美洲大蠊提取物CⅡ-3對豚鼠離體回腸收縮活動的影響

甘 平，張旭強，郭 品，王 聰，彭 芳

（大理學院藥學院，云南大理 671000）

美洲大蠊提取物CⅡ-3對豚鼠離體回腸收縮活動的影響

甘 平，張旭強，郭 品，王 聰，彭 芳*

（大理學院藥學院，云南大理 671000）

目的：觀察美洲大蠊提取物CⅡ-3對豚鼠離體回腸收縮活動的影響。方法：采用離體腸肌實驗，用BL-420E+生物機能實驗系統(tǒng)記錄美洲大蠊提取物CⅡ-3對乙酰膽堿（Ach）、組胺（His）及BaCl2所致離體腸肌收縮活動的影響。結(jié)果：美洲大蠊提取物CⅡ-3對Ach、His及BaCl2引起的豚鼠離體腸肌痙攣有顯著的解痙作用（P＜0．05）。結(jié)論：美洲大蠊提取物CⅡ-3對離體腸肌的收縮具有明顯抑制作用，可能與其阻斷了M受體、H1受體以及阻滯了Ca2+通道有關(guān)。

美洲大蠊；CⅡ-3；離體腸肌

自20世紀70年代以來，國內(nèi)學者先后對美洲大蠊進行了研究，在消化系統(tǒng)方面美洲大蠊某有效部位所制成藥物康復新，在臨床上已被廣泛應(yīng)用于潰瘍性結(jié)腸炎〔1-7〕、放射性食管炎〔8〕、消化性潰瘍〔9-11〕、難治性胃食管反流病〔12〕、口腔粘膜潰瘍〔13〕、糜爛性胃炎〔14-15〕、嬰幼兒腹瀉〔16〕、小腸外瘺〔17〕、痔瘡〔18〕等，療效較好。本實驗研究的CⅡ-3是采用現(xiàn)代提取分離技術(shù)所獲得的美洲大蠊另一有效部位，為了探討此有效部位在消化系統(tǒng)方面是否和康復新有同樣的效果，所以本實驗觀察了其對動物離體腸肌收縮活動的影響。

1 材料和方法

1．1 實驗試劑及藥品 乙酰膽堿（Acetylcholine，Ach），Sigma公司（批號：00011698）；硫酸阿托品，上海禾豐制藥有限公司（批號：091102）；組胺（Histamine，His），Sigma公司（批號：00150816）；鹽酸苯海拉明，廣州明興制藥有限公司（批號：040702）；氯化鋇（Barium Chloride，BaCl2），上?；？茖W校實驗工廠（批號：830702）；鹽酸維拉帕米，上海禾豐制藥有限公司（批號：090201）；生理鹽水，昆明南疆制藥有限公司（批號：A0810005g2）；臺氏液；美洲大蠊提取物CⅡ-3由大理學院藥學院劉光明教授提供。

1．2 動物 普通級健康豚鼠14只，雌雄各半，體重400～500 g，由昆明醫(yī)學院實驗動物中心提供。合格證號：SCXK（滇）2008-0003。

1．3 器材 H W-400S恒溫平滑肌槽（成都泰盟科技有限公司）、BL-420E+生物機能實驗系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司）、張力換能器、手術(shù)器械、1 m L可調(diào)式微量移液槍等。

1．4 方法

1．4．1 CⅡ-3對豚鼠離體腸肌收縮活動的影響 分別觀察CⅡ-3對Ach、His、BaCl23種物質(zhì)誘導的腸肌收縮的抑制效果。健康豚鼠擊頭處死，迅速剖腹，取距回盲部10 cm處回腸的一段，置于盛有冷臺氏液的器皿中，輕輕剝離回腸周圍的脂肪組織，沖洗腸管，剪取1．5~2 cm長的腸段數(shù)節(jié)作為標本備用。標本一端穿線并固定于通氣板背面的鐵鉤上，另一端通過蛙心夾連接到張力換能器并與BL-420E+生物機能實驗系統(tǒng)連接，然后將標本放入恒溫平滑肌槽的小槽內(nèi)，立即通氧（1～2個氣泡/s）。調(diào)整腸肌張力1．0 g，讓標本在臺氏液中穩(wěn)定30min。待自主舒張活動穩(wěn)定后，描記一段正常曲線，然后加入終濃度為1×10-6g/mL Ach，并描記收縮曲線，作用明顯后，換液3次，待曲線恢復到用藥前水平，再描記一段曲線；然后加入生理鹽水，3 min后加入上述濃度的Ach并描記收縮曲線，作用明顯后，換液3次，待曲線恢復到用藥前水平，再描記一段曲線；如上操作，依次加入終濃度2．5×10-5g/mL、5×10-5g/mL、7．5×10-5g/mL的CⅡ-3以及1×10-6g/mL的工具藥阿托品。如上操作，分別采用1×10-6g/mL His以及1×10-6g/mL BaCl2誘導腸肌收縮，觀察CⅡ-3、1×10-6g/mL苯海拉明和1×10-6g/mL維拉帕米的抑制效果〔19〕。

