元胡止痛膠囊的含藥血清對痛經(jīng)模型動物的影響

方遠(yuǎn)書，何忠平，張 輝，裘穎兒

(浙江省金華市食品藥品檢驗(yàn)所，金華 321000)

元胡止痛膠囊的含藥血清對痛經(jīng)模型動物的影響

方遠(yuǎn)書，何忠平，張 輝，裘穎兒

(浙江省金華市食品藥品檢驗(yàn)所，金華 321000)

目的 采用血清藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法，觀察元胡止痛膠囊的含藥血清對痛經(jīng)模型動物的影響。方法 縮宮素誘發(fā)大鼠痛經(jīng)模型和前列腺素E誘發(fā)小鼠痛經(jīng)模型法，對大鼠離體子宮收縮活動的影響。結(jié)果 元胡止痛膠囊的含藥血清能減少縮宮素所致大鼠扭體反應(yīng)次數(shù)和前列腺素E1所致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)，并能拮抗縮宮素對大鼠離體子宮的收縮作用。結(jié)論 元胡止痛膠囊的含藥血清對痛經(jīng)模型動物有鎮(zhèn)痛作用，并對大鼠離體子宮收縮有解痙作用。

元胡止痛膠囊;含藥血清;痛經(jīng);模型，動物

元胡止痛膠囊是浙江天一堂藥業(yè)公司生產(chǎn)產(chǎn)品，具有理氣、活血、止痛之功能，對氣滯血瘀的胃痛、肋痛、頭痛及月經(jīng)痛有較好的治療作用，主要由元胡、白芷等組成。本實(shí)驗(yàn)采用血清藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法，選擇含藥血清對縮宮素誘發(fā)大鼠痛經(jīng)模型和前列腺素E誘發(fā)小鼠痛經(jīng)模型的作用，及對縮宮素引起的大鼠離體子宮收縮的作用。來比較不同時間段的含藥血清的作用強(qiáng)弱，以確定其藥效關(guān)系。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料與儀器

元胡止痛膠囊，批號080504，規(guī)格2.5 g，浙江天一堂制藥公司;縮宮素注射液，南京新天生物化學(xué)制藥有限公司，批號080705;注射用前列腺素E1，哈藥集團(tuán)第六制藥廠，批號090106;已烯雌酚注射液，上海通用藥業(yè)股份有限公司，批號 080403。Medlab－u/Ac501H生物信號采集處理系統(tǒng)，南京美易科技有限公司產(chǎn)品，張力換能器(10g)，北京新航興業(yè)科貿(mào)易有限公司。

1.2 動物

新西蘭家兔，金華市藥檢所動物中心提供，合格證號SCXK(浙)2006－0078。SD大鼠，浙江省實(shí)驗(yàn)中心提供，合格證號 SCXK(浙)2009－0039。ICR小鼠，金華市藥檢所動物中心提供，合格證號SCXK(浙)2009－0040。

1.3 含藥血清的制備

取新西蘭家兔40只，體重2.5～3.0 kg，每只兔均灌胃給藥，劑量1mL/kg(給藥劑量=臨床常用量×動物等效劑量系數(shù)×培養(yǎng)基內(nèi)的稀釋度)，每天早、晚各1次，連續(xù)給藥7 d，各兔分別于最后一次給藥后后馬上取血(以 0 h表示)、0.5h、1.5 h、3 h取血1mL，置4℃保存2 h，待血液凝固，血清析出后，3 000 r/min離心10 min，取血清，40只兔血清合并在一起，置－20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 對縮宮素所致大鼠扭體反應(yīng)的影響［1］

雌性大鼠30只，體重(200±20)g，隨機(jī)分為5組，連續(xù)皮下注射己烯雌酚(人工造成動物處于相同的動情期，并提高子宮平滑肌對藥物的敏感性)10 d，每日1次(首日 0.8 mg/只，第 2天至第 9天0.4 mg/只，第 10天 0.8 mg/只)，皮下注射己烯雌酚的大鼠第5天開始給受試藥，連續(xù)灌胃7d。末次給己烯雌酚24 h后，再給一次實(shí)驗(yàn)藥物，40 min后腹腔注射縮宮素2 U/只，記錄給縮宮素30 min內(nèi)大鼠發(fā)生的扭體反應(yīng)次數(shù)(大鼠腹部收縮內(nèi)凹，軀干與后肢伸展，臂部與側(cè)肢體內(nèi)旋，為子宮收縮即痛經(jīng)的指標(biāo))。

1.5 對前列腺素E1所致小鼠扭體反應(yīng)的影響［2］

雌性小鼠50只，體重(20±2)g，隨機(jī)分為5組，連續(xù)皮下注射己烯雌酚10 d。(第1天、第10天為0.2 mg/只，其余每天注射0.1 mg/只)，在注射己烯雌酚的第5天開始，連續(xù)灌胃給藥7 d，末次給己烯雌酚24 h后，再給1次受試藥物，40 min后腹腔注射前列腺素E112.5 μg/10 g，觀察30 min內(nèi)小鼠發(fā)生的扭體反應(yīng)次數(shù)。

