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    聚氨酯/(羧甲基殼聚糖/殼聚糖)n復(fù)合涂層血液相容性

    2010-09-28 08:31:22紅,婧,穎,民,
    關(guān)鍵詞:殼聚糖支架

    趙 紅, 鄒 迪 婧, 李 穎, 齊 民, 楊 大 智

    (大連理工大學(xué)材料科學(xué)與工程學(xué)院,遼寧大連 116024)

    0 引 言

    介入治療心血管支架植入術(shù)作為治療冠心病的一種有效方法,已在世界范圍內(nèi)廣泛開(kāi)展,但其植入后再狹窄的發(fā)生率達(dá)到10%~30%.血管平滑肌細(xì)胞的增生與遷移是引起再狹窄的主要原因.近兩年來(lái)藥物涂層支架的應(yīng)用為緩解再狹窄提供了一線生機(jī).然而,目前正在應(yīng)用的抗增生藥物涂層支架,在抑制平滑肌細(xì)胞生長(zhǎng)的同時(shí)也阻礙了內(nèi)皮化,內(nèi)皮愈合時(shí)間延長(zhǎng),會(huì)引起晚期再狹窄[1~4].通過(guò)促進(jìn)支架損傷后的組織愈合,加速支架內(nèi)皮化,利用內(nèi)皮對(duì)抑制血栓和組織增生的天然作用來(lái)治療再狹窄是最有效、最安全和最自然的治療方式,因此在支架表面構(gòu)建快速內(nèi)皮化涂層,制備生物工程支架,是新一代冠脈支架的發(fā)展趨勢(shì)[5、6].

    在生物工程支架中支架涂層起到細(xì)胞外基質(zhì)作用,在支架表面制備仿細(xì)胞外基質(zhì)涂層是提高涂層的生物相容性、抑制血小板黏附的有效途徑.細(xì)胞外基質(zhì)為生物大分子組成的網(wǎng)絡(luò)狀結(jié)構(gòu),在支架表面制備含有促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)的分子成分并形成網(wǎng)狀拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的仿生細(xì)胞外基質(zhì)涂層無(wú)疑將有利于內(nèi)皮細(xì)胞粘附、生長(zhǎng)[7~10].

    醫(yī)用聚氨酯具有良好的生物相容性,其力學(xué)適應(yīng)性接近天然血管,目前已被用于制備人工血管、人工心臟等.天然高分子殼聚糖及其衍生物具有良好的生物相容性,并具有控制藥物釋放的能力,目前已廣泛用做促進(jìn)皮膚愈合的敷料[11~14].

    本文首先通過(guò)靜電噴涂方法在不銹鋼基底上制備網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的生物相容性聚氨酯(PU)涂層,然后通過(guò)靜電自組裝方法在其上制備具有促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)的天然高分子羧甲基殼聚糖(CMCH)和殼聚糖(CH)超分子多層膜,獲得網(wǎng)狀聚氨酯、羧甲基殼聚糖、殼聚糖復(fù)合涂層PU/(CMCH/CH)n,并對(duì)其血小板黏附行為進(jìn)行考察.

    1 實(shí)驗(yàn)方法

    1.1 靜電紡絲PU網(wǎng)狀涂層的制備

    采用本研究室已探索出的工藝方法制備靜電紡絲PU網(wǎng)狀涂層[15].PU(型號(hào)為T(mén)80A,德國(guó)拜耳公司生產(chǎn))平均相對(duì)分子質(zhì)量Mr=138841;靜電噴涂設(shè)備是自行設(shè)計(jì)的氣-電紡絲機(jī),通過(guò)調(diào)節(jié)靜電紡絲電壓參數(shù),在直徑為10 mm的不銹鋼圓形基底上獲得不同形貌的纖維涂層.

    1.2 網(wǎng)狀PU/(CMCH/CH)n復(fù)合涂層的制備

    PU涂層的預(yù)處理[16]:將靜電紡絲的PU網(wǎng)狀涂層試樣放入濃度為0.06 mg/mL的1,6-己二胺溶液中,使涂層表面引入-NH2基團(tuán),然后浸入到1 mol/L的HCl中使-NH2基團(tuán)轉(zhuǎn)變成為-NH+3,作為后續(xù)靜電自組裝的底層.

    靜電自組裝復(fù)合涂層的制備:將上述預(yù)處理后的帶陽(yáng)離子的PU網(wǎng)狀涂層試樣放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.4%、pH=8的 CMCH水溶液中保持 10 min,使表面吸附一層帶陰離子的CMCH分子,用去離子水沖洗,再放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2%、pH=4的 CH醋酸溶液中保持10 min,用去離子水沖洗,使表面吸附一層帶陽(yáng)離子的CH分子,即完成了一個(gè)雙分子層CMCH/CH的靜電自組裝過(guò)程.重復(fù)以上步驟,獲得網(wǎng)狀PU/(CMCH/CH)n多層復(fù)合膜.通過(guò)接觸角測(cè)量?jī)x(型號(hào)為DSA100,德國(guó)Kruss公司)測(cè)定各層的接觸角(每個(gè)試樣的接觸角為試樣上3個(gè)檢測(cè)點(diǎn)的平均值),表征自組裝過(guò)程并考察涂層的親疏水性變化規(guī)律.

    1.3 涂層的血液相容性實(shí)驗(yàn)

    通過(guò)體外血小板黏附實(shí)驗(yàn)考察涂層的血液相容性:將新鮮抗凝人血離心15 min,轉(zhuǎn)速為1500 r/min,取上部富血小板血漿,將試樣浸入37℃的富血小板血漿中1 h后取出,經(jīng)生理鹽水液漂洗,2.5%戊二醛固定液固定30 min,再由酒精脫水,乙酸異戊酯脫醇,經(jīng)臨界點(diǎn)干燥后噴銀,用掃描電鏡觀察血小板形態(tài).

