• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    望江南總蒽醌苷抗腫瘤作用的研究

    2010-09-15 04:25:56李月玲張?zhí)?/span>彭士明張鶴云
    關(guān)鍵詞:望江南蒽醌胸腺

    李月玲,張?zhí)?彭士明,張鶴云

    南京大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)國家重點實驗室,南京 210093

    望江南總蒽醌苷抗腫瘤作用的研究

    李月玲,張?zhí)?彭士明,張鶴云*

    南京大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)國家重點實驗室,南京 210093

    探討望江南總蒽醌苷(CSAG)的抗腫瘤作用及其作用機制。利用MTT法檢測望江南總蒽醌苷對肝癌細(xì)胞 HepS、肺癌細(xì)胞(A549)、小鼠肉瘤(S180)腹水型腫瘤細(xì)胞等腫瘤細(xì)胞和人正常肝細(xì)胞 L-02增殖的影響;實體瘤稱重法測定 CSAG對肝癌(HepS)實體瘤的抑制情況,將接種腫瘤的小鼠分成 5組,每組 6只小鼠,雌雄各半,給藥 12 d,停藥后 24 h處死動物,秤鼠體重,剝離出腫瘤,秤瘤重,測定生化指標(biāo)。結(jié)果顯示,CSAG對以上腫瘤細(xì)胞的增殖均有抑制作用,對肝癌細(xì)胞荷瘤小鼠腫瘤生長具有明顯的抑制作用;同時可增加胸腺指數(shù)和脾指數(shù)。因此,CSAG具有明顯的抗腫瘤效果,其抗腫瘤作用可能與提高機體免疫力和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有關(guān)。

    望江南總蒽醌苷;抗腫瘤;肝癌細(xì)胞 HepS;免疫;細(xì)胞凋亡

    望江南 (Cassia occidentalisL.),豆科,決明屬,又名羊角豆、野扁豆,主要分布于長江以南各地,望江南的種子、根、莖、葉都可入藥,是民間一種常用的中藥,在臨床上也有應(yīng)用。望江南的主要活性成分為蒽醌苷類化合物,由蒽醌類衍生物與糖結(jié)合而成,具有抗菌消炎、瀉下、抗風(fēng)濕等作用。盡管望江南民間應(yīng)用療效確切[1],國內(nèi)外學(xué)者對其藥理活性和化學(xué)成分也進(jìn)行了初步研究,但是目前仍然很難依據(jù)現(xiàn)有研究資料對其進(jìn)行合理開發(fā)和利用。從國內(nèi)外的文獻(xiàn)報道來看,目前對望江南的藥理活性研究主要限于其抗炎作用。本實驗對望江南總蒽醌苷體內(nèi)外抗腫瘤作用進(jìn)行了研究,以期為開發(fā)傳統(tǒng)中藥提供科學(xué)依據(jù),使望江南得到更有效的利用。

    1 材料

    1.1 實驗動物及瘤株

    昆明種小白鼠,雌雄各半,18~22 g,購于南京醫(yī)科大學(xué)動物飼養(yǎng)中心,清潔級。肝癌 HepS細(xì)胞株由中科院上海藥物研究所提供,江蘇省腫瘤研究所培養(yǎng)傳代。肺癌細(xì)胞(A549)、小鼠肉瘤(S180)腹水型腫瘤細(xì)胞、人正常肝細(xì)胞 (L-02)本實驗室凍存。

    1.2 主要試劑及儀器

    望江南總蒽醌苷樣品 (自制,純度為 95.3%); RPM I-1640細(xì)胞培養(yǎng)液 (G IBCO公司,批號: 2535081);四噻唑氮藍(lán)MTT(南京大治生物科技有限公司,批號:0793);環(huán)磷酰胺 (江蘇恒瑞制藥,批號:07122821);胎牛血清 (北京元亨圣馬生物技術(shù)研究所,批號:XA070621HY);DG5033A酶聯(lián)免疫檢測儀(南京華東電子集團醫(yī)療裝備有限公司生產(chǎn)); CO2培養(yǎng)箱 (Thermo Forma公司);DY-1001S型DNA電泳儀 (南京大學(xué)儀器廠);JD801凝膠電泳圖象分析儀(南京捷達(dá)公司)。

