精苓消瘤膠囊對(duì)Beagle犬的長(zhǎng)期毒性研究

劉 悅,靳洪濤,李 偃,王愛平,黃明芳,魏金鋒,張晶璇

(1.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥物研究所新藥安全評(píng)價(jià)研究中心,北京100050;2.西安新星醫(yī)藥研究所,西安710065)

手術(shù)、放射治療和化學(xué)治療是當(dāng)前惡性腫瘤特別是實(shí)體瘤治療的三大支柱,隨著技術(shù)手段的不斷更新,前兩者的治療潛力已達(dá)極限且多限于局部治療,而且大多數(shù)化療藥物缺乏特異的選擇性,在殺死癌細(xì)胞的同時(shí),也會(huì)殺傷正常細(xì)胞,對(duì)人體造成一定的損傷[1],因此,保護(hù)正常組織免受化療的損害從而減輕毒副作用,是提高腫瘤治療效果的重要途徑[2].從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)觀點(diǎn)來(lái)看,扶正祛邪的根本目的在于改善和恢復(fù)機(jī)體神經(jīng)―體液調(diào)節(jié),增強(qiáng)免疫調(diào)節(jié),從而殺死體內(nèi)的惡性腫瘤細(xì)胞,手術(shù)、放療、化療雖然都是祛邪抗癌的有效手段,但著眼于消滅癌性病灶,勢(shì)必會(huì)造成機(jī)體氣血耗傷,臟腑功能紊亂失調(diào),相反,中醫(yī)著眼于整體,在祛邪抗癌同時(shí)給予扶正培本以達(dá)到攻補(bǔ)兼施[3-4].精苓消瘤膠囊是西安新星醫(yī)藥研究所研制的一種“扶正祛邪”類中藥,主要用于抗腫瘤的治療,該藥能提高病人的生存質(zhì)量,既能抑制腫瘤的生長(zhǎng)又不破壞人體免疫系統(tǒng).為了評(píng)價(jià)其安全性,進(jìn)行了精苓消瘤膠囊長(zhǎng)期給藥對(duì)Beagle犬產(chǎn)生的毒性反應(yīng)實(shí)驗(yàn),觀察了其毒性作用的靶器官及其損害的可逆性,確定了無(wú)毒反應(yīng)劑量,為臨床安全用藥的劑量設(shè)計(jì)和臨床毒副反應(yīng)監(jiān)測(cè)提供了參考資料[5].

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 供試品

精苓消瘤膠囊,西安新星醫(yī)藥研究所提供,批號(hào):20080201,固體,為棕褐色粉狀顆粒.

1.2 動(dòng)物

Beagle犬24只,雌雄各半,犬齡6～8個(gè)月,體重5～7 kg,由北京科宇動(dòng)物養(yǎng)殖中心提供(動(dòng)物許可證號(hào):SCXK(京)2007-0003).動(dòng)物飼養(yǎng)于普通環(huán)境設(shè)施內(nèi),由獲得資格認(rèn)可的人員飼養(yǎng).設(shè)施保持連續(xù)通風(fēng),光照時(shí)間為7:30～19:30,室溫18～24℃,濕度40%～70%.每籠飼養(yǎng)1只犬,由北京科澳協(xié)力飼料有限公司提供的標(biāo)準(zhǔn)膨化飼料喂養(yǎng),每天上午和下午各150 g,自由攝食.

1.3 儀器

Vitalab SELECTRA-E全自動(dòng)生化分析儀(荷蘭);AVL-9181電解質(zhì)分析儀(瑞士);NIKON KODEN 7222型五分類全自動(dòng)血球計(jì)數(shù)儀(日本);STAGO STA-4型半自動(dòng)四通道血液凝固分析儀(法國(guó));泰利特GJ2-T-50尿十項(xiàng)分析儀(美國(guó));聯(lián)合MCS7200生物顯微圖像分析系統(tǒng)(美國(guó));Leica ASP300封閉式全自動(dòng)組織脫水機(jī)(德國(guó));Leica EG1140型分體式組織包埋機(jī)(德國(guó));Leica RM 2145型半自動(dòng)輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)(德國(guó));O-lympus熒光顯微鏡(日本)等.

