溫和型禽流感的診斷和防治

周勇岐，毛火云，尹秀鳳

（南京天邦生物科技有限公司，江蘇南京 211102）

溫和型禽流感的診斷和防治

周勇岐，毛火云，尹秀鳳

（南京天邦生物科技有限公司，江蘇南京 211102）

根據(jù)臨床的致病性表現(xiàn)不同，臨床上將禽流感分為了高致病性、溫和性和無致病性三類。前者表現(xiàn)明顯臨床癥狀或高死亡率，后者不表現(xiàn)任何發(fā)病跡象，溫和型禽流感則介于兩者之間，而并非嚴(yán)格的學(xué)術(shù)分類類型。溫和型禽流感常以低死亡率、輕度的呼吸道感染、產(chǎn)蛋率下降及抵抗力低下等為臨床癥候群。而發(fā)病嚴(yán)重程度與病毒毒力、動物敏感性、飼養(yǎng)條件和并發(fā)癥等多種因素相關(guān)，所以，除部分高致病性的H5和H7亞型病毒外，幾乎所有禽流感病毒株（如H1～4、H6和H8～15等，目前以H9最為常見）都可能成為溫和型禽流感的原發(fā)性病原。溫和型禽流感具有病原多樣性、癥狀非典型性、宿主與流行范圍廣泛等特點(diǎn)，給本病的診斷與防治工作帶來較大難度。

一、流行特點(diǎn)

（一）自然宿主在自然條件下溫和型禽流感可以感染各種日齡的肉雞和蛋雞，該病毒也可感染各種野生鳥類、水禽和珍禽，但不一定發(fā)病。

（二）傳播途徑禽流感病毒可存在于病禽和感染禽的消化道、呼吸道和臟器組織中，健康禽可通過與病禽直接接觸或與病毒污染物間接接觸而感染。眼、鼻、口腔分泌物、糞便或死禽尸體及其污染的任何物體，如飼料、飲水、禽舍、空氣、籠具、飼養(yǎng)管理用具、運(yùn)輸車輛、昆蟲以及各種攜帶病毒的鳥類等均可進(jìn)行機(jī)械性傳播。

（三）易感動物各種日齡的禽類均可發(fā)生，但臨床多發(fā)或具備診治價值的為蛋禽群和肉雞群，特別是蛋雞和肉雞。

（四）發(fā)病誘因氣候多變，飼養(yǎng)管理不當(dāng)，密度過大，通風(fēng)不良、有害氣體過多損傷上呼吸道黏膜，都是溫和型禽流感發(fā)生的誘因。本病一年四季均可發(fā)生，但多發(fā)于秋冬季節(jié)，尤其是秋冬交界、冬春交界氣候變化大的時節(jié)。

二、臨床癥狀

病毒的致病性對禽流感的臨床表現(xiàn)影響很大，其他一些影響因素包括宿主種類、年齡、性別、并發(fā)感染情況、獲得性免疫應(yīng)答水平和環(huán)境等。溫和型禽流感常常突然發(fā)生于非免疫或免疫后不久的雞群，臨床上多與傳染性支氣管炎病毒、新城疫、細(xì)菌和支原體等發(fā)生混合感染。

發(fā)病初期無論是肉雞還是蛋雞多出現(xiàn)輕微的呼吸道癥狀，有繼發(fā)感染時可能出現(xiàn)嚴(yán)重呼吸困難，個別雞只精神沉郁，采食緩慢下降。因癥狀輕微臨床上往往被忽視，或?yàn)槔^發(fā)感染所掩蔽而誤診。

溫和型禽流感在糞便上表現(xiàn)為初期只是拉稀，中后期拉黃、綠或黃綠融合的糞便，后期有部分或少量的拉橘黃色稀便，這個特點(diǎn)對鑒別非典型雞新城疫具有重要意義，蛋雞表現(xiàn)的更是明顯。

蛋禽會出現(xiàn)產(chǎn)蛋量下降，2～3 d或1周時間下降10%～50%，高則可達(dá)70%，同時軟殼蛋、褪色蛋、沙皮蛋、畸形蛋增多，雞群康復(fù)后產(chǎn)蛋率恢復(fù)緩慢或達(dá)不到預(yù)期高峰。

