應(yīng)用蠶豆根尖微核試驗測定維生素C的抑突變性

季守蓮，宋正蕊，夏自然

（大理學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，云南大理 671000）

應(yīng)用蠶豆根尖微核試驗測定維生素C的抑突變性

季守蓮，宋正蕊，夏自然

（大理學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，云南大理 671000）

目的：了解水果蔬菜中維生素C的抑突變性。方法：應(yīng)用熒光法測定水果、蔬菜中維生素C的含量，蠶豆根尖微核技術(shù)檢驗維生素C的抑突變性。結(jié)果：9種水果蔬菜的維生素C含量為（39.19±29.65）mg/100 g，蠶豆根尖微核率（MCN‰）與陽性對照比較均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：水果、蔬菜中的維生素C對誘變中的蠶豆根尖細胞有一定的抑突變性，且抑制細胞突變與水果、蔬菜中維生素C的含量有劑量—效應(yīng)關(guān)系。維生素C越高，抑突變的效應(yīng)越明顯。

蠶豆；微核試驗；熒光法；維生素C；抑突變性

維生素C又稱L-抗壞血酸，是人體需要量最大的水溶性維生素，據(jù)有關(guān)調(diào)查結(jié)果顯示，人體每天攝入足夠的維生素C，可以減少癌癥的發(fā)生概率〔1〕。維生素C主要來源于新鮮蔬菜、水果，維生素C是維持機體生命活動過程所必需的低分子有機化合物，它具有抗氧化作用，能提高機體免疫力，有助于鐵的吸收，抗腫瘤等功能〔2〕。為了解大理市部分時鮮水果蔬菜中維生素C的含量與抗突變關(guān)系，用熒光法測定其維生素C的含量，并結(jié)合蠶豆根尖微核試驗進行維生素C抗突變關(guān)系研究。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 大理市鳳儀鎮(zhèn)產(chǎn)蠶豆〔3〕、維生素C含量高的9種本地市售時鮮水果、蔬菜（冰糖橙、草莓、美國臍橙、小番茄、大番茄、小白菜、青檸檬、紅蛇、水晶紅富士）。

1.2 蠶豆根尖微核試驗

1.2.1 樣品液配制 在樣品組中分別加入搗碎后浸出的水果、蔬菜原汁和2μg/m L的環(huán)磷酰胺各7 m L，陽性組為2μg/m L的環(huán)磷酰胺15 m L，陰性組為15 m L的蒸餾水。

1.2.2 微核試驗 按常規(guī)方法進行蠶豆根尖微核試驗。浸種，催芽，用各類樣品液處理根尖5 h，按常規(guī)方法對蠶豆根尖細胞固定、染色、制片鏡檢。每個組觀察3個根尖，每個根尖觀察1 000個細胞，計算微核千分率（MCN‰），并用SPSS統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理。

1.3 維生素C含量測定 使用960型熒光分光光度計〔4〕，標準曲線法測定各類水果、蔬菜的維生素C含量，得出直線方程：Y=0.842 7X-0.008 1，r=0.995 3。

2 結(jié)果

大理市部分蔬菜水果維生素C含量及微核測定結(jié)果。見表1。

表1 9種水果蔬菜維生素C含量及微核測定結(jié)果

3 討論

對試驗結(jié)果進行t檢驗，表明各組樣本的微核千分率與陽性對照組相比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.05。水果、蔬菜中的維生素C確實具有抑制細胞突變的性能，各樣品組壓片后鏡檢觀察到少數(shù)細胞的染色體分裂后期有斷片、橋的情況，特別是陽性對照組根尖細胞后期異常比較明顯，上述情況在維生素C含量較高組被觀察到的細胞相比維生素C含量低的樣品組少，由此也可證明維生素C對細胞染色體畸變的抑制性。在細胞早期出現(xiàn)斷片、橋的情況比細胞分裂后期少。有關(guān)資料表明：誘變劑對蠶豆根尖細胞的遺傳損傷發(fā)生較早，在后期僅出現(xiàn)異常和微核而已。因此，防止細胞染色體畸變應(yīng)從早期開始、早期監(jiān)測，以便采取相應(yīng)措施預(yù)防和減少誘變物對機體細胞的危害〔5〕。

維生素C的含量與微核千分率成負相關(guān)（-0.927），即維生素C含量越高，微核千分率就越小，抑突變性就越大。大量攝入維生素C，可以制造大量免疫球蛋白，可以使抗癌的淋巴細胞高效率地發(fā)揮作用〔6〕。