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動(dòng)物分組與給藥

將Beagle犬按體重隨機(jī)分成4組,每組6只,雌雄各半,設(shè)空白對(duì)照組,精苓消瘤膠囊高、中、低3個(gè)劑量組(1.50、0.60、0.25g/kg,分別相當(dāng)于臨床擬用劑量的20、8、3倍).每日上午8:30～12:00給藥,每周給藥6 d,周日不給藥,持續(xù)180 d[6].

2.2 觀察指標(biāo)

每天觀察犬的皮毛、運(yùn)動(dòng)、神態(tài)、呼吸、進(jìn)食量、糞便、黏膜顏色等;每周測(cè)量1次犬的體重、體溫;分別于給藥前(2次)、給藥后90、180 d和恢復(fù)期結(jié)束后檢測(cè)犬的心電圖、血液學(xué)指標(biāo)及血液生化學(xué)指標(biāo),血液學(xué)指標(biāo)包括:紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、血紅蛋白(HGB)、紅細(xì)胞壓積容量(HCT)、紅細(xì)胞平均體積(MCV)、平均血紅蛋白量(MCH)、紅細(xì)胞分布寬度-變異指數(shù)(RDWCV)、血小板總數(shù)(PLT)、血小板平均體積(MPV);血液生化學(xué)指標(biāo)包括:丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、葡萄糖(GLU)、尿素氮(BUN)、甘油三酯(TG)、球蛋白(GLO)、總膽固醇(CHO);于給藥后180 d和恢復(fù)期結(jié)束后膀胱取尿進(jìn)行尿常規(guī)檢查,其指標(biāo)包括:葡萄糖(GLU)、膽紅素(BIL)、酮體(KET)、潛血(BLO)、蛋白(PRO)、亞硝酸鹽(NIT);于給藥后180 d和恢復(fù)期結(jié)束后進(jìn)行病理學(xué)檢查,指標(biāo)包括:系統(tǒng)尸檢、臟器重量及臟器系數(shù)檢查、組織病理學(xué)檢查[7-8].

2.3 恢復(fù)期觀察

末次給藥后24 h后,每組剖殺雌雄動(dòng)物各2只,其余動(dòng)物繼續(xù)觀察6周后處死,以便了解毒性反應(yīng)的恢復(fù)情況和可能出現(xiàn)的遲發(fā)性毒性.

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 一般生理性指標(biāo)觀察

3.1.1 籠旁觀察

各組犬外觀體征、體表黏膜未見異常,行為活動(dòng)正常,糞便正常.在實(shí)驗(yàn)期間無(wú)犬死亡.

3.1.2 體重、體溫和食量

實(shí)驗(yàn)期間,各組犬體重逐步上升,精苓消瘤膠囊各劑量組與對(duì)照組相比,體重變化無(wú)顯著性差異;各組犬體溫變化也均在正常范圍膠內(nèi);精苓消瘤囊各劑量組犬飼料消耗量與對(duì)照組相比也無(wú)顯著性差異.

3.1.3 心電圖檢查

給藥結(jié)束時(shí),精苓消瘤膠囊0.60 g/kg組的心率低于對(duì)照組(125±19*↓,vs 150±19,次/min,*P＜0.05),1.50、0.60 g?kg-1組的PR間期與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(0.056±0.005*↓、0.054±0.004*↓,vs 0.067±0.010,s,*P＜0.05),0.25g/kg組QRS間期與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(0.047±0.005*↓,vs 0.059±0.006,s,*P＜0.05),因?yàn)椴痪哂袆┝糠磻?yīng)關(guān)系,故心率、QRS間期的改變沒(méi)有毒理學(xué)意義.結(jié)合歷史數(shù)據(jù)分析恢復(fù)期結(jié)束時(shí)各指標(biāo)給藥組與對(duì)照組比較均未見明顯差別,見表1.

