽水、1 g/mL人參、1 g/mL人參五靈脂混煎液(1∶1)、1 g/mL人參五靈脂混煎液(1∶2),1 g/mL人參五靈脂混煎液(2∶1),每日2次,連續(xù)7 d。試驗時,在動物尾部負重(重量為體重的 1/10),置入水深19 cm、水溫10℃的水槽中,測其游泳時間,結(jié)果見表1。

表1 人參及其與五靈脂配伍對小鼠游泳時間的影響

2.2 常壓耐缺氧試驗 動物、給藥方法同試驗2.1。試驗時,將動物置入150 mL磨口瓶中(內(nèi)置5 g鈉石灰),記錄小鼠缺氧死亡時間,結(jié)果見表2。

2.3 對幼鼠免疫器官重量的影響 健康小鼠50只,體重 13～15 g,分組及給藥同試驗 2.1,試驗時摘眼球放血處死,稱體重,摘出胸腺及脾臟稱重,以胸腺或脾臟重量(mg)與體重(g)之比作為胸腺或脾指數(shù),結(jié)果見表3。

表2 人參及其與五靈脂配伍對小鼠耐缺氧時間的影響

3 人參皂苷含量測定方法與結(jié)果

3.1 樣品制備 精確稱取人參5 g,分別加入2.5 g、5 g、10.0 g的五靈脂。加150 mL水浸泡45 m in,煎煮兩次,每次1 h,離心,合并上清液,濃縮至干,加150 mL甲醇超聲1 h,濾去藥渣,濃縮,定容至25 mL量瓶中,備用。藥渣加 150 mL甲醇超聲1 h,濾去藥渣,濃縮,定容至25mL量瓶中,備用。

表3 人參及其與五靈脂配伍對小鼠脾臟及胸腺指數(shù)的影響

3.2 對照品的制備 精密稱取人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Re對照品及人參皂苷Rb1對照品,加甲醇制成每1mL各含0.2mg的混合溶液,搖勻,即得。

3.3 色譜條件 以十八烷基硅烷健合硅膠為填充劑,以乙腈為流動相A,以水為流動相B,按表4進行梯度洗脫;檢測波長為203 nm,理論塔板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計算應不低于6 000。

表4 色譜條件

3.4 線性關(guān)系考察 精密稱取人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Re對照品及人參皂苷Rb1對照品,加甲醇制成每1mL各含0.2mg的混合溶液,按上述色譜條件分別進樣 4.0μL、8.0μL、12.0μL、16.0 μL、20.0 μL,記錄峰面積,以峰面積為縱坐標,人參皂苷的進樣量為橫坐標作標準曲線,計算回歸方程,結(jié)果人參皂苷Rg1的回歸方程為y=-664x+905 000,相關(guān)系數(shù)r=0.999 8,線性范圍0.24～6.32 μg;人參皂苷Re的回歸方程為y=4 720x-154 000,相關(guān)系數(shù)r=0.999 4,線性范圍0.21～5.10μg;人參皂苷Rb1的回歸方程為y=5 110x-172 000,相關(guān)系數(shù)r=0.999 9,線性范圍0.13～4.32μg。

3.5 樣品的測定 精密吸取各樣品溶液10.0μL注入液相色譜儀,測定,結(jié)果見表5、表 6。

4 討論

人參與五靈脂配伍是傳統(tǒng)的“十九畏”內(nèi)容之一,兩者伍用會降低人參的療效。我們通過藥理學試驗也證實了這一傳統(tǒng)內(nèi)容。從藥理試驗結(jié)果可以看出,單獨服用人參,均可以延長小鼠的抗疲勞時間和耐缺氧時間,和生理鹽水組相比均有極顯著差異(P＜0.01)。人參還可以增加脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù),和空白組相比有顯著性差異(P＜0.05)。但人參和五靈脂配伍以后,無論劑量是1∶1、1∶2還是2∶1,其抗疲勞時間和耐缺氧時間還是脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)與生理鹽水組相比均沒有顯著差異。

表5 人參及其與五靈脂配伍上清液中人參皂苷含量

表6 人參及其與五靈脂配伍藥渣中人參皂苷含量

在藥理試驗的基礎(chǔ)上,我們又對其起作用的物質(zhì)基礎(chǔ)化學成分進行了分析。人參中主要發(fā)揮藥理作用的是人參皂苷Rg1、Re和Rb1,我們主要觀察了這3個成分的存留位置和量的變化。在上清液中,人參和五靈脂配伍以后,和單獨人參水煎液相比,人參皂苷Rg1、Re和Rb1的量急劇下降,單獨人參上清液中Rg1、Re的量是人參和五靈脂配伍以后的4～5倍,而Rb1在人參五靈脂1∶2配伍以后,上清液中已經(jīng)檢測不到了。人參和五靈脂配伍后,這3種人參皂苷的含量下降可能有如下原因：(1)五靈脂中的某些化學成分抑制了人參皂苷的溶出,使部分皂苷留在了藥渣中。(2)五靈脂中的某些物質(zhì)和人參皂苷發(fā)生了反應,破壞了人參皂苷。因此,我們也觀察了藥渣中這3種皂苷的含量,發(fā)現(xiàn)單獨人參的藥渣有一定量的人參皂苷存在,但和五靈脂配伍以后,藥渣中Rg1的量配伍后是不配伍的2倍多,而Re和Rb1在藥渣中根本檢測不到,在圖譜中顯示出現(xiàn)了幾個原來沒有的峰,可能是五靈脂中的某些成分破壞了人參皂苷Re和Rb1,又形成了其他的化合物。由此可以看出,五靈脂和人參配伍后,五靈脂一方面抑制了人參皂苷的溶出,另一方面對人參皂苷也有破壞作用,從而影響了人參的療效。因為五靈脂中的成分比較復雜,究竟是哪些成分抑制或破壞了人參皂苷,還需要進一步的研究。