氮酮對(duì)復(fù)方斯亞旦生發(fā)酊中苦杏仁苷的體外透皮吸收實(shí)驗(yàn)研究

王園姬,趙海嬌,李慧玲,駱從艷,陳文,

(石河子大學(xué)藥學(xué)院/新疆特種植物藥資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,石河子832000)

氮酮對(duì)復(fù)方斯亞旦生發(fā)酊中苦杏仁苷的體外透皮吸收實(shí)驗(yàn)研究

王園姬1,趙海嬌2,李慧玲2,駱從艷2,陳文1,2

(石河子大學(xué)藥學(xué)院/新疆特種植物藥資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,石河子832000)

為了考察氮酮對(duì)復(fù)方斯亞旦生發(fā)酊中苦杏仁苷透皮吸收性能的影響,并尋找最佳的促透劑濃度,本文采用Franz擴(kuò)散池法,進(jìn)行大鼠皮膚體外透皮吸收實(shí)驗(yàn)研究。以接收液中苦杏仁苷含量為檢測指標(biāo),用HPLC測定不同時(shí)間點(diǎn)透過的苦杏仁苷的濃度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,當(dāng)接收液為生理鹽水時(shí),氮酮的最佳促透濃度為4%,透皮速率為15.74μg/(cm2·h);當(dāng)接收液為甲醇-水(30∶70)時(shí),氮酮的最佳促透濃度為3%,透皮速率為11.26μg/(cm2·h)。證明氮酮對(duì)復(fù)方斯亞旦生發(fā)酊中苦杏仁苷的透皮吸收具有良好的促進(jìn)作用。

復(fù)方斯亞旦生發(fā)酊;苦杏仁苷;透皮吸收;氮酮

Abstract:In order to investigate the promotion effect of Azone as an additive in Compound Siyadan Tincture,and find the optimum concentration to promote the transdermal absorption,we used Franz diffusion cell to study the percutaneous absorption with excised rat skin.The amount of Amygdaloside in the received solution was determined by HPLC at different time points.The optimum concentration of Azone was 4%when the reception solution was Sodium Chloride,and the permeation rate was 15.74μg/(cm2·h);the optimum concentration was 3%when the reception solution was MeOH-H2O(30∶70),and the permeation rate was 11.26μg/(cm2·h).The conclusion was that Azone could effectively promote the transdermal absorption rate of Amygdaloside in Compound Siyadan Tincture.

Key words:Compound Siyadan Tincture;Amygdaloside;transdermal absorption;Azone

復(fù)方斯亞旦生發(fā)酊系維吾爾草藥復(fù)方,收載于中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)-維吾爾藥分冊中,由瘤果黑種草子、桃仁、石榴子3味藥材組成,具有育發(fā)、潤發(fā)、固發(fā)之功效,用于禿發(fā)、斑禿、脂溢性脫發(fā)以及其它不明原因的脫發(fā)[1]。處方中含有桃仁,桃仁具有活血祛瘀、潤腸通便等功效[2],其主要成分為苦杏仁苷。

為了考察酊劑的體外透皮吸收情況,本實(shí)驗(yàn)以復(fù)方斯亞旦生發(fā)酊為模型藥物,以離體鼠皮為實(shí)驗(yàn)材料,采用Franz擴(kuò)散裝置,研究了不同濃度氮酮作為藥物透皮吸收促進(jìn)劑時(shí),對(duì)制劑中苦杏仁苷的透皮吸收影響[3-5]。分別考察了在接收液為生理鹽水和甲醇-水(30∶70)時(shí)苦杏仁苷經(jīng)皮滲透速率,系統(tǒng)的比較了氮酮濃度及不同接收液對(duì)苦杏仁苷透皮性能的影響,為本制劑的透皮吸收行為提供一定的參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器