表1 精苓消瘤膠囊對(duì)Beag le犬心電圖指標(biāo)的影響

表1 精苓消瘤膠囊對(duì)Beag le犬心電圖指標(biāo)的影響

注:與對(duì)照組比較*P＜0.05,**P＜0.01

組別 天數(shù)/d動(dòng)物數(shù)/只 室率/(beats?min-1)PR間期/s QRS間期/s QT間期/s對(duì)照組-7 6 121±21 0.114±0.017 0.072±0.013 0.207±0.016高劑量組-7 6 124±21 0.120±0.000 0.066±0.017 0.215±0.033中劑量組-7 6 119±29 0.111±0.014 0.073±0.042 0.207±0.016低劑量組-7 6 130±23 0.108±0.013 0.067±0.013 0.197±0.006對(duì)照組0 6 115±29 0.119±0.015 0.077±0.058 0.205±0.008高劑量組0 6 125±28 0.115±0.012 0.066±0.015 0.198±0.004中劑量組0 6 115±32 0.119±0.003 0.068±0.011 0.210±0.017低劑量組0 6 156±23*0.118±0.006 0.058±0.013 0.200±0.000對(duì)照組90 6 113±26 0.079±0.031 0.067±0.027 0.194±0.013高劑量組90 6 124±20 0.077±0.007 0.052±0.014 0.188±0.021中劑量組90 6 107±18 0.075±0.008 0.052±0.010 0.197±0.006低劑量組90 6 115±33 0.078±0.004 0.066±0.007 0.193±0.016對(duì)照組180 6 150±19 0.067±0.010 0.059±0.006 0.179±0.025高劑量組180 6 143±24 0.056±0.005*0.055±0.011 0.179±0.025中劑量組180 6 125±19* 0.054±0.004*0.059±0.011 0.197±0.020低劑量組180 6 136±19 0.063±0.007 0.047±0.005*0.176±0.017對(duì)照組224 2 148 0.085 0.045 0.188高劑量組224 2 86 0.041 0.041 0.200中劑量組224 2 129 0.05 0.050 0.223低劑量組224 2 109 0.052 0.052 0.190

3.2 血液學(xué)指標(biāo)

藥前健康體檢時(shí),給藥組個(gè)別血液學(xué)指標(biāo)與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,但絕對(duì)值差別較小,判定為正常生理范圍內(nèi)的波動(dòng).給藥結(jié)束時(shí)精苓消瘤膠囊1.50 g/kg組的WBC與對(duì)照組比較絕對(duì)值有所升高(26.3±10.5*↑,vs 16.2±4.5,109/L,*P＜0.05),恢復(fù)期結(jié)束時(shí)未見異常,見表2.