隨著病情發(fā)展，個別病雞會有腫頭，眼瞼周圍浮腫，有的冠和肉髯邊緣因淤血呈暗紫色，肉髯可變厚、硬，觸之有熱感，有時出血，腿部鱗片有出血斑等癥狀。

種雞、蛋雞和產(chǎn)蛋鴨死亡率較低，病期每天死亡約0.5%左右，累計在10%以下；肉仔雞混合感染較多發(fā)，死亡率可高達(dá)10%～40%。

三、病理變化

溫和型禽流感一般極少有直接致死性現(xiàn)象，病死禽多伴有其它病原混合感染，病變部位與病變程度隨宿主種類及并發(fā)感染情況而變化。因此，臨床診斷應(yīng)同時解剖死禽尸體和發(fā)病活禽，以綜合判斷。

發(fā)病雞主要表現(xiàn)呼吸道出現(xiàn)卡他性、纖維蛋白性、漿液纖維素性、粘膿性或纖維素性膿性的炎癥，氣管黏膜充血水腫，偶爾出血。在發(fā)病后期繼發(fā)細(xì)菌感染氣管滲出物從漿液性變?yōu)楦衫覙游镔|(zhì)，特別是肉仔雞常見兩側(cè)支氣管栓塞。

溫和型流感也可能導(dǎo)致纖維素性腹膜炎，腹腔纖維素性炎性物多呈黃色。蛋雞發(fā)病后期可能出現(xiàn)卵黃性腹膜炎或輸卵管炎癥，蛋殼鈣沉積減少，蛋形變異并且易碎，色素沉著減少使蛋色變淡。

溫和型禽流感的病雞肝臟呈紫黑色，部分引起盲腸扁桃體出血、腺胃乳頭邊緣性出血，十二指腸淋巴集結(jié)彌散性出血，蛋仔雞或肉雞胸腺出血或腫大等。

水禽病變主要產(chǎn)生呼吸道病變?nèi)绺]炎，結(jié)膜炎和其他呼吸道損傷。通常并發(fā)細(xì)菌感染。

四、診斷

本病的臨床癥狀與病理變化呈多種病理形式，通常結(jié)合上述流行病學(xué)、臨床癥狀和病理變化可做出初步診斷。進(jìn)一步確診，必須進(jìn)行病毒分離、血清學(xué)診斷和分子生物學(xué)診斷。

（一）樣品的采集和保存禽流感病毒存在于病禽的所有組織、分泌物和排泄物中，進(jìn)行病毒分離時首先要采集病料。急性的病禽以肝、脾、腦為好，呼吸道癥狀明顯的病禽以氣管、肺、氣囊、鼻竇滲出物為好，放到干凈（最好是滅菌的）的包裝物內(nèi)快速送實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)。臨床或亞臨床癥狀雞群可以采集氣管或泄殖腔搽拭樣品，置于滅菌的轉(zhuǎn)移液中，并加入青霉素等抗生素以阻止細(xì)菌的生長，快速送檢。如果樣品能夠在48 h內(nèi)送實(shí)驗(yàn)室檢測，可以放在4℃，樣品需更長時間保存或運(yùn)輸，最好冷凍保存（-70℃～-15℃），溫度越低可保存時間越久。

（二）病毒的分離和鑒定病毒分離最好使用SPF雞胚（條件不具備的可選用健康非免疫雞胚），在病毒分離前，應(yīng)該將樣品剪碎后用生理鹽水配成5%～10%的懸液，凍融2～3次，通過離心來去除雜質(zhì)，取上清通過液尿囊腔接種9～10日齡雞胚，棄去24 h內(nèi)死亡的雞胚，將24 h后死亡的或72 h后沒有死亡的雞胚冷藏。抽取尿囊液進(jìn)行雞紅細(xì)胞的血凝素測定，有血凝素活性即可進(jìn)行病毒鑒定；沒有血凝素活性，則需以尿囊液原液繼續(xù)雞胚傳代(如果病毒效價不夠，即使有病毒存在也不表現(xiàn)血凝素活性，一般AIV表現(xiàn)血凝素活性的效價為1×105～106EID50/ml） ，如第三代仍無血凝素活性被認(rèn)為樣品AIV陰性。

分離病毒的鑒定，即確定表面抗原HA和NA的亞型。HA亞型是利用已知的15種HA亞型的抗血清進(jìn)行HI試驗(yàn)來確定；NA亞型是利用已知的9種NA亞型的抗血清通過微量NI試驗(yàn)來鑒定。

表1 禽流感血清學(xué)檢測方法

（三）血清學(xué)診斷血清學(xué)診斷的方法較多，目前最常用的為血凝（HA）及血凝抑制（HI）試驗(yàn)，其它方法也有各自適用范圍及優(yōu)缺點(diǎn)（見表1），在診斷過程中最好根據(jù)特定情況選擇適宜的方法。

