呼吸道中嗜血桿菌的感染及耐藥性分析

李 云

（成都軍區(qū)昆明總醫(yī)院 檢驗(yàn)科，云南 昆明 650032）

嗜血桿菌（Haemophilus）是苛養(yǎng)性細(xì)菌，其中流感嗜血桿菌（Haemophilus influenzae）和副流感嗜血桿菌（Haemophilus par lainfluenzae）是引起小兒和成人呼吸道感染的重要致病菌。近20年來，由于β-內(nèi)酰胺酶的產(chǎn)生，嗜血桿菌的耐藥性有了顯著增加，β-內(nèi)酰胺酶陰性氨芐西林耐藥流感嗜血桿菌的出現(xiàn)也給臨床治療帶來了困難[1]。因此，嗜血桿菌的分布和耐藥性的研究對(duì)臨床具有重要的意義，為此，本文對(duì)本地區(qū)的嗜血桿菌感染情況作了調(diào)查，并對(duì)相關(guān)藥敏進(jìn)行分析。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 菌株來源 標(biāo)本為從深部咳出合格痰液和咽拭子，均來自我院2007年1～10月診斷為呼吸道感染門診及住院患者。其中，痰液705份，咽拭子55份。患者年齡為3個(gè)月到88歲。

1.1.2 試劑 含有V、X因子的嗜血桿菌專用HAE巧克力培養(yǎng)基（BIOMERIEU公司），HTM藥敏培養(yǎng)基、Nitrocefin紙片、X、V因子均購(gòu)自英國(guó)Oxoid公司，藥敏紙片為北京天壇藥物有限公司產(chǎn)品，標(biāo)準(zhǔn)菌株流感嗜血桿菌ATCC49247，購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。

1.2 方法

1.2.1 菌株分離與鑒定 送檢標(biāo)本立即接種血平板和HAE巧克力平板，置于35℃，5%～10%二氧化碳培養(yǎng)24 h。挑取血平板上不生長(zhǎng)、巧克力平板上生長(zhǎng)的無色透明或灰白色半透明、圓形隆起、光滑、邊緣整齊，濕潤(rùn)不溶血、露滴狀菌落、并有特殊閃光，直徑0.5～1 mm的可疑菌落涂片。革蘭染色呈陰性短小桿菌、球桿、少數(shù)呈細(xì)絲狀等多形態(tài)性。同時(shí)做衛(wèi)星試驗(yàn)，將可疑菌落同時(shí)接種于血平板、普通瓊脂（M-H）平板上，密涂劃線，再用金葡菌點(diǎn)種，兩點(diǎn)相距2 mm以上。35℃，5%～10%二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h。血平板衛(wèi)星試驗(yàn)陽性、M-H平板衛(wèi)星試驗(yàn)陰性者，為流感嗜血桿菌；血平板和M-H平板衛(wèi)星試驗(yàn)同時(shí)陽性者，為副流感嗜血桿菌。同時(shí)進(jìn)行V、X、X+V因子需求試驗(yàn)。根據(jù)菌落形態(tài)、染色鏡檢、衛(wèi)星試驗(yàn)及因子需求試驗(yàn)等特點(diǎn)進(jìn)行菌株鑒定[2]。疑難菌株用美國(guó)BD公司Phoenix 100全自動(dòng)鑒定藥敏儀進(jìn)行鑒定。

1.2.2 β-內(nèi)酰胺酶測(cè)定 采用頭孢硝噻吩法，按照說明書操作。將Nitrocefin紙片濕潤(rùn)，涂上嗜血桿菌菌落，觀察紙片顏色變化，變紅色表示β-內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)陽性，不變色為陰性。

1.2.3 藥敏試驗(yàn) 使用HTM瓊脂培養(yǎng)基，紙片擴(kuò)散法測(cè)定。結(jié)果用WHONET 5.4軟件進(jìn)行判定。標(biāo)準(zhǔn)菌株同時(shí)進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，結(jié)果符合質(zhì)控要求。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

用卡方檢驗(yàn)對(duì)各組的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以P＜0.05為差異有顯著性。

2 結(jié)果

2.1 嗜血桿菌的分離

760份痰液和咽拭子標(biāo)本中共檢出嗜血桿菌130株，分離率為17.11%（130/760）。其中，流感嗜血桿菌85株，占65.38%（85/130）；副流感嗜血桿菌45株，占34.62%（45/130），其他嗜血桿菌未檢到。

2.2 β-內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)

130株嗜血桿菌中共檢出38株β-內(nèi)酰胺酶陽性菌株，產(chǎn)酶率為29.23%（38/130）。其中，流感嗜血桿菌21株，產(chǎn)酶率24.71%（21/85）；副流感嗜血桿菌17株，產(chǎn)酶率37.78%（17/45）。