表2 精苓消瘤膠囊對(duì)Beag le犬血液學(xué)指標(biāo)的影響

注:與對(duì)照組比較*P＜0.05,**P＜0.01

組別 天數(shù)/d動(dòng)物數(shù)/只WBC/(109?L-1)RBC/(1012?L-1)HGB/(g?L-1)HCT/%MCV/fL MCH/pg RDW-CV/%PLT/(109?L-1)MPV/fL對(duì)照組-7 6 20.9±5.1 7.32±0.69 166.2±18.4 43.2±5.1 58.9±1.9 22.7±0.8 14.8±0.6 318.7±110.8 5.7±0.5高劑量組-7 6 18.8±6.2 7.35±1.11 165.7±24.4 43.4±6.2 59.2±2.8 22.6±1.4 14.6±0.3 255.8±92.1 6.9±0.4*中劑量組-7 6 24.1±4.2 7.36±0.71 160.2±14.6 42.2±3.9 57.4±2.5 21.8±0.9 15.2±0.8 296.5±54.3 6.0±1.2低劑量組0 6 21.7±8.9 7.11±1.09 170.0±27.8 43.2±6.4 60.8±2.6 23.9±1.1 14.3±0.7 331.8±98.5 6.6±1.1對(duì)照組0 6 17.1±2.0 5.99±0.55 131.0±10.2 34.6±2.8 57.8±1.8 21.9±1.1 14.9±0.6 242.8±53.2 6.2±0.8高劑量組0 6 16.7±6.8 5.94±1.14 137.8±32.2 36.0±7.8 60.5±3.0 23.1±1.4 14.9±0.7 244.3±84.9 6.2±0.9中劑量組0 6 16.3±4.8 6.17±0.16 138.2±5.0 36.7±1.3 59.5±2.1 22.4±1.0 15.2±0.2 248.2±46.7 6.0±1.2低劑量組0 6 15.6±5.3 6.03±0.58 141.5±19.9 37.0±4.8 61.2±2.9*23.4±1.3 14.9±0.5 289.7±60.6 6.2±0.9對(duì)照組90 6 12.8±3.0 7.0±0.9 149.2±16.2 43.5±4.8 62.4±2.3 21.5±1.6 12.7±0.6 255.2±47.4 5.8±0.5高劑量組90 6 14.9±3.7 6.7±0.9 142.3±22.7 41.8±6.1 62.7±2.8 21.3±1.0 12.7±0.9 255.8±66.3 5.8±0.6中劑量組90 6 16.9±5.7 6.7±1.1 145.5±23.8 43.2±6.8 64.1±1.5 21.6±0.5 12.5±0.2 289.0±44.9 5.7±0.9低劑量組90 6 16.6±4.8 7.4±1.3 160.0±34.3 47.1±9.6 63.8±2.3 21.7±0.9 12.5±0.6 329.3±74.8 6.0±0.5對(duì)照組180 6 16.2±4.5 8.02±0.70 178.2±14.1 51.8±4.1 64.7±2.0 22.3±0.7 12.5±0.5 327.3±79.8 6.7±0.9高劑量組180 6 26.3±10.5*8.78±1.25 201.5±28.6 56.4±8.0 64.4±3.4 23.1±1.6 12.9±1.2 340.8±119.7 7.2±0.7中劑量組180 6 20.1±4.8 8.41±1.01 191.3±22.7 55.5±6.9 65.9±2.0 22.8±1.0 12.2±0.3 359.2±115.3 7.1±1.0低劑量組180 6 20.1±5.9 8.85±1.38 202.5±26.6 57.6±8.1 65.3±2.2 23.0±0.9 12.6±0.6 386.3±139.3 7.3±1.0對(duì)照組224 2 13.2 7.49 165 50.0 67.1 22.1 12 246 6.3高劑量組224 2 17.6 7.02 149 45.6 65 21.2 12 276 6.2中劑量組224 2 22.5 7.57 168 50.1 66.3 22.3 12.2 381 4.6低劑量組224 2 18.1 7.19 162 49.5 68.7 22.5 12.2 281 5.3

3.3 血液生化學(xué)指標(biāo)

給藥前生化學(xué)檢查,個(gè)別給藥組指標(biāo)與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,但絕對(duì)值差別較小,為正常生理范圍內(nèi)的波動(dòng).給藥90 d時(shí),精苓消瘤膠囊1.50、0.25g/kg組的TP與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(62.0±3.6**↓、61.4±3.2**↓,vs 67.8±1.9 g/L,**P＜0.01),0.60 g.kg-1組的BUN與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(2.46±0.52*↑,vs 1.65±0.38 mmol/L,*P＜0.05),0.60、0.25 g/kg組的TG與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(0.40±0.07*↓、0.38±0.08*↓,vs 0.49±0.06 mmol/L,*P＜0.05),其中由于BUN的變化沒(méi)有劑量反應(yīng)關(guān)系,而且絕對(duì)值差別較小,判定無(wú)毒理學(xué)意義.給藥結(jié)束時(shí),精苓消瘤膠囊1.50 g/kg組的ALB與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(31.6±2.7*↓,vs 35.6±2.1 g/L,*P＜0.05),同時(shí)GLO絕對(duì)值有所增加(37.2±4.6↑,vs 34.9±5.3 g/L,P＞0.05),但各給藥組TP于對(duì)照組結(jié)果較一致.恢復(fù)期結(jié)束時(shí)上述指標(biāo)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異均消失.見表3.