（四）分子生物學(xué)技術(shù)診斷分子生物學(xué)診斷方法是近些年來發(fā)展起來的一種快速、先進(jìn)的診斷方法，它為禽流感病毒快速、準(zhǔn)確的檢測提供了可靠的手段。此方法較常規(guī)分離法速度快，特異性高，而且可克服因野外取料時混入其它病原微生物的干擾。常用的有RT—PCR、放射性標(biāo)記的基因探針檢測、熒光RT—PCR、NASBA、試劑盒M法等方法。

總之，禽流感實(shí)驗(yàn)室診斷方法很多，但試驗(yàn)或處理過程需遵照農(nóng)業(yè)部相關(guān)技術(shù)規(guī)范執(zhí)行，嚴(yán)格執(zhí)行生物安全措施，送檢也應(yīng)選擇具備相應(yīng)技術(shù)水平和資質(zhì)的單位。

五、溫和型禽流感的防治措施

（一）做好免疫接種工作，增強(qiáng)機(jī)體的特異性抵抗力免疫接種是保護(hù)禽群不受禽流感病毒侵害的根本，特別要接種H5、H9亞型禽流感疫苗，增強(qiáng)禽體特異性抵抗力。疫苗免疫之后，有條件的要進(jìn)行使抗體監(jiān)測，綜合評價抗體水平的高低和整齊度，結(jié)合養(yǎng)殖狀況和臨床表現(xiàn)合理調(diào)整免疫程序。溫和性禽流感雖然癥狀不明顯、直接病死率不高，但它導(dǎo)致雞群免疫力低下、繼發(fā)感染死亡、產(chǎn)蛋下降等間接損失可能是巨大的，所以免疫工作一定要做好。蛋雞開產(chǎn)前至少要進(jìn)行兩次免疫，肉雞一周齡左右免疫一次（如果生長周期較長則需加強(qiáng)免疫）。南京天邦推出的新流二聯(lián)疫苗，抗原含量高而穩(wěn)定，免疫抗體水平整齊而持久，針對溫和型禽流感的防疫實(shí)踐證明值得推薦。

（二）建立良好的生物安全體系良好的生產(chǎn)管理制度和良好的禽群生存環(huán)境是溫和型禽流感防治的基礎(chǔ)，嚴(yán)格的隔離和消毒是溫和型禽流感防治的關(guān)鍵。嚴(yán)格禁止從有疫病的場引進(jìn)種源，保證種源健康，防止禽流感病毒進(jìn)入禽場內(nèi)。在禽舍內(nèi)堅持定期消毒，在疾病的流行季節(jié)，必須做到每周噴霧消毒一次。糞便要及時清理，水槽、料槽定時用消毒液刷洗。養(yǎng)禽場必須“全進(jìn)全出”，嚴(yán)格清理和消毒，并空舍20 d以上。

（三）加強(qiáng)飼養(yǎng)管理建立科學(xué)的飼養(yǎng)管理體系，按照大規(guī)模小群體的原則，分隔多個飼喂區(qū)間。根據(jù)禽的品種和日齡，以適宜的方式飼喂適量、優(yōu)質(zhì)的全價飼料，確保禽群營養(yǎng)均衡、個體均勻。根據(jù)季節(jié)與氣溫變化，采取相應(yīng)措施，保證禽舍的溫度、濕度及飼養(yǎng)密度適宜，同時必須有適當(dāng)?shù)耐L(fēng)換氣，特別注意舍內(nèi)有氣味不得造成眼鼻不適感。在日常管理過程中，要盡量減少飼喂、清糞、清掃、消毒、轉(zhuǎn)群、免疫注射等操作對禽群的刺激，避免應(yīng)激及其誘發(fā)疾病。

（四）疫病處置發(fā)現(xiàn)疾病現(xiàn)象應(yīng)及時封鎖禽場或禽舍的人員、物品流通，禁止將病禽或可疑病禽上市，嚴(yán)重時采用尸體深埋或焚燒、污染物消毒、排泄物發(fā)酵等無害化處理措施。對病禽無特效療法，可同時使用板藍(lán)根、甘草、黃芪等中草藥配方拌料，同時飲水中添加多維素、氨基比林以及阿莫西林或喹諾酮等藥物，抑制病毒、提高機(jī)體抵抗力、緩解癥狀和預(yù)防繼發(fā)感染等。蛋雞可加入刺五加、當(dāng)歸、艾葉、黨參、白術(shù)等成份的中藥配方，以及多種維生素等，加速生殖系統(tǒng)和產(chǎn)蛋量的恢復(fù)。