    2 方法

    2.1 望江南總蒽醌苷的制備

    望江南干燥莖(本實驗室種植)粉碎機粉碎,加10~15倍體積冷水,煮沸 20 min,過濾取上清,濾渣加水再重復(fù)煮兩次,收集三次濾液,此即為提取母液[2]。母液經(jīng)大孔樹脂層析,酒精洗脫,濃縮除去酒精,離心得清液即為望江南總蒽醌苷樣品[3]。

    2.2 細(xì)胞體外增殖分析

    2.2.1 望江南總蒽醌苷對肝癌細(xì)胞(HepS)體外增殖的抑制作用

    無菌條件下取接種 7~10 d的 HepS瘤源小鼠的腹水,無血清 RP M I-1640培養(yǎng)基洗滌兩次,用含10%小牛血清的 RPM I-1640培養(yǎng)基配制成細(xì)胞濃度為 1×106/mL的細(xì)胞懸液,向 96孔板每孔加入80μL,設(shè)一空白對照孔不加細(xì)胞懸液。每個試驗組設(shè) 3~5個復(fù)孔 (蒽醌苷的終濃度分別為:1.5625、3.1250、6.25、9.375、12.5、15.625、18.75、21.875、25μg/mL),另設(shè)無藥物的陰性對照組,再設(shè)一孔為各濃度樣品的無細(xì)胞組。培養(yǎng)板置于 37℃5%的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24 h,加入 5 mg/mL的MTT8.5 μL/孔,繼續(xù)培養(yǎng) 4 h,加入 20%的 SDS 40μL/孔,次日于酶標(biāo)儀上,490 nm下測OD值。做三次重復(fù),每組的復(fù)孔取均值,并計算細(xì)胞生長抑制率。

    細(xì)胞生長抑制率 =[1-(試驗組 -無細(xì)胞組)/陰性對照組]×100%

    2.2.2 望江南總蒽醌苷對肺癌細(xì)胞(A549)體外增殖的抑制作用

    取對數(shù)生長期的細(xì)胞株配制成細(xì)胞濃度為 1× 105/mL的細(xì)胞懸液,加入到 96孔板中,每孔 80μL,設(shè)一空白對照孔不加細(xì)胞懸液。試驗組加不同濃度的蒽醌苷 80μL,每個試驗組設(shè) 3~5個復(fù)孔[4],根據(jù)預(yù)試驗設(shè)置試驗組蒽醌苷的終濃度分別為:6.25、9.375、12.5、15.625、18.75、21.875、25μg/mL。另設(shè)無藥物的陰性對照組,再設(shè)一孔為各樣品濃度的無細(xì)胞組。以下操作同 2.2.1.

    2.2.3 望江南總蒽醌苷對小鼠肉瘤 (S180)腹水型腫瘤細(xì)胞的體外增殖的抑制作用

    小鼠肉瘤 S180腹水型腫瘤細(xì)胞株經(jīng)小鼠腹腔傳代,無菌抽取腹水瘤細(xì)胞,置于含 15%滅活胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中,37℃5%CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng),當(dāng)細(xì)胞生長至對數(shù)期時,配制成濃度為 5× 105/mL細(xì)胞懸液,接種于兩塊 96孔培養(yǎng)板上,每孔80μL設(shè)一空白對照孔不加細(xì)胞懸液,試驗組加不同濃度的望江南總蒽醌苷 80μL,每個試驗組設(shè) 6個復(fù)孔。試驗組望江南總蒽醌苷的終濃度分別為: 6.25、9.375、12.5μg/mL,另設(shè)無藥物的陰性對照組,再設(shè)一孔為各樣品濃度的無細(xì)胞組。一塊板培養(yǎng) 24 h和另一塊培養(yǎng) 48 h,以下操作同 2.2.1。

