注射用復(fù)方甘草酸苷細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法的研究

陳紅英

（安徽省腫瘤醫(yī)院藥劑科藥房，安徽合肥 230031）

復(fù)方甘草酸苷注射液是由苷草酸苷、甘氨酸、鹽酸半胱氨酸組成的復(fù)方制劑，具有免疫調(diào)節(jié)、抗感染、抑制病毒增殖以及對病毒滅菌等作用，明顯改善肝實質(zhì)病變，臨床常用于治療慢性肝病。本文依據(jù) 《中國藥典》2005年版二部ⅪE“細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法”對其注射液的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查進(jìn)行了探討。

1 儀器與試藥

注射用復(fù)方甘草酸苷（批號：050412、050415、050418，規(guī)格：復(fù)方制劑，每瓶含甘草酸苷40 mg、甘氨酸400 mg、鹽酸半胱氨酸20 mg，安徽省新星藥物開發(fā)有限責(zé)任公司）。鱟試劑（批號：04102012，規(guī)格：0.25 EU/ml、0.1 ml/支，福州新北生化工業(yè)有限公司；批號：0406072，規(guī)格：0.25 EU/ml，0.1 ml/支，浙江安度斯生物有限公司），以上鱟試劑靈敏度經(jīng)復(fù)核符合規(guī)定。細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（批號：2003-10，規(guī)格：100 EU/支，中國藥品生物制品檢定所）。細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水（批號：030619，規(guī)格：5 ml/支，湛江安度斯生物有限公司）。

2 方法和結(jié)果

2.1 細(xì)菌內(nèi)毒素限值L的確定

根據(jù)細(xì)菌內(nèi)毒素的計算公式：L=K/M，其中L為細(xì)菌內(nèi)毒素的限值，即按規(guī)定的給藥途徑人每公斤體重每小時可接受的內(nèi)毒素劑量；K為人體靜脈注射液的致熱域，即K=5 EU/kg，M為每公斤體重每小時最大的藥物劑量，為200 mg/60 kg/h（按甘草酸苷計算），L=K/M=1.5 EU/mg，據(jù)此將本品的細(xì)菌內(nèi)毒素限值確定為1.5 EU/mg（按甘草酸苷計算）。

2.2 供試品干擾試驗預(yù)試驗

根據(jù)供試品內(nèi)毒素限值（L）為1.5 EU/mg，取本品1瓶，加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水2 ml溶解后，分別用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋成 1∶10、1∶60、1∶120、1∶240 系列濃度的溶液，將 1∶10、1∶60、1∶120、1∶240 的系列溶液記為 NPC（供試品陰性對照），同時在 1∶10、1∶60、1∶120、1∶240 的系列溶液中添加等體積細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品制成的溶液記為PPC（供試品陽性對照），每個濃度平行做2支，同時作陽性、陰性對照管，結(jié)果見表1。

表1 供試品干擾性試驗預(yù)試驗結(jié)果Tab.1 The result of preproved interference test of sample

結(jié)果表明，注射用復(fù)方甘草酸苷對細(xì)菌內(nèi)毒素檢查有干擾，需稀釋240（即試驗中的1∶120）倍以上，方能消除干擾作用。

2.3 供試品干擾性試驗

用供試品溶液（1∶240）及細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水分別將細(xì)菌毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成 0.500 λ、0.250 λ、0.125 λ、0.060 λ不同濃度的細(xì)菌內(nèi)毒素溶液，每一濃度平行做4支，另取細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水和供試品稀釋液各做2支陰性對照管。取兩個不同廠家生產(chǎn)的鱟試劑，依法進(jìn)行供試品干擾試驗（《中國藥典》2005版二部附錄ⅪE）。結(jié)果見表2-a，2-b。

表2-a 干擾實驗結(jié)果Tab.2-a The result of interference test

表2-b 干擾實驗結(jié)果Tab.2-b The result of interference test

經(jīng)用兩個廠家生產(chǎn)的鱟試劑進(jìn)行的干擾性試驗，結(jié)果Es為 0.5～2.0 λ，Et在 0.5～2.0 Es， 本品按 1∶240 稀釋后對細(xì)菌內(nèi)毒素檢查無干擾作用。

2.4 供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素檢測

取本品，依法檢查（中國藥典2005版二部附錄ⅪE），按甘草酸苷計算，每毫克甘草酸苷中含內(nèi)毒素量應(yīng)＜1.5 EU，結(jié)果見表3。

結(jié)果表明，三批樣品的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查符合規(guī)定。

表3 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果Tab.3 The result of bacterial endotoxins test

3 討論

經(jīng)采用兩個廠家的鱟試劑，對注射用復(fù)方甘草酸苷連續(xù)三個批號進(jìn)行了干擾確證試驗，結(jié)果表明本品經(jīng)1∶240稀釋后無干擾作用，可進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查代替熱原檢查。根據(jù)以上結(jié)果，確證注射用復(fù)方甘草酸苷的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法如下：取本品，依法檢查（《中國藥典》2005年版二部附錄Ⅺ E），按甘草酸苷計算，每毫克甘草酸苷中含內(nèi)毒素量應(yīng)＜1.5 EU。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:附錄ⅪE 86-87.

[2]桑國衛(wèi).中國藥品檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社出版,2005:287.

[3]張德波.注射用水溶性維生素細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn),2008,9(3):198-201.

[4]國明.無菌、微生物限度及細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法學(xué)驗證中常見問題及分析[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn),2008,9(1):46-49.

[5]童立年.注射用鹽酸蘭地洛爾的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法[J].中國藥業(yè),2008,17(24):29.

[6]熱孜亞.注射用奧沙利鉑細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的實驗研究[J].西北藥學(xué)雜志,2008,23(6):383-384.