人參配伍五靈脂人參總皂苷的含量變化規(guī)律研究

北京市藥品監(jiān)督管理局海淀分局（100097） 李德全

中藥合理的配伍組合是方劑的核心，也是復(fù)方不同于單味藥的主要奧秘所在。我國古代對(duì)藥物的配伍禁忌主要有“十八反”和“十九畏”的記載。人參最早記載于我國第一部藥物學(xué)專著《神農(nóng)本草經(jīng)》，功用為：“主補(bǔ)五臟，安精神，定魂魄，止驚悸，明目，開心益智，久服輕身延年。”長期的醫(yī)療實(shí)踐證實(shí)了人參補(bǔ)氣藥之首的地位。近年來，我國醫(yī)藥界更從藥理、臨床等方面研究了人參延緩衰老的藥理、臨床作用。

“人參最畏五靈脂”出自“十九畏”，人參與五靈脂一直被視為配伍禁忌，但在臨床上二者也經(jīng)常有配伍應(yīng)用。陳馥馨從古今67424個(gè)方劑中統(tǒng)計(jì)到人參、五靈脂合用的有31個(gè)[1]。名老中醫(yī)姜春華等亦以人參和五靈脂配伍用于臨床[2]。二者配伍在毒性實(shí)驗(yàn)[3]、抗應(yīng)激實(shí)驗(yàn)（游泳耗竭時(shí)間、缺氧耐受能力、低溫存活時(shí)間）[4][5]都做了大量研究。而二者配伍后對(duì)藥物成分方面的影響變化尚無人研究。人參總皂苷是人參的主要有效成分之一，有廣泛的生物活性，在抗衰老方面有廣泛的應(yīng)用。目前研究報(bào)道的也較多，如潘鑫鑫[6]等研究發(fā)現(xiàn)，人參總皂苷有減少自由基對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損傷和改善衰老模型小鼠的免疫和內(nèi)分泌系統(tǒng)等作用，具有一定的抗衰老作用。本實(shí)驗(yàn)用紫外分光光度法測定人參與五靈脂配伍后其總皂苷的含量變化，考察五靈脂對(duì)人參有效成分人參總皂苷的影響，為二者配伍在臨床上是否能應(yīng)用于抗衰老方面做初步探討。

1 實(shí)驗(yàn)用藥材與材料

1.1 實(shí)驗(yàn)用中藥材 人參為五加科植物人參Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根（生曬參），產(chǎn)地遼寧，五靈脂（鼯鼠科橙足鼯鼠Trogopterus Xanthies的干燥糞便），產(chǎn)地山西。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料 儀器：METTLER AE240電子天平；HITACHI U2000可見紫外分光光度計(jì)，水浴鍋。試劑：香草醛、冰醋酸、高氯酸、甲醇。對(duì)照品：中國藥品生物制品檢定所Re（批號(hào)110754-200218）。

2 樣品及有關(guān)溶液的制備與分組

2.1 分組 共分為6組，即A：人參20g單煎；B：五靈脂20g單煎；C：人參20g、五靈脂20g共煎；D：人參20g、五靈脂20g單煎后混合；E：人參20g、五靈脂10g共煎；F：人參20g、五靈脂40g共煎。

2.2 實(shí)驗(yàn)溶液制備 ①各組加入15倍量水煎煮兩次，頭煎為1小時(shí)，后倒出提取液，再加入15倍量水再煎，第二煎半小時(shí)，后合并提取液。將合并液抽濾后濃縮至與原藥材1：1之量。②用等量乙醚（每次20ml）萃取4次，棄去乙醚層。再用正丁醇萃取4次（每次20ml），合并正丁醇層，水層棄去。③將正丁醇的萃取層用1%氫氧化鈉洗3～4次（每次20ml），棄去氫氧化鈉溶液層。后用正丁醇飽和水溶液洗至pH值在7左右。④回收正丁醇，將剩余物用甲醇溶解，定容在10ml容量瓶內(nèi)。檢測前用活性炭脫色（1小時(shí)，60℃水?。?/p>

注：A是人參樣品掃描曲線，B為人參皂苷Re掃描曲線，C為五靈脂樣品（陰性空白對(duì)照掃描圖），與基線齊平無干擾

2.3 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取人參皂苷Re2.3mg置5ml容量瓶中，加甲醇使其溶解后稀釋至刻度，作為儲(chǔ)備溶液備用。