1.6 對大鼠離體子宮的影響

營養(yǎng)液與溫度的選擇:參照不同的文獻(xiàn)，筆者通過反復(fù)的預(yù)試驗(yàn)，最后選定文獻(xiàn)［3］方法，在此溫度與營養(yǎng)液條件下子宮既能夠消除自律收縮，又能保持其敏感性。大鼠120～200 g，雌性，實(shí)驗(yàn)前24 h按0.2 mg/100 g體重皮下注射己烯雌酚促使動物處于動情期，以提高子宮對藥物的敏感性。實(shí)驗(yàn)開始前將動物處死，剪取2cm長之子宮，固定于盛有子宮營養(yǎng)液的麥?zhǔn)显〔壑?15mL)，另一端與張力換能器連接，換能器與電腦相連，調(diào)節(jié)樣品前負(fù)荷為1 g(從電腦中可以直接量出子宮肌張力)，麥?zhǔn)显〔壑胁粩嗤ㄈ?O2，速度每秒1～2個氣泡。待子宮活動平穩(wěn)后，從浴槽上方加入0.05 U(浴槽終濃度為0.003 U/mL)縮宮素，子宮平滑肌開始收縮，并且能在最高處穩(wěn)定30 min，我們在縮宮素作用10 min后加入含藥血清，觀察子宮收縮情況。

2 結(jié)果

2.1 對縮宮素所致大鼠扭體反應(yīng)的影響

由表1可見，，與0時間取血的元胡止痛膠囊含藥血清比較，其0.5、1.5、3 h取血的含藥血清能明顯減少大鼠扭體反應(yīng)次數(shù)，其中1.5 h取血的含藥血清作用最強(qiáng)。

表1 對縮宮素所致大鼠扭體反應(yīng)的影響(±s，n=10)Tab.1 Effect on writhing response of oxytocin－induced dysmenorrhea model rats(±s，n=10)

表1 對縮宮素所致大鼠扭體反應(yīng)的影響(±s，n=10)Tab.1 Effect on writhing response of oxytocin－induced dysmenorrhea model rats(±s，n=10)

注:與0 h取血血清組比，※※P＜0.01，※P＜0.05Note:vs.the serum taken at 0 h

取血時間(h)Time to take blood Dose Writhing number 0 0.2 15.9±2.6 0.5 0.2 7.3±2.2※※1.5 0.2 1.9±0.7※※3.0 0.2 8.8±2.9※劑量(mL/kg)扭體次數(shù)

2.2 對前列腺素E1所致小鼠扭體反應(yīng)的影響

由表2可見，與0時間取血的元胡止痛膠囊含藥血清比較，其0.5、1.5、3 h取血的含藥血清能明顯減少小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)，其中1.5 h取血的含藥血清作用最強(qiáng)。

表2 對前列腺素E1所致小鼠扭體反應(yīng)的影響(±s，n=10)Tab.2 Effect on writhing response of prostaglandin E－induced dysmenorrhea model mice(±s，n=10)

表2 對前列腺素E1所致小鼠扭體反應(yīng)的影響(±s，n=10)Tab.2 Effect on writhing response of prostaglandin E－induced dysmenorrhea model mice(±s，n=10)

注:與0 h取血血清組比，※※P＜0.01，※P＜0.05Note:vs.the serum taken at 0 h

取血時間(h)Time to take blood劑量(mL/kg)Dose扭體次數(shù)Writhing number 0 0.2 32.3±5.0 0.5 0.2 21.7±3.6※※1.5 0.2 13.8±3.7※※3.0 0.2 28.2±3.9※

表3 對縮宮素所致大鼠離體子宮平滑肌收縮的影響(±s，n=6)Tab.3Effect on the contraction of isolated rat uterus smooth muscle of oxytocin－induced dysmenorrhea model rats(±s，n=6)

表3 對縮宮素所致大鼠離體子宮平滑肌收縮的影響(±s，n=6)Tab.3Effect on the contraction of isolated rat uterus smooth muscle of oxytocin－induced dysmenorrhea model rats(±s，n=6)

注:同組之間加縮宮素后與再加含藥血清后肌張力比較※※p＜0.01，※p＜0.05Note:Comparison of the muscle tension between the same groups after adding of oxyntocin and that after further adding of drug－containing serum

取血時間(h)劑量(mL)加縮宮素肌張力(g)加藥后肌張力(g)抑制率(%)Time to take blood Dose Muscle tension after oxytocin Muscle tension after drug Inhibition 0 0.5 2.89±1.26 2.80±1.31 0 0.5 0.5 3.01±1.52 1.32±1.12※※ 56.1 1.5 0.5 2.85±1.36 0.86±0.66※※ 69.8 3.0 0.5 2.92±1.35 1.95±1.32※33.2

