長柱金絲桃抗抑郁作用有效部位的實驗研究

楊連榮,張哲鋒,齊樂輝,楊軍濤,王金杰,李彥冰

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué),哈爾濱150040;2.黑龍江省獸藥飼料監(jiān)察所,哈爾濱150069)

長柱金絲桃又名紅旱蓮、湖南連翹,系藤黃科金絲桃屬植物黃海棠(Hypericum ascyron L.)的全草[1],具有涼血止血、平肝消腫、散結(jié)排膿、清熱解毒等功效.該植物可用于抗抑郁癥、抗病毒、抗癌等[2-3].生于荒坡、山野、路邊,我國東北地區(qū)及黃河、長江、珠江流域均有分布.近年研究表明,該屬植物具有抗抑郁等藥理活性[4-8].本研究在長柱金絲桃抗抑郁藥效學(xué)研究的基礎(chǔ)上[9],選用小鼠強(qiáng)迫游泳模型對其抗抑郁有效部位進(jìn)行了篩選研究,以便為該植物的進(jìn)一步開發(fā)提供理論依據(jù).

1 實驗材料

1.1 動物

昆明種雌性小鼠,(20±2)g,由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供,飼養(yǎng)在25℃條件下,自由進(jìn)食飲水,實驗前穩(wěn)定3 d.

1.2 藥物

陽性對照藥:百憂解(鹽酸氟西汀),美國禮來公司生產(chǎn),禮來蘇州制藥有限公司分裝,批號A202606,實驗前用蒸餾水配成1 mg/mL(以氟西汀計)的溶液;長柱金絲桃(產(chǎn)地為黑龍江省尚志市,經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院于加賓教授鑒定為Hypericum ascyron L.);0.9%生理鹽水.

2 實驗方法

2.1 樣品的制備

長柱金絲桃全草,用80%乙醇回流提取,回收乙醇,減壓干燥,干浸膏經(jīng)熱水處理得A(溶于熱水)部分,B(沉淀)部分,稱取A、B部分適量,分別用蒸餾水溶解,配制成每毫升相當(dāng)于0.5 g生藥量的溶液,備用.經(jīng)預(yù)實驗后,稱取A部分適量,上聚酰胺層析柱,分別以水、生藥量質(zhì)量分?jǐn)?shù)30%乙醇、生藥量質(zhì)量分?jǐn)?shù)95%乙醇和生藥量質(zhì)量分?jǐn)?shù)3.5%氨水洗脫,得到各洗脫部分,備用.

2.2 小鼠強(qiáng)迫游泳實驗

100只小鼠隨機(jī)分組,每組10只.空白對照組和百憂解組實驗前24、5 h均灌胃給予生理鹽水20 mL/kg,實驗前1 h空白對照組繼續(xù)給予生理鹽水,百憂解組灌胃給予配好的鹽酸氟西汀溶液20mL/kg,其余組實驗前24、5、1 h均分別灌胃給予配好的藥液,按20 mL/kg給藥.

小鼠絕望時間的測定:將小鼠放入高20 cm,直徑14 cm的圓柱型玻璃杯中,每缸1只,用紙板隔離各玻璃杯,杯中水深l0 cm,水溫控制在(25±1)℃,每做完一只后即換水.小鼠游泳時間為6 min,累計后4min內(nèi)小鼠不動時間.整個過程用數(shù)碼攝像記錄,結(jié)果評判由非實驗人員完成,以保證結(jié)果客觀.所謂不動是指小鼠在水中停止掙扎,或呈漂浮狀態(tài),僅有細(xì)小的肢體運(yùn)動以保持頭部浮在水面.

2.3 統(tǒng)計學(xué)分析

數(shù)據(jù)以均數(shù) ±標(biāo)準(zhǔn)差(ˉx±S)表示,顯著性檢驗采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行單向方差分析,以P≤0.05為差異有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義.

3 數(shù)據(jù)及結(jié)果

3.1 樣品A、B部分對小鼠強(qiáng)迫游泳絕望行為的影響

表1結(jié)果表明,長柱金絲桃全草的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80%乙醇提取物,經(jīng)熱水處理所得的A部分能明顯縮短小鼠強(qiáng)迫游泳不動時間,與空白對照組比較,提取物A(按生藥量計10 g/kg)有顯著性差異,提取物B沒有顯著性差異,故對A部分進(jìn)行進(jìn)一步篩選.

表1 A、B部分對小鼠絕望行為的影響(n=10)

表1 A、B部分對小鼠絕望行為的影響(n=10)

注:與空白對照組比較*P＜0.05,**P＜0.01

組別 劑量/(g?kg-1)游泳不動時間/s空白組-125.30±26.66百憂解組(以氟西汀計)0.02 73.90±22.25**提取物A組(含生藥量)10 99.30±27.02*提取物B組(含生藥量)10 115.60±23.22

3.2 各洗脫部分對小鼠強(qiáng)迫游泳絕望行為的影響

表2結(jié)果表明,提取物A的30%乙醇洗脫部分能明顯縮短小鼠強(qiáng)迫游泳不動時間,與空白對照組比較,30%乙醇洗脫部分(按生藥量計10 g/kg)有顯著性差異,其余部分沒有顯著性差異,表明此部分在行為絕望動物模型上有抗抑郁作用,是其抗抑郁有效部位.

表2 各部分對小鼠絕望行為的影響,n=10)

表2 各部分對小鼠絕望行為的影響,n=10)

注:與空白對照組比較*P＜0.05,**P＜0.01

組別 劑量/(g?kg-1)游泳不動時間/s空白組-123.10±32.64百憂解組(以氟西汀計)0.02 63.50±31.70**水洗脫組(含生藥量)10 112.80±22.61 30%乙醇洗脫組(生藥量質(zhì)量分?jǐn)?shù))10 88.70±16.10**95%乙醇洗脫組(生藥量質(zhì)量分?jǐn)?shù))10 115.70±29.56 3.5%氨水洗脫組(生藥量質(zhì)量分?jǐn)?shù))10 113.50±24.09

4 結(jié) 語

抑郁動物模型對抗抑郁藥的研究至關(guān)重要,強(qiáng)迫游泳實驗是利用動物行為絕望而設(shè)計的一種經(jīng)典的抗抑郁評價模型,它提供了一個無法回避的壓迫環(huán)境,作為一種應(yīng)激源可誘導(dǎo)小鼠的絕望行為,不同作用機(jī)制的抗抑郁藥物可選擇性縮短小鼠強(qiáng)迫游泳不動時間,提高對應(yīng)激的耐受性.由于該望模型操作簡單快捷,被廣泛用于抗抑郁藥物的篩選和評價[10].

實驗研究發(fā)現(xiàn),生藥量質(zhì)量分?jǐn)?shù)30%乙醇洗脫部分能明顯縮短小鼠強(qiáng)迫游泳絕望時間,并在此基礎(chǔ)上判斷其為抗抑郁有效部位,對于具體的活性成分及其機(jī)制有待進(jìn)一步研究.

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