Waters高效液相色譜儀;Rya-6a型藥物透皮擴(kuò)散試驗(yàn)儀(上海黃海藥檢儀器有限公司,擴(kuò)散面積為2.8 cm2,接收池容積6.5 mL);Sartorius(BP211D)電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)。

1.1.2 試藥

苦杏仁苷對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所,批號(hào):110820-200403);氮酮(天津市福晨化學(xué)試劑廠);復(fù)方斯亞旦生發(fā)酊為自制;水為自制超純水,甲醇為色譜純試劑,其它試劑為分析純試劑。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

Wistar大鼠,雌雄不限,體重(200±20)g,由石河子大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性

色譜柱:KromasilC18(250 mm×4.6 mm,5μm),流動(dòng)相 :甲醇-水(30∶70);檢測波長 :210 nm;柱溫:20℃;流速:0.7 mL/min;進(jìn)樣體積 20μL。理論板數(shù)按苦杏仁苷峰計(jì)約為2000。對(duì)照品及接收液的色譜圖見圖1,苦杏仁苷峰的保留時(shí)間約為15 min。

圖1 對(duì)照品及樣品HPLCFig.1 The HPLC chromatogram of reference substance and the sample

1.2.2 供試品溶液的制備

精密移取復(fù)方斯亞旦生發(fā)酊供試品溶液0.5 mL至10 mL容量瓶中,水浴揮干乙醇,再用甲醇-水(30∶70)稀釋至刻度,超聲分散10 min,搖勻,過0.22μm的微孔濾膜,取續(xù)濾液,即得。

1.2.3 離體鼠皮的制備

處死大鼠,先用手術(shù)剪將大鼠背部擬用區(qū)域的毛剪短,再用理發(fā)器將毛剃除干凈,注意勿損傷鼠皮。手術(shù)剪取下去毛區(qū)域的皮膚,剝離皮下組織和脂肪,用生理鹽水將皮膚反復(fù)漂洗至干凈,備用。

1.2.4 體外透皮試驗(yàn)

將皮膚真皮層面向接收室固定在Franz擴(kuò)散池上,分別精密移取0.5 mL含氮酮依次為0%、1%、2%、3%及4%的復(fù)方斯亞旦生發(fā)酊入給藥室,接收池中加滿生理鹽水或甲醇-水(30∶70,(37±0.1)℃),使接收液與鼠皮之間無氣泡。開啟磁力攪拌器,攪拌速度為 300 r/min。分別在 2、4、6、8、10、21 h 吸取接收液1.0 mL,同時(shí)補(bǔ)回同溫度生理鹽水或甲醇-水(30∶70)1.0 mL。取出的接收液立即置于1.5 mL離心管中,12000 r/min離心10 min,并于進(jìn)樣前過0.22μm的微孔濾膜,棄去初濾液,取續(xù)濾液20μL,注入高效液相色譜儀,記錄苦杏仁苷的峰面積,代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程,求出藥物濃度,并按公式(1)計(jì)算單位面積累積透皮量Q。

其中,Cn為第n個(gè)取樣點(diǎn)測得的藥物濃度(μg/mL),Ci為第i(i≤n-1)個(gè)取樣點(diǎn)測得的藥物濃度(μg/mL),V為擴(kuò)散池容積(mL),S為有效擴(kuò)散面積(cm2)。

利用公式(2)計(jì)算累積透過百分率 P。

其中,P為累積透過百分率,Ni為接收池中苦杏仁苷的量(μg),S為釋放池中苦杏仁苷的量(μg)。

以單位面積累積透過量(Q)為縱坐標(biāo),時(shí)間(t)為橫坐標(biāo),得到經(jīng)皮滲透曲線如圖2。

圖2 復(fù)方斯亞旦生發(fā)酊經(jīng)皮滲透曲線Fig.2 The transdermal permeation curve of Compound Siyadan Tincture