2 結(jié)果

CⅡ-3三個劑量組對Ach所致腸肌收縮均有一定的抑制作用，抑制率分別為10．62%、13．67%、25．55%，呈一定的濃度依賴性。與生理鹽水組比較僅有高劑量組具有統(tǒng)計學意義（P＜0．05），但是，CⅡ-3高劑量與阿托品比較效果相當（P＞0．05）。見表1。

表1 美洲大蠊提取物CⅡ-3對Ach所致腸肌收縮活動的抑制率（±s，n＝12）

表1 美洲大蠊提取物CⅡ-3對Ach所致腸肌收縮活動的抑制率（±s，n＝12）

注：與生理鹽水組比較，*P＜0.05；與阿托品比較，#P＜0．05。

分組終濃度（g/m L）抑制率/%生理鹽水—CⅡ-3（低）2.5×10-5CⅡ-3（中）5×10-5CⅡ-3（高）7.5×10-5阿托品1×10-61.05±0.56＃10.62±0.21#13.67±0.17＃25.55±0.17*44.06±0.11*

CⅡ-3三個劑量組對His所致腸肌收縮也有一定的抑制作用，抑制率分別為18．14%、18．02%、30．49%。與生理鹽水組比較，CⅡ-3低、中、高劑量均具有統(tǒng)計學意義（P＜0．05），且其效果和苯海拉明效果相當（P＞0．05）。見表2。

表2 美洲大蠊提取物CⅡ-3對His所致腸肌收縮活動的抑制率（±s，n=12）

表2 美洲大蠊提取物CⅡ-3對His所致腸肌收縮活動的抑制率（±s，n=12）

注：與生理鹽水組比較，*P＜0．05；與苯海拉明比較，＃P＜0.05。

分組終濃度（g/m L）抑制率/%生理鹽水—CⅡ-3（低）2.5×10-5CⅡ-3（中）5×10-5CⅡ-3（高）7.5×10-5苯海拉明1×10-62.75±0.13＃18.14±0.13*18.02±0.12*30.49±0.10*40.80±0.12*

CⅡ-3三個劑量組對BaCl2所致腸肌收縮均有一定的抑制作用，抑制率分別為7．77%、27．93%、38．45%，具有一定的濃度依賴性。與生理鹽水組比較，中劑量和高劑量的CⅡ-3具有統(tǒng)計學意義（P＜0．05），且高劑量CⅡ-3與維拉帕米效果相當（P＞0．05）。見表3。

表3 美洲大蠊提取物CⅡ-3對BaCl2所致腸肌收縮活動的抑制率（±s，n=12）

表3 美洲大蠊提取物CⅡ-3對BaCl2所致腸肌收縮活動的抑制率（±s，n=12）

注：與生理鹽水組比較，*P＜0．05；與維拉帕米比較，＃P＜0．05。

分組終濃度（g/m L）抑制率/%生理鹽水—CⅡ-3（低）2.5×10-5CⅡ-3（中）5×10-5CⅡ-3（高）7.5×10-5維拉帕米1×10-61.83±0.11＃7.77±0.12#27.93±0.13*#38.45±0.09*51.12±0.14*

3 討論

M受體廣泛分布在腸道平滑肌中并維持著平滑肌的收縮，其中，分布在腸道平滑肌纖維膜上的M受體主要是M2和M3，但M3是主要的功能受體。當Ach作用到平滑肌膜上的M3受體，M3受體耦聯(lián)G蛋白（GP），使胞內(nèi)三磷酸肌醇（IP3）和二酰基甘油（DG）第二信使?jié)舛壬仙M而引起C a2+釋放和底物蛋白發(fā)生磷酸化，激發(fā)平滑肌產(chǎn)生收縮效應(yīng)。

腸道平滑肌上還分布有大量的H1受體，當有大量His作用時，H1受體通過G蛋白偶聯(lián)磷酯酶C促進磷酯酰肌醇代謝，增加IP3和DG，從而引起平滑肌的收縮。

BaCl2直接刺激回腸平滑肌釋放細胞內(nèi)的Ca2+而引起腸管平滑肌痙攣。

鈣是胃腸道平滑肌的興奮-收縮偶聯(lián)者，引起腸道平滑肌收縮所需的大部分鈣是在動作電位發(fā)生時從細胞外進入肌細胞的，小部分來源于肌漿網(wǎng)，當胞內(nèi)Ca2+濃度升高到一定水平時，就會觸發(fā)平滑肌收縮。

Ach、His、BaCl2分別通過激動M膽堿受體、H1受體及激活Ca2+通道來興奮胃腸道，使其收縮幅度及張力增加，腸蠕動增加。本實驗通過上述3個物質(zhì)的拮抗劑的拮抗效果，與CⅡ-3的作用進行比較，以推測CⅡ-3可能的作用機制。實驗結(jié)果表明，CⅡ-3對Ach、His、BaCl2所誘導的腸肌收縮均有抑制作用，且與相應(yīng)的拮抗劑作用相當，提示CⅡ-3對腸肌收縮的抑制作用可能由膽堿受體、組胺受體介導或直接作用于腸道平滑肌，具有鈣拮抗作用，但確切的作用機制還需要進一步探討。