蠶豆根尖微核技術(shù)是全球公認的環(huán)境致突變性檢測技術(shù)，也被公認為篩選致突變物的主要方法之一。1982年Degrssi和Rizzoni應(yīng)用蠶豆根尖微核技術(shù)，從此蠶豆根尖微核技術(shù)正式形成，成為目前研究和運用較多的擬代替動物培養(yǎng)細胞檢測環(huán)境“致癌、致畸、致突變”物質(zhì)的高等植物細胞檢測體系〔7-8〕。

4 建議

各方面的研究表明：維生素C主要食物來源為蔬菜與水果，如青菜、韭菜、塌棵菜、菠菜，柿子椒等深色蔬菜和花菜，以及草莓、柑桔、蘋果、柚子等水果含維生素C量均較高。野生的莧菜、苜蓿、刺梨、獼猴桃、酸棗等含量尤其豐富〔9〕。所以，人們多吃新鮮的水果、蔬菜，可預(yù)防癌癥，降低癌癥的發(fā)生概率。對癌癥的高發(fā)人群實行定期服用足夠的維生素C，定期監(jiān)測使用維生素C的情況。

常言道：藥補不如食補。隨著科技的發(fā)展，現(xiàn)在一年四季均有新鮮蔬菜、水果出售，人們攝入維生素C的機會較多，并且隨著人們生活水平的提高及對健康認識的提高，新鮮蔬菜、水果的攝入量增加，維生素C的攝入也隨之增加，這對提高機體的免疫力，抗癌（抗突變）有較大的促進作用。

〔1〕曾益新.腫瘤學(xué)〔M〕.北京：人民衛(wèi)生出版社，2003：1-7.

〔2〕吳坤，孫秀發(fā).營養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)〔M〕.北京：人民衛(wèi)生出版社，2004：81-84.

〔3〕季守蓮，宋正蕊，楊廷仕，等.應(yīng)用兩種大理州蠶豆作微核實驗材料的篩選〔J〕.癌變·畸變·突變，2004，16（1）：52-53.

〔4〕GB 12392-90，蔬菜、水果及其制品中對抗壞血酸的測定方法（熒光法和2.4—二硝基苯肼法）〔S〕.

〔5〕GrantW F.Higher plantassays for the detection of chromo so mal aberrations and genemutations-a brief historical background on their use for screening and monitoring environmental chemicals〔J〕.Mutat Res，1999，426：107-112.

〔6〕郭芳彬.蜂王漿對免疫系統(tǒng)的作用〔J〕.養(yǎng)蜂科技，1999，30（1）：30-31.

〔7〕馬志敏，楊雄波，季守蓮，等.蠶豆根尖微核技術(shù)測定美洲大蠊提取物的抑突變性〔J〕.大理學(xué)院學(xué)報，2008，7（12）：25-27.

〔8〕季守蓮，宋正蕊，劉曉莉，等.某地區(qū)各類飲用水及水源水致突變性研究〔J〕.實用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2005，3（12）：474-475.

〔9〕多力坤·買買提玉素甫.用微核試驗研究小棗的抗突變作用〔J〕.生物技術(shù)，2008，18（6）：53-54.

（責(zé)任編輯 蔣 康）

Vicia F aba R oot T ip Micronucleus T est for the A nti-mutation E ffect of V itam in C

JIShoulian,SONG Zhengrui,XIA Ziran
（C ollege of Public Health,DaliUniversity,Dali,Yunnan 671000,China）

Objective：To investigate the anti-mutation effect of vitamin C in fruits and vegetables.MethodsThe content of vitamin C in fruits and vegetablesweremeasured by fluorescence array,anti-mutation effect of vitamin C were assessed bymicronucleus test in vicia faba root tip.ResultsThe content of vitamin C in nine kinds of fruits and vegetables was 39.19±29.65 mg/100g.There was statistic difference（P＜0.05）between each group and positive control group in micronucleus rate of vicia faba root tip.ConclusionThere was an anti-mutation effect of vitamin C from fruit and vegetables in suppression vicia faba root tip cellularmutation,and this anti-effectwould increase in a dose-dependentmanner.

vicia faba root tip；micronucleus test；fluorescence assay；vitamin C；anti-mutation effect

S643.6

A

1672-2345（2010）12-0023-02

2010-10-13

季守蓮，高級實驗師，主要從事衛(wèi)生檢驗研究.