氣相色譜法測定培美曲塞二鈉中有機(jī)溶劑殘留量

趙硯榮，徐 嫻

(江蘇奧賽康藥業(yè)有限公司，南京 211112)

培美曲塞二鈉（pemetrexed disodium）是一種多靶位葉酸拮抗劑，可同時阻斷胸苷酸合酶（TS）、二氫葉酸還原酶（DHFR）和甘氨酰胺核苷酸轉(zhuǎn)甲酰酶（GARFT）這3種不同的對癌細(xì)胞的生存至關(guān)重要的酶靶標(biāo)，從而阻斷腫瘤DNA復(fù)制、細(xì)胞分裂所需的酶，抑制了腫瘤的生長[1-2]。由于該原料藥在制備過程中使用了有機(jī)溶劑二氯甲烷、四氫呋喃和N，N-二甲基甲酰胺，依據(jù)人用藥品注冊技術(shù)規(guī)范國際協(xié)調(diào)會（ICH）提出的殘留溶劑指導(dǎo)原則，所用溶劑均被列為藥品必須限制的第二、三類有機(jī)溶劑[3]，因此為保證藥品質(zhì)量和用藥安全，對該原料藥進(jìn)行有機(jī)溶劑殘留量檢測就顯得尤為重要。本實驗采用毛細(xì)管氣相色譜法[4-6]，對培美曲塞二鈉中有機(jī)溶劑殘留量分析進(jìn)行了系統(tǒng)性的研究、確認(rèn)，所建立的方法簡單、靈敏、重現(xiàn)性好、準(zhǔn)確度高。可用于實際生產(chǎn)中的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津GC-14C型氣相色譜儀（配FID檢測器，化學(xué)工作站）。

1.2 試藥

培美曲塞二鈉 （批號：090201，090202，090903，090204，江蘇奧賽康藥業(yè)有限公司）。二氯甲烷、四氫呋喃和N，N-二甲基甲酰胺均為分析純（南京化學(xué)試劑廠）；水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：OV-101 毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.53 mm，1.0 μm），內(nèi)涂100%聚二甲基聚硅氧烷。柱溫：50℃；保持5 min后，以30℃/min速度升至 150℃，保持 3 min；進(jìn)樣口溫度：180℃；檢測室（FID）溫度：200℃；載氣：N2；流速：1.0 ml/min；分流比為1∶50；進(jìn)樣體積：1 μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對照品溶液的制備 精密稱取二氯甲烷0.024 g、四氫呋喃 0.0288 g、N，N-二甲基甲酰胺 0.0352 g置 50 ml量瓶中，加純化水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取上述溶液0.5 ml，置10 ml量瓶中，加純化水稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取培美曲塞二鈉40 mg，精密稱定，置5 ml具塞試管中，加純化水1 ml，搖勻，作為供試品溶液。

2.3 色譜峰定性試驗

分別精密吸取二氯甲烷、四氫呋喃、N，N-二甲基甲酰胺各 1 μl，按“2.1”項下的色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖。 二氯甲烷峰的保留時間為0.918 min，四氫呋喃峰的保留時間為1.295 min，N，N-二甲基甲酰胺峰的保留時間為3.583 min，結(jié)果見圖1。

表1 線性關(guān)系試驗結(jié)果Tab.1 Standard curves of three kinds of organic solvents

2.4 線性關(guān)系考察

取二氯甲烷、四氫呋喃、N，N-二甲基甲酰胺，分別精密稱定，置同一只100 ml量瓶中，用純化水制成標(biāo)準(zhǔn)貯備液，其質(zhì)量濃度分別為0.253、0.406、0.376 mg/ml。精密量取標(biāo)準(zhǔn)貯備液 0.5、1.0、2.0、3.0、5.0 ml分別置于 25 ml量瓶中，用純化水稀釋至刻度，搖勻，得對照品系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密量取系列標(biāo)準(zhǔn)溶液各1 μl，分別進(jìn)樣分析，以峰面積（A）對相應(yīng)溶液中各組分質(zhì)量濃度（C）作線性回歸，結(jié)果見表1。

2.5 檢測限測定

取二氯甲烷、四氫呋喃、N，N-二甲基甲酰胺分別加水稀釋，按“2.1”項下的色譜條件進(jìn)樣。信噪比S/N=3時計算檢測限，分別為 0.4、0.4、1.7 μg/ml。

2.6 精密度試驗

精密吸取線性關(guān)系考察項下中間濃度的溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，以各溶劑峰面積計算，RSD分別為2.01%、2.98%和3.14%，結(jié)果表明該法精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗

取二氯甲烷、四氫呋喃、N，N-二甲基甲酰胺和培美曲塞二鈉（批號：090201）適量，按“2.2”項下方法制備混合對照品溶液和6份供試品溶液，分別進(jìn)樣分析。結(jié)果3種有機(jī)溶劑均未檢出。

2.8 穩(wěn)定性試驗

取回收率試驗項下序號為1的測試溶液，放置1 d后，按“2.1”項下的色譜條件進(jìn)樣分析，檢測結(jié)果不變，表明被測物的穩(wěn)定性良好。

2.9 回收率試驗

取已知溶劑殘留量的培美曲塞二鈉（批號：090201）40 mg，精密稱定，置5 ml具塞試管中，共6份，精密添加1 ml二氯甲烷、四氫呋喃、N，N-二甲基甲酰胺質(zhì)量濃度分別為20.24、32.48、30.08 μg/ml的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，振搖使溶解，搖勻。 按“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣分析，計算回收率，見表2。結(jié)果表明該法準(zhǔn)確性良好。

表2 回收率測定結(jié)果（n=6）Tab.2 Results of the recoveries （n=6）

2.10 樣品測定

取對照品溶液和供試品溶液進(jìn)樣測定，按外標(biāo)法以峰面積定量計算。3批培美曲塞二鈉樣品（批號：090202、090203、090204）中3種有機(jī)溶劑均未檢出。

3 討論

3.1 溶劑的選擇

由于原料藥在水中易溶，故選擇水作為溶劑。分析時采用程序升溫，在保證各溶劑分離良好的情況下，提高分析效率。結(jié)果表明用水作溶劑，譜圖簡單，干擾峰少，6 min內(nèi)完成整個分析，快速簡便。

3.2 系統(tǒng)耐用性

在實驗過程中，曾選用Agilent DB-5毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm），內(nèi)涂 5%苯基甲基聚硅氧烷，其他按“2.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，各溶劑峰除保留時間略有改變，其他沒有影響。結(jié)果表明采用的檢測條件適用于不同型號的非極性氣相柱。出于價格因素，推薦首選OV-101毛細(xì)管色譜柱。

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