不同貯藏年限哈蟆油的電泳比較

艾秋霞,肖井雷,姜大成

（長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué),吉林 長(zhǎng)春 130117）

不同貯藏年限哈蟆油的電泳比較

艾秋霞,肖井雷,姜大成*

（長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué),吉林 長(zhǎng)春 130117）

哈蟆油;貯藏;年限;蛋白質(zhì);電泳

哈蟆油是一種名貴的動(dòng)物藥,為東北地區(qū)特產(chǎn)的一種營(yíng)養(yǎng)價(jià)值極高的滋補(bǔ)性中藥。哈蟆油在貯藏過程中,常常顏色變深變暗,出現(xiàn)類似“走油”的現(xiàn)象,這些現(xiàn)象不僅使哈蟆油的品質(zhì)降低,還直接影響其經(jīng)濟(jì)效益。哈蟆油中含有大量蛋白質(zhì)、氨基酸等,這些成分的變化是否會(huì)引起其品質(zhì)發(fā)生變化,故本實(shí)驗(yàn)采用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法考察了不同貯藏年限哈蟆油的蛋白質(zhì)情況。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器 雙穩(wěn)定時(shí)電泳儀DYY-8C[5-600 V,2-200 mA,120 W],北京六一儀器廠;小型雙垂直電泳槽DYCZ-24D,北京六一儀器廠;脫色搖床（水平）WD-9405B型,北京六一儀器廠。所用試劑均為分析純。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料 本實(shí)驗(yàn)所用樣品購(gòu)于吉林省舒蘭市新安鄉(xiāng)梨花林場(chǎng)二人班蛙場(chǎng),經(jīng)長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)姜大成教授鑒定為蛙科動(dòng)物中國(guó)林蛙（Rana temporaria chensinensis David）雌體的輸卵管干制品,1～5號(hào)分別代表不同貯藏年限（2002,2003,2006,2007,2008年）哈蟆油樣品。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 樣品制備[1-2]稱取等量中哈蟆油（樣品1～5）,分別加入等量稀釋4倍的濃縮膠緩沖液研磨,離心30 min（4 000 r/min）,取上清液置冰箱中備用。

2.2 電泳操作 試劑和凝膠的配制參照文獻(xiàn)法進(jìn)行[3],樣品上清液加入等體積的40%蔗糖液混勻,用微量注射器進(jìn)樣,在電極緩沖液中加入溴酚藍(lán)指示劑示蹤。電泳開始時(shí),電壓控制在80 V,樣品進(jìn)入分離膠后加大到150V,整個(gè)電泳過程維持電壓強(qiáng)度不變。待示蹤指示劑距離前沿約1 cm時(shí),停止電泳。取出板膠,先在水中漂洗,然后放入0.1%的考馬斯亮藍(lán)R250染色液中,在常溫下?lián)u床染色10 h,再用含40%甲醇和10%冰醋酸的脫色液脫色,反復(fù)更換脫色液,直至背景無色為止。

2.3 電泳圖譜測(cè)繪 按泳動(dòng)率將電泳圖譜分為A（泳動(dòng)率 ≤0.3）、B（泳動(dòng)率 0.3～ 0.75）、C（泳動(dòng)率≥0.75）3個(gè)區(qū),按公式（泳動(dòng)率=蛋白質(zhì)泳動(dòng)距離/指示劑泳動(dòng)距離）計(jì)算各樣品譜帶的泳動(dòng)率。根據(jù)樣品譜帶的泳動(dòng)率、形態(tài)、著色度繪制電泳圖譜,以涂黑、斜紋、空白3種符號(hào)分別代表一級(jí)、二級(jí)、三級(jí)蛋白譜帶,見圖1。

圖1 5種樣品的電泳鑒別圖譜（由左至右為1～5號(hào)樣品）

3 結(jié)果與討論

由譜圖1得知,不同貯藏年限哈蟆油的蛋白質(zhì)電泳譜帶情況基本相同,均為一級(jí)帶2條（A區(qū)2條）、二級(jí)帶3條（B區(qū)1條,C區(qū)2條）、三級(jí)帶1條（B區(qū)1條）,說明不同貯藏年限的哈蟆油的蛋白質(zhì)相對(duì)穩(wěn)定。只是2002年在C區(qū)位置出現(xiàn)的2條為三級(jí)帶,這可能是由于貯藏時(shí)間過長(zhǎng)導(dǎo)致蛋白質(zhì)變化所致,具體原因需做蛋白質(zhì)含量分析才能得出結(jié)果。

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[1]姜大成,肖井雷.中國(guó)林蛙與哈蟆油[M].長(zhǎng)春:吉林科學(xué)技術(shù)出版社,2006:269-311.

[2]曾明,石振武.凝膠電泳鑒別哈士蟆油與蟾蜍輸卵管[J].中藥材,1991,14（4）:25.

[3]張貴君,李曉波,李仁偉,等.常用中藥生物鑒定[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2006:188-190.

R284.11

A

1007-4813（2010）01-0133-01

艾秋霞（1975-）,女,碩士研究生。研究方向:生藥學(xué)。

姜大成,男,教授,碩士研究生導(dǎo)師。Tel:13944103315

（

2009-05-25）