2 結(jié)果

2.1 方法學(xué)考察結(jié)果

2.1.1 線性關(guān)系考察

稱取苦杏仁苷對(duì)照品適量,加甲醇配制成濃度為0.324 mg/mL的對(duì)照品溶液。精密吸取此對(duì)照品溶液 0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8、1.0 mL 于 5 mL 容量瓶中,甲醇-水(30∶70)稀釋至刻度。分別精密吸取20μL,注入高效液相色譜儀,測定峰面積。以峰面積 Y為縱坐標(biāo),苦杏仁苷的濃度C(μg/mL)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到苦杏仁苷高濃度的回歸方程:Y=28413×C+6708.1(r=0.9990),表明苦杏仁苷在6.48～64.8μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

精密移取11.96μg/mL苦杏仁苷對(duì)照品溶液0.05、0.1、0.5、1.0、2.0 于 10 mL 容量瓶中 ,甲醇-水(30∶70)稀釋至刻度。分別精密吸取20μL,注入高效液相色譜儀,測定峰面積。以峰面積 Y為縱坐標(biāo),苦杏仁苷的濃度C(μg/mL)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到苦杏仁苷低濃度的回歸方程:Y=29398×C+674.89(r=0.9999),表明苦杏仁苷在0.0598～11.96μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.2 精密度試驗(yàn)

精密吸取同一對(duì)照品溶液(濃度為9.72μg/mL)20μL,按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次,測定峰面積,RSD為0.97%(n=6)。

2.1.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液在 0 h、2 h、5 h、7 h、24 h 分別測定苦杏仁苷的含量,其峰面積RSD為1.5%。表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.4 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品,精密移取5份,按“1.2.2”項(xiàng)下處理,分別測定苦杏仁苷的含量,RSD為1.7%(n=5)。

2.1.5 加樣回收率試驗(yàn)

分別精密移取同一批號(hào)本品6份,各0.1 mL至10 mL容量瓶中,加入0.2 mL苦杏仁苷對(duì)照品(0.598 mg/mL),按“1.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,測得苦杏仁苷的平均回收率為99.90%,RSD為3.0%。

2.2 體外透皮吸收實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表1給出了酊劑在兩種接收介質(zhì)中、不同濃度氮酮時(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。當(dāng)接收液為生理鹽水、氮酮濃度為4%時(shí),21 h的單位面積累積透過量最大(269.8μg/cm2),透皮速率為15.74μg/(cm2·h);當(dāng)接收液為甲醇-水(30∶70)、氮酮濃度為3%時(shí),21 h的單位面積累積透過量最大(222.7μg/cm2),透皮速率為11.26μg/(cm2·h),且加入各濃度氮酮后21 h單位面積累積透過量顯著高于不加促透劑時(shí)(P<0.05)。

透皮速率以生理鹽水組明顯大于甲醇-水(30∶70)組,21 h的單位面積累積透過量也是生理鹽水組較高?？赡苁呛笳吒咏谏憝h(huán)境,更有利于苦杏仁苷透過皮膚進(jìn)入接收液中,故確定以生理鹽水為接收液。結(jié)合圖2可以看出,在兩種接收介質(zhì)中,苦杏仁苷從酊劑中釋放、透過大鼠皮膚、進(jìn)入接收液的速度在開始階段較快,隨著透皮時(shí)間的增加,透過速率減慢[6]。

由表1的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以得知,酊劑中的苦杏仁苷在大鼠皮膚上可維持21 h的持續(xù)釋放,其經(jīng)皮滲透過程符合 Higuchi方程的擴(kuò)散模式。

表1 體外透皮吸收的實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.1 The experimental results of transdermal permeation