〔1〕潘紅梅，周健，陳國強．康復新液保留灌腸治療潰瘍性結(jié)腸炎74例療效觀察〔J〕．云南中醫(yī)中藥雜志，2005，26（4）：13-14．

〔2〕樊悅，鄧穎．康復新液保留灌腸治療兒童潰瘍性結(jié)腸炎22例〔J〕．華西藥學雜志，2005，20（5）：465．

〔3〕李麗平.保留灌腸治療兒童潰瘍性結(jié)腸炎22例〔J〕．河南中醫(yī)，2005，25（5）：54-55．

〔4〕王萌，董華英．中藥內(nèi)服加康復新液灌腸治療慢性非特異性潰瘍性結(jié)腸炎120例〔J〕．吉林中醫(yī)藥，2003，23（12）：24．

〔5〕丁建明，張愛民，郭守兵，等．思密達聯(lián)合康復新治療潰瘍性結(jié)腸炎療效觀察〔J〕．醫(yī)學文選，1999，18（6）：923-924．

〔6〕呂文，張莜鳳，張嘯．康復新液保留灌腸治療潰瘍性結(jié)腸炎臨床療效觀察〔J〕．中國綜合臨床，2003，10（19）：912-913．

〔7〕洪砌．康復新治療潰瘍性結(jié)腸炎22例臨床觀察〔J〕．醫(yī)學理論與實踐，2003，16（9）：1044．

〔8〕樊林宏，許萬松，周莉琴，等．康復新治療放射性食管炎88例臨床觀察〔J〕．吉林醫(yī)學院學報，1998，18（4）：82．

〔9〕鐘毅，周紅，鐘靈，等．康復新液治療難治性消化性潰瘍50例臨床觀察〔J〕．深圳中西醫(yī)結(jié)合雜志，2004，14（16）：333-338.

〔10〕梅堅．康復新液治療消化性潰瘍近期療效觀察〔J〕．河北醫(yī)學，2002，8（3）：225．

〔11〕關(guān)云艷，劉萬里，蘇暾．康復新液聯(lián)合法莫替丁治療消化性潰瘍82例〔J〕．中國中西醫(yī)結(jié)合消化雜志，2003，11（2）：83-84．

〔12〕許國銘．重新認識，深入研究胃食管反流病〔J〕．中華消化雜志，2003，23（1）：5-6．

〔13〕劉霞．內(nèi)外合治小兒口瘡34例〔J〕．浙江中醫(yī)雜志，1995，30（2）：64-65．

〔14〕武和平，李萍，鄭昱．康復新液治療糜性型胃炎112例療效分析〔J〕．上海中醫(yī)藥雜志，2004，38（2）：28-29．

〔15〕彭陣雨．康復新液治療糜爛性胃炎60例療效觀察〔J〕．醫(yī)學臨床研究，2003，20（10）：780-790．

〔16〕王建筑，劉宗銀，吳順芳．康復新灌腸治療嬰幼兒腹瀉32例療效觀察〔J〕．中國鄉(xiāng)村醫(yī)生雜志，1990，7：34．

〔17〕周瑞堂．康復新外治小腸外瘺1例〔J〕．中醫(yī)外治雜志，2002，11（2）：54．

〔18〕金建媚，丁云龍．痔瘡術(shù)后康復新液創(chuàng)面換藥療效觀察〔J〕．現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2003，12（18）：1984．

〔19〕徐叔云，卞如濂，陳修，等．藥理實驗方法學〔M〕．2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：1311-1312．

（責任編輯 蔣 康）

Effect of CⅡ-3 Extracted from Periplaneta americana on Isolated Guinea Pig Lieum Contraction

GAN Ping,ZHANG Xuqiang,GUO Pin,WANG Cong，PENG Fang*
（College of Pharmac，DaliUniversity，Dali Yunnan 671000，China）

Objective：To observe the effect of CⅡ-3 extracted from Periplaneta americana on the contraction activity in isolated guinea pig lieum.MethodsIn vitromyentericmotion testand the biological function analysis system were applied to record the CⅡ-3 effect on intestinal muscle spasm induced by Ach,His and BaCl2.ResultsCⅡ-3 extracted from Periplaneta americana can significantly inhibit the isolated guinea pig lieum constriction induced by Ach,His and BaCl2（P＜0.05）.ConclusionCⅡ-3 can significantly inhibit the constriction of the intestine muscle of guinea pig,and the mechanism of CⅡ-3 is probably related with blockage ofMreceptor,H1 receptor and calcium channels.

Periplaneta americana；CⅡ-3；isolated intestinalmuscle

Q969.25+3.1

A

1672-2345（2010）12-0020-03

2010-09-10

甘平，碩士研究生，主要從事藥理學研究.

*通信作者：彭芳，教授，電話：0872-2257392.