2.3 元胡止痛膠囊不同時間取血的含藥血清對大鼠離體子宮的影響

由表3可見，當(dāng)加入含藥血清后子宮肌張力降低，不同時間取血，其作用不同，1.5 h取的含藥血清作用最強(qiáng)。

3 討論

元胡止痛膠囊，具有理氣、活血、止痛之功能，對氣滯血瘀的胃痛、肋痛、頭痛及月經(jīng)痛有較好的治療作用。痛經(jīng)多與子宮平滑肌痙攣性收縮、子宮供血不足或子宮炎癥有關(guān)。縮宮素和前列腺素E1可從不同機(jī)制引起子宮平滑肌痙攣(類痛經(jīng)反應(yīng))，是較公認(rèn)的痛經(jīng)模型［4］。注射己烯雌酚是給動物催情，人工造成動物處于相同的動情期，并提高子宮平滑肌對藥物的敏感性。

本試驗(yàn)采用不同時間取血的元胡止痛膠囊含藥血清，觀察其對動物痛經(jīng)模型作用。結(jié)果元胡止痛膠囊含藥血清能明顯緩解縮宮素和前列腺素E1所致的大鼠、小鼠扭體反應(yīng)，其中1.5h取的含藥血清作用最強(qiáng)。我們用HPLC測定不同時間取血的血清中延胡索乙素含量，結(jié)果血清中延胡索乙素含量從高到低依次為1.5、0.5、3.0 h取的血清，說明鎮(zhèn)痛作用主要是延胡索乙素，并與含量呈正比關(guān)系。由于中藥口服后其有機(jī)成分常在胃腸道內(nèi)受到消化液和腸菌微生物生態(tài)轉(zhuǎn)化，也就是說中藥中的有效成分并不一定就是在體內(nèi)直接發(fā)揮作用的成分，用含藥血清進(jìn)行藥理實(shí)驗(yàn)更能反應(yīng)其發(fā)揮藥理作用的有效成分，通過本實(shí)驗(yàn)，我們認(rèn)為其鎮(zhèn)痛作用的有效成分主要是延胡索乙素。

［1］芮菁，吳燕敏，唐元泰，等.經(jīng)痛寧顆粒劑治療痛經(jīng)的藥理研究［J］.中藥藥理與臨床，2001，17(3):26－27.

［2］嵇波，張露芬，朱江，等.痛經(jīng)模型建立和評價方法的思考［J］.中國藥理學(xué)通報，2008，24(6):712.

［3］H.Gerhard Vogel，WolfgangH.Vogel.著，杜冠華，李學(xué)軍，張永祥，譯.藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)指南—新藥發(fā)現(xiàn)和藥理學(xué)評價［M］.北京:科學(xué)出版社，2001:913.

［4］孫海燕，曹永孝，劉靜，等.小鼠痛經(jīng)模型的建立［J］.中國藥理學(xué)報通報，2002，18(2):233－235.

Effect of the Drug Containing Serum of Yuanhuzhitong Capsule in Animal Model of Dysmenorrhea

FANG Yuan－shu，HE Zhong－ping，ZHANG Hui，Qiu Ying－er
(Jinhua Institute for Food and Drug Control，Jinhua，Zhejiang 321000，China)

Objective To observe the effect of the drug－containing serum of a traditional Chinese medicine，Yuanhuzhitong capsule，on animal model of dysmenorrhea.Methods Oxytocin－induced rat model of dysmenorrhea and prostaglandin E－induced mouse model of dysmenorrhea were prepared，and were treated with the drug containing serum.The effect of the drug－containing serum on isolated rat uterus was examined as well.Results The drug containing serum of Yuanhuzhitong capsule reduced the times of oxytocin－induced and prostaglandin E1－induced writhing response，and excerted antagonistic effect on the oxytocin－induced contraction of isolated rat uterus.Conclusion The drug containing serum of Yuanhuzhitong capsule has an analgesic effect on rat and mouse models of dysmenorrhea，and excerts a spasmolytic effect on the contraction of isolated rat uterus.

Yuanhuzhitong capsule;Drug－containing serum;dysmenorrhea;Model，rat

R－33

A

1671－7856(2010)08－0035－03

2010－05－25

浙江省分析測試基金項(xiàng)目(04003)。

方遠(yuǎn)書(1968－)，男，獸醫(yī)師，主要研究方向:實(shí)驗(yàn)動物學(xué)。E－mail:F19680103@126.com。

何忠平(1964－)，男，主任藥師，研究方向:動物實(shí)驗(yàn)與管理。E－mail:jhshaoyq@163.com。