    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析

    2.1 網(wǎng)狀PU涂層的血小板黏附行為

    圖1 不同纖維直徑PU涂層的血小板黏附SEM照片F(xiàn)ig.1 SEM images of platelets adhesion on PU fibers with different diameters

    圖1 為不同纖維直徑的PU網(wǎng)狀涂層上的血小板黏附形貌.在直徑小于1 μ m的纖維上,黏附有數(shù)量較多的血小板,在直徑大于2 μ m的纖維上幾乎沒(méi)有血小板黏附.在纖維交疊的夾角處也有較多黏附.圖2為細(xì)纖維分布密度不同的PU網(wǎng)狀涂層上的血小板黏附形貌,纖維分布密度越大,血小板黏附數(shù)量越多.血小板黏附性與材料化學(xué)成分、表面拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)等諸多物理及化學(xué)因素有關(guān).光滑的PU表面具有良好的血液相容性,常被用于制備人工血管,圖3為在316L不銹鋼表面通過(guò)澆鑄法制備的光滑PU膜上的血小板黏附形貌,可見(jiàn)表面幾乎沒(méi)有血小板黏附.血小板尺寸為2~ 3 μ m,因此直徑大于 2~ 3 μ m 的纖維表面,對(duì)于血小板的黏附行為與光滑平面的作用相似,直徑大于2 μ m的PU纖維具有與光滑PU表面相似的血液相容性,抑制血小板黏附.

    圖2 不同纖維密度的PU涂層的血小板黏附SEM照片F(xiàn)ig.2 SEM images of platelets adhesion on PU fibers with different densities

    圖3 光滑PU膜表面的血小板黏附SEM照片F(xiàn)ig.3 SEM images of platelets adhesion on smooth PU coating

    2.2 網(wǎng)狀PU/(CMC H/CH)n復(fù)合涂層的親疏水性

    表1為復(fù)合涂層不同靜電自組裝層對(duì)接觸角的影響,按照CMCH/CH 循環(huán)組裝次序,1、3、5層為CMCH 層,2、4、6層為CH 層.可見(jiàn)網(wǎng)狀PU涂層經(jīng)預(yù)處理后呈現(xiàn)出較弱的親水性,而吸附第1層CMCH 后接觸角明顯減小,親水性增強(qiáng);在其上吸附一層CH后,接觸角又明顯變大,呈現(xiàn)出疏水性.這是CMCH和CH分子親水性強(qiáng)弱的影響.在不銹鋼基底上對(duì)制備出的光滑均勻的CMCH、CH涂層的接觸角檢測(cè)結(jié)果顯示,光滑CMCH涂層的接觸角約為30°,呈現(xiàn)出較強(qiáng)的親水性,而光滑CH涂層的接觸角約為89°,呈現(xiàn)出弱的親水性,因此在組裝的CMCH和CH涂層上,顯示出親水性強(qiáng)弱的變化.然而隨著組裝層數(shù)n的增加,CMCH吸附層接觸角呈現(xiàn)增大趨勢(shì),而CH吸附層接觸角呈現(xiàn)減小趨勢(shì),即兩相鄰吸附層的接觸角差值減小,親水性差別減弱.這是由于靜電自組裝過(guò)程中,吸附的兩相鄰層高分子發(fā)生了相互穿插的空間分布結(jié)構(gòu),由此各層上都不同程度地含有CH和CMCH分子,涂層的親水性是兩類(lèi)不同分子共同影響所致.

    表1 復(fù)合涂層的接觸角Tab.1 Contact angle of composite coatings

    2.3 網(wǎng)狀PU/(CMCH/CH)n復(fù)合涂層的血液相容性

    本文考察了復(fù)合涂層的血小板黏附行為,圖4為自組裝不同分子層對(duì)應(yīng)的血小板黏附形貌.結(jié)果表明:網(wǎng)狀復(fù)合涂層血小板黏附數(shù)量比組裝前的網(wǎng)狀PU涂層明顯減少,且隨著靜電自組裝層數(shù)的增大,血小板黏附數(shù)量趨于降低,組裝層數(shù)達(dá)到第7層后,即使在直徑小于1 μ m的細(xì)纖維上也只有極少量的血小板黏附.且由圖4可以看到CMCH作為最外層的第7層與CH作為最外層的第8層,血小板黏附數(shù)量差別不大,分析認(rèn)為這與靜電自組裝相鄰?fù)繉臃肿又g產(chǎn)生的交互穿插分布有關(guān),隨著層數(shù)的增加,相鄰CMCH和CH層的接觸角差別減小,涂層的親疏水性趨于接近,從而相鄰的CMCH和CH層具有相似的血液相容性.因此可以通過(guò)靜電自組裝過(guò)程改善涂層的血液相容性.

    圖4 復(fù)合涂層不同自組裝層的血小板黏附SEM照片F(xiàn)ig.4 SEM images of platelets adhesion on different self-assembling composite coatings

    3 結(jié) 論

    (1)對(duì)于網(wǎng)狀PU涂層,血小板較易黏附于直徑1 μ m以下的細(xì)纖維上,細(xì)纖維數(shù)量越多,血小板黏附的數(shù)量越多.

    (2)網(wǎng)狀PU/(CMCH/CH)n復(fù)合涂層血小板黏附數(shù)量較少,血液相容性提高.

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