3 討論

外用制劑中,常用的滲透促進(jìn)劑有薄荷腦、冰片、丙二醇、氮酮和萜類物質(zhì)等。氮酮以使用濃度低、促透效果好、無毒無刺激性等而廣泛使用。氮酮對(duì)疏水性和親水性成分均有較好的促進(jìn)作用,適用于有效成分較多而復(fù)雜的中藥制劑[7]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,氮酮能夠明顯地促進(jìn)復(fù)方斯亞旦生發(fā)酊中苦杏仁苷的透皮吸收過程,且以其濃度為3%～4%時(shí)促透效果最好。文獻(xiàn)報(bào)道中也大多使用低濃度(0.5%～5%)的氮酮作為透皮促進(jìn)劑進(jìn)行研究,可能是考慮到氮酮本身具有的潛在生理毒性作用。

本實(shí)驗(yàn)建立了 HPLC考察復(fù)方斯亞旦生發(fā)酊中苦杏仁苷的透皮釋藥情況,此方法靈敏度高,分離效果好,專屬性高。實(shí)驗(yàn)中考慮到以甲醇-水(30∶70)作為接收液時(shí),與液相方法的流動(dòng)相系統(tǒng)一致,實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示以甲醇-水(30∶70)作為接收液時(shí),色譜圖的溶劑峰小、峰形好,且分離度優(yōu)于以生理鹽水作為接收液時(shí)[8]。

臨床外用制劑多為一天多次用藥,而本實(shí)驗(yàn)為了獲得酊劑中苦杏仁苷的最大透過量,將體外透皮吸收試驗(yàn)延長到21 h,但還是未達(dá)到釋藥的平臺(tái)期。根據(jù)經(jīng)皮滲透曲線可以看出,試驗(yàn)后期的藥物釋放量將逐漸減小,趨于釋藥平臺(tái)期。

此外,在體外透皮試驗(yàn)操作過程中,大鼠皮膚與擴(kuò)散池內(nèi)接收液之間易出現(xiàn)氣泡,形成一層屏障,這將阻礙苦杏仁苷透過皮膚進(jìn)入接收液中。故在每次取樣后加入新的接收介質(zhì)時(shí),都應(yīng)注意保持接收液與鼠皮的良好接觸,這是本試驗(yàn)各組結(jié)果重現(xiàn)性的關(guān)鍵。

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)-維吾爾藥分冊[M].烏魯木齊:新疆科技衛(wèi)生出版社,1998:173.

[2]國家藥典委員會(huì).中國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:196.

[3]彭松,白琳,牟光敏.氮酮對(duì)雷公藤透出液中雷公藤甲素的體外透皮促進(jìn)作用[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2000,11(5):391-392.

[4]高金波,侯艷秋,周海瑞.氮酮對(duì)鹽酸環(huán)丙沙星透皮吸收影響的研究[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2009,32(1):1-2.

[5]馬平勃.水溶性氮酮在生發(fā)靈酊劑中對(duì)阿魏酸體外透皮吸收的促進(jìn)作用研究[J].第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2002,22(1):56-58.

[6]盧聞.白川降壓透皮劑的吸收特征及劑型研究[D].西安:西安交通大學(xué),2003:17.

[7]楊芳芳,張永萍.鹽酸川穹嗪透皮貼劑體外透皮速率測定和體外釋放研究[J].淮海醫(yī)藥,2009,27(2):155-156.

[8]蘇小妹,王芳江,國華,等.生姜凝膠貼劑的制備及其體外透皮吸收的研究[J].江西中醫(yī)藥,2009,40(31):61-63.

Promotion of Amygdaloside Transdermal Absorption by Azone in Compound Siyadan Tincture

WANG Yuanji1,ZHAO Haijiao2,LI Huiling2,Luo Congyan2,CHEN Wen1,2
(College of Pharmacy,Shihezi University/Key Laboratory of Xinjiang Phytomedicine Resources,Shihezi 832000,China)

R284.2

A

1007-7383(2010)05-0596-04

2010-01-13

國家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2007BAI48B00)

王園姬 (1984-),女,碩士生,專業(yè)方向?yàn)樗幬镄轮苿┡c新劑型。

陳文(1967-),男,教授,從事藥物新制劑與新劑型研究;e-mail:chen-wen2000@126.com。