3 方法學(xué)研究

3.1 測定波長的確定 經(jīng)過掃描，樣品和對(duì)照品的最大吸收波長均為543.5±0.5nm，吸收曲線形狀近似，陰性空白對(duì)照（五靈脂）無干擾。

3.2 陰性掃描對(duì)照 未顯色前的人參樣品掃描圖，沒有吸收。

3.3 線性關(guān)系考察 精密吸取人參皂苷Re對(duì)照品0.0023g置5ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取0.05ml，0.1ml，0.2ml，0.3ml，0.4ml置12ml具塞試管中100℃水浴揮干劑，加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，60℃水浴顯色15min，冰浴冷卻至常溫，加入5ml冰醋酸稀釋搖勻。在543.5nm處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)品體積為橫坐標(biāo)計(jì)算工作曲線的回歸方程為：y=3.323x-0.0196（r=0.9994）。

附表1 線性關(guān)系考察

附表3 穩(wěn)定性考察

附表4 精密度考察

附表5 重現(xiàn)性考察

由附表1、附表2的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見，人參皂苷對(duì)照品在0.023～0.184mg范圍內(nèi)質(zhì)量與吸收度呈良好線性關(guān)系。

3.4 穩(wěn)定性考察 在0，4，8，12，16小時(shí)每個(gè)時(shí)間點(diǎn)精密量取樣品0.04ml，置10ml具塞試管中100℃水浴揮干溶劑，加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，60℃水浴顯色15min，冰浴冷卻至常溫，加入5ml冰醋酸稀釋搖勻。在543.5nm處測定吸收度，由附表1的數(shù)據(jù)計(jì)算RSD＝1.65%，樣品溶液穩(wěn)定性良好。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見附表3。

3.5 精密度考察 分別精密吸取同一份人參樣品5份0.04ml，同上法顯色后測定吸收度，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見附表4，由附表4的數(shù)據(jù)計(jì)算RSD=1.26%，本實(shí)驗(yàn)精密度良好。

3.6 重現(xiàn)性考察 人參平行做5份樣品，取0.04ml，顯色同3.5，在543.5nm處測定吸收度。由附表5的數(shù)據(jù)計(jì)算RSD=3.2%，本實(shí)驗(yàn)重現(xiàn)性良好。

3.7 回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取已知量樣品，準(zhǔn)確加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)品0.1ml，按前述方法處理，顯色進(jìn)行含量測定，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見附表6。平均回收率98.96%。本法具有良好的回收率。

4 有效部位樣品總皂苷元含量測定

量取按上述方法制備的樣品各0.04ml同上顯色方法，隨行空白，在543.5nm處測定吸收度，并由工作曲線計(jì)算含量，見附表7。

附表6 加樣回收率

附表7 樣品含量

5 結(jié)果與討論

測定結(jié)果表明，二者配伍后人參總皂苷含量下降，人參五靈脂混合煎煮后皂苷含量下降尤其明顯，且隨著五靈脂用量的增大，人參總皂苷含量下降明顯，成正比關(guān)系，即人參:五靈脂用量為2:1時(shí)含量下降16%，人參:五靈脂用量為1:1時(shí)含量下降31%，人參:五靈脂用量為1:2時(shí)含量下降51.74%。

二者1：1用量單獨(dú)煎煮后再混合組的人參皂苷含量變化不大，僅下降1.7%，而1：1用量混合煎煮則下降約31%，二者相差很大，顯示混合煎煮的方式使人參總皂苷含量顯著下降。

上述數(shù)據(jù)表明五靈脂的用量和二者的煎煮方式是影響人參總皂苷含量的兩個(gè)重要因素。

人參五靈脂配伍后使人參的皂苷類有效成分含量下降，這些變化必然對(duì)人參的藥理作用產(chǎn)生影響，由于皂苷類成分在抗衰老和對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)影響突出，因此在臨床應(yīng)用人參益智和抗衰老的作用時(shí)，應(yīng)避免與五靈脂一同使用。本實(shí)驗(yàn)表明人參和五靈脂在益智和抗衰老的范圍內(nèi)的配伍使用應(yīng)屬于七情中的“相惡”范疇，“人參最畏五靈脂”的說法是有一定科學(xué)依據(jù)的。