表3 精苓消瘤膠囊對(duì)Beag le犬血液生化學(xué)指標(biāo)的影響

表3 精苓消瘤膠囊對(duì)Beag le犬血液生化學(xué)指標(biāo)的影響

注:與對(duì)照組比較*P＜0.05,**P＜0.01

組別 天數(shù)/d動(dòng)物數(shù)/只ALT/(U?L-1)AST/(U?L-1)TP/(g?L-1)ALB/(g?L-1)GLU/(mmol?L-1)BUN/(mmol?L-1)TG/(mmol?L-1)GLO/(g?L-1)CHO/(mmol?L-1)對(duì)照組-7 6 27.5±4.3 49.0±8.7 61.3±6.2 29.6±3.9 2.51±0.43 2.27±0.66 0.89±0.29 31.7±3.2 3.94±0.37高劑量組-7 6 32.3±5.7 50.0±2.3 59.7±3.4 29.6±3.0 2.97±0.53 2.68±0.79 0.94±0.38 30.2±2.1 3.99±0.86中劑量組-7 6 32.2±7.0 51.2±5.2 59.5±3.3 28.6±2.0 2.51±0.83 2.35±1.20 0.85±0.23 30.8±4.1 3.72±0.74低劑量組-7 6 27.8±9.5 49.5±4.7 60.7±3.8 30.3±1.8 2.89±0.50 3.29±0.97 0.93±0.30 30.4±3.2 4.45±1.11對(duì)照組0 6 25.7±5.8 53.8±7.4 62.5±4.2 31.2±2.3 3.25±0.83 3.33±0.65 0.74±0.10 31.3±3.8 4.35±0.92高劑量組0 6 31.2±9.1 55.0±7.5 63.3±5.8 32.7±3.7 3.35±0.40 4.84±1.69 0.77±0.17 30.7±2.7 4.43±0.58中劑量組0 6 31.2±4.5 59.3±7.3 64.8±3.9 34.0±2.2 3.00±0.37 3.58±0.65 0.67±0.16 30.8±2.0 3.87±0.74低劑量組0 6 30.8±7.8 55.0±4.2 64.0±4.1 33.4±2.8 3.01±0.32 4.29±2.00 0.76±0.15 30.6±2.2 4.89±0.72對(duì)照組90 6 32.3±5.2 35.2±5.7 67.8±1.9 34.1±1.2 3.78±0.45 1.65±0.38 0.49±0.06 33.7±2.4 3.37±0.74高劑量組90 6 29.8±3.2 34.3±5.3 62.0±3.6**27.4±9.6 3.78±0.38 2.18±0.94 0.55±0.13 34.7±9.7 3.59±0.64中劑量組90 6 27.5±4.6 35.2±3.9 64.0±4.7 33.4±1.4 4.20±0.45 2.46±0.52* 0.40±0.07*30.6±3.8 3.15±0.63低劑量組90 6 27.2±5.0 34.3±5.8 61.4±3.2**31.7±2.4 4.27±0.56 2.31±0.80 0.38±0.08* 29.7±2.2*3.64±0.76對(duì)照組180 6 34.2±3.5 32.0±4.7 70.4±5.7 35.6±2.1 5.71±0.93 2.51±0.63 0.49±0.16 34.9±5.3 3.68±1.10高劑量組180 6 30.0±4.4 27.7±4.8 68.8±4.2 31.6±2.7*6.59±0.54 2.72±0.85 0.52±0.15 37.2±4.6 4.36±0.88中劑量組180 6 35.5±10.6 32.5±9.4 67.2±5.8 35.1±4.5 6.54±0.79 3.37±1.73 0.49±0.17 32.1±6.7 3.39±0.90低劑量組180 6 28.8±8.6 31.2±3.8 68.0±4.2 33.6±4.5 6.15±0.59 3.94±1.58 0.49±0.31 34.4±2.5 4.60±1.42對(duì)照組224 2 26 44.5 67.4 32.1 3.72 2.79 0.64 35.3 4.19高劑量組224 2 29.5 35.5 64.5 30.5 4.74 3.46 0.51 34 4.22中劑量組224 2 25 45.5 64 31.1 4.38 2.84 0.55 32.9 2.95低劑量組224 2 25.5 42 62.3 29.9 4.42 2.85 0.76 32.5 3.69

3.4 眼科檢查

精苓消瘤膠囊各劑量組犬的眼瞼、眼底、瞳孔、角膜、結(jié)膜、虹膜、晶體均未發(fā)現(xiàn)異常變化.