2.3 嗜血桿菌的耐藥性分析

藥敏試驗(yàn)結(jié)果見表1。

附表 130株嗜血桿菌對(duì)10種抗生素的耐藥情況

3 討論

嗜血桿菌主要寄居在人類上呼吸道黏膜，在呼吸道感染中占有極為重要的地位。嗜血桿菌常常引起下呼吸道感染、肺炎等嚴(yán)重疾病，特別是流感嗜血桿菌致病性最強(qiáng)。嗜血桿菌所致疾病分為兩類，即原發(fā)感染和繼發(fā)感染，前者主要屬于外源性感染，通過呼吸道傳播，常見于兒童；后者主要由寄居于上呼吸道的無莢膜菌株所致，常見于老人。兩類感染均可引起呼吸道本身疾患，亦可引起其他部位的感染，如菌血癥、腦膜炎、膿毒性關(guān)節(jié)炎等[3]。

本院嗜血桿菌的檢出率為17.11%，低于國(guó)內(nèi)報(bào)道的20.0%[4]。其中，流感嗜血桿菌的百分率較高，為65.38%；副流感嗜血桿菌的百分率為34.62%。嗜血桿菌在普通培養(yǎng)基中根本無法檢出，其主要原因是該菌為苛養(yǎng)菌，生長(zhǎng)時(shí)需要X、V因子，所以嗜血桿菌的檢出率受多種因素影響。其中，標(biāo)本的質(zhì)量，培養(yǎng)基的質(zhì)量，實(shí)驗(yàn)方法是最重要因素，只有消除以上因素的影響才能提高檢出率。

嗜血桿菌在呼吸道感染中占有越來越重要的地位，特別是在兒童呼吸道感染中的分離率已越來越高。但繼發(fā)感染多見于成人。近年報(bào)道顯示，臨床嗜血桿菌感染中，副流感嗜血桿菌的感染率呈逐年增多趨勢(shì)。國(guó)內(nèi)外資料表明，副流感嗜血桿菌是社區(qū)獲得性肺炎和其他呼吸道感染的重要致病菌[5]。我院以流感嗜血桿菌為主，這可能與地域環(huán)境因素及抗生素使用等因素有關(guān)。

嗜血桿菌耐藥率不斷上升，其主要耐藥機(jī)制是β-內(nèi)酰胺酶的產(chǎn)生，它能水解氨芐西林。因此，對(duì)氨芐西林或阿莫西林耐藥性增長(zhǎng)是伴隨著β-內(nèi)酰胺酶陽性率增高同時(shí)發(fā)生的。本地區(qū)嗜血桿菌的β-內(nèi)酰胺酶陽性率為29.23%，其中流感嗜血桿菌產(chǎn)酶率為24.71%，副流感嗜血桿菌產(chǎn)酶率為37.78%，二者具有顯著性差異（P＜0.05）。β-內(nèi)酰胺酶陽性菌株全部耐氨芐西林，未見β-內(nèi)酰胺酶陽性而對(duì)氨芐西林敏感的菌株?？梢姡?內(nèi)酰胺酶陽性能預(yù)測(cè)嗜血桿菌對(duì)青霉素、氨芐西林、阿莫西林耐藥。

隨著嗜血桿菌感染的發(fā)病率不斷上升，發(fā)現(xiàn)嗜血桿菌的耐藥性也在增加。藥敏結(jié)果表明，嗜血桿菌對(duì)10種抗生素的耐藥率依次為：阿莫西林/克拉維酸＜阿齊霉素/亞胺培南＜頭孢他啶＜頭孢呋辛＜頭孢唑啉＜氯霉素＜氧氟沙星＜氨芐西林＜復(fù)方磺胺甲噁唑。流感嗜血桿菌和副流感嗜血桿菌對(duì)各種抗生素的耐藥性略有差異，但結(jié)果沒有顯著性差異（P＞0.05）。結(jié)果均顯示阿莫西林/克拉維酸、阿齊霉素、亞胺培南、頭孢他啶的耐藥性較低，均小于5%，是治療的首選藥物。

造成嗜血桿菌耐藥性的主要機(jī)理是嗜血桿菌可產(chǎn)生以質(zhì)粒介導(dǎo)的β-內(nèi)酰胺酶，其次是由于細(xì)菌細(xì)胞膜通透性降低和青霉素結(jié)合蛋白的結(jié)構(gòu)位點(diǎn)發(fā)生改變，使β-內(nèi)酰胺類抗生素活性下降產(chǎn)生耐藥性。另外，廣譜抗生素的濫用，可使耐藥菌株選擇性生長(zhǎng)，促進(jìn)帶菌狀態(tài)的形成。增加耐藥菌的擴(kuò)散機(jī)會(huì)[6]。

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