3.5 尿常規(guī)檢查

給藥結(jié)束及恢復(fù)期結(jié)束時(shí)進(jìn)行尿常規(guī)分析檢查發(fā)現(xiàn),包括對(duì)照組在內(nèi)的各組BLO、KET、PRO有一定的陽(yáng)性結(jié)果,歷史數(shù)據(jù)比較未見明顯差別,判定與用藥無(wú)關(guān).見表4.

表4 精苓消瘤膠囊對(duì)Beagle犬尿液生化學(xué)指標(biāo)的影響

3.6 病理學(xué)檢查

系統(tǒng)尸檢,給藥結(jié)束及恢復(fù)期結(jié)束各組織及器官均未見異常;臟器重量及臟器系數(shù)檢查,給藥結(jié)束時(shí)精苓消瘤膠囊各給藥組的前列腺重量和臟器系數(shù)有所增加,恢復(fù)期結(jié)束時(shí)未見異常,給藥結(jié)束時(shí)各給藥組的前列腺組織病理學(xué)檢查未見異常,故此改變沒(méi)有毒理學(xué)意義,各給藥組其他臟器臟器重量和臟器系數(shù)與對(duì)照組比較均未見明顯異常;組織病理學(xué)檢查,給藥結(jié)束及恢復(fù)期結(jié)束,與對(duì)照組相比,各給藥組均未出現(xiàn)相關(guān)毒性病理改變.

4 討 論

精苓消瘤膠囊對(duì)Beagle犬連續(xù)給藥180 d,各給藥組犬的外觀、黏膜、活動(dòng)、體重、體溫、食量及病理學(xué)檢查均未出現(xiàn)異常改變;心電圖檢查中出現(xiàn)的給藥結(jié)束后PR與QRS間期異常情況,均在恢復(fù)期結(jié)束后消失,由于不具備劑量反應(yīng)關(guān)系,故其改變不具備毒理學(xué)意義;根據(jù)血液學(xué)及血液生化學(xué)檢查出現(xiàn)的異常情況,推斷精苓消瘤膠囊1.50 g/kg長(zhǎng)期給藥可能會(huì)導(dǎo)致Beagle犬WBC的升高,TP的輕微降低,ALB的輕微降低和GLO的輕微增高,但TP、ALB、GLO的變化均為一過(guò)性,且是否與藥物的藥理作用有關(guān),值得進(jìn)一步研究或者參考其他藥效藥理資料進(jìn)行驗(yàn)證.

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在本試驗(yàn)條件下,Beagle犬口服精苓消瘤膠囊180 d給藥的未見明顯毒性反應(yīng)劑量為0.60 g/kg.

[1]韓鳳娟.中醫(yī)學(xué)防治腫瘤作用機(jī)制的現(xiàn)代研究思路與探索[J].江蘇中醫(yī),2003,24(5):9-11.

[2]謝任剛,余洪生.扶正祛邪中藥抗惡性腫瘤的研究進(jìn)展[J].湖財(cái)中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2004,10(9):55-57.

[3]張秀平.王麗青.鄭志翠,等.貞芪扶正顆粒輔助治療晚期惡性腫瘤68例[J].中國(guó)民間療法,2003,11(1):50-51.

[4]李慧臻.應(yīng)用扶正祛邪中藥提高患者帶瘤生存質(zhì)量的體會(huì)[J].中華現(xiàn)代中醫(yī)學(xué)雜志,2006,2(2):122-124.

[5]黃小舞,梅世昌,李 外.銀杏內(nèi)酯B注射液對(duì)Beagle犬的長(zhǎng)期毒性研究[J].中國(guó)藥房,2008,19(30):2338-2340.

[6]馬仁強(qiáng),王紅顯,陳健文,等.中藥注射劑長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)研究問(wèn)題探討[J].中藥藥理與臨床,2004,20(5):45-48.

[7]YUAN B J.Evaluable Basis of New Drug[M].Beijing:Beijing Second Military Medical University Press,2002:68-80.

[8]林壯民,王愛平,梅清華,等.抗EB病毒口服液對(duì)Beagle犬的長(zhǎng)期毒性研究[J].中國(guó)藥房,2006,17(14):1054-1056.