    2.2.4 望江南總蒽醌苷對人正常肝細(xì)胞 (L-02)體外增殖的抑制作用

    復(fù)蘇凍存的L-02細(xì)胞后,以含 10%小牛血清的 RPM I-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)傳代,取第三代對數(shù)生長期的細(xì)胞,配制成細(xì)胞濃度為 1×105/mL的細(xì)胞懸液,接種于 96孔板上,以下操作同 2.2.1。

    2.3 望江南總蒽醌苷體內(nèi)抗腫瘤作用

    HepS細(xì)胞株小鼠腹腔內(nèi)傳代,5~7 d傳代一次,傳代三次后,無菌條件下抽取腹水,加無菌生理鹽水洗滌離心,800 r/min離心 5 min,如此洗滌 3次,調(diào)整細(xì)胞濃度至 1×107/mL,臺盼藍(lán)染色法檢測存活率≥95%,用無菌注射器抽取細(xì)胞懸液皮下注射于小鼠左后肢腋下,每只鼠接種 0.2 mL。接種 24 h后將試驗動物隨機分成五組,分別為模型組,陽性對照組及高、中、低三個劑量給藥組。每組六只,雌雄各半。模型組腹腔注射生理鹽水,陽性對照組腹腔注射環(huán)磷酰胺,劑量為 20 mg/kg·d,給藥組腹腔注射的劑量分別為 0.4、0.2、0.1 mg/kg·d,每天注射前稱體重;連續(xù)注射 12 d[6]。于末次注射后 1 h,稱鼠體重,頸椎脫臼處死小鼠。完整剝離瘤塊,稱重;解剖小鼠,取出脾臟和胸腺,稱重。計算抑瘤率、胸腺指數(shù)和脾指數(shù)。

    公式:抑瘤率 (%)=(模型組平均瘤重 -給藥組平均瘤重)/模型組平均瘤重 ×100

    胸腺指數(shù)脾指數(shù) =脾臟重量/小鼠體重(mg/g)

    胸腺指數(shù) =胸腺重量/小鼠體重(mg/g)

    2.4 DNA凝膠電泳法測定望江南總蒽醌苷對肝癌細(xì)胞 HepS凋亡的影響

    取 HepS肝癌腫瘤小鼠腹腔液,加入含 10%小牛血清的 RPM I-1640培養(yǎng)基,配制成細(xì)胞懸液,取懸液加入 24孔板中,0.5 mL/孔,并分成五組:空白對照組、CSAG-20μg/mL組、CSAG-30μg/mL組、CSAG-40μg/mL組、CSAG-50μg/mL組。分別加入0.5 mL RPM I1640、CSAG-20μg/mL、CSAG-30μg/ mL、CSAG-40μg/mL、CSAG-50μg/mL置于 37℃, 5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 48 h,取處于對數(shù)生長期的細(xì)胞 1.5 mL,1500 r/min離心 4 min,棄上清,加入 1 mL PBS緩沖液懸浮細(xì)胞,1500 r/min離心 4 min,棄上清,加入 40μL 5 mol/L的 KI,振蕩 30 s,加 100 μL生理鹽水混勻,加苯酚/氯仿/異戊醇 (25∶24∶1)和苯酚/氯仿(1∶1)各抽提一次,所加的量與管中液體體積相同。小心地吸取上層水相至新管,加 0.1倍體積 3 mol/L醋酸鈉和 2.5倍體積的無水冷乙醇,上下倒置混勻,置于-20℃沉淀 0.5 h;取出于 4℃13000 r/min條件下離心 10 min,將沉淀溶于 TE緩沖液中,取各組DNA溶液 16μL,分別與 4μL上樣緩沖液混勻后電泳[7]。

    3 結(jié)果與分析

    3.1 望江南總蒽醌苷的體外抗腫瘤活性

    望江南總蒽醌苷對體外培養(yǎng)的 HepS、A549、S180細(xì)胞的增殖均有顯著的抑制作用 (表 1~3);在總蒽醌濃度 <9.3750μg/mL時,促進(jìn)人正常細(xì)胞的增殖,濃度≥9.3750μg/mL時,抑制人正常細(xì)胞的增殖,江南總蒽醌苷達(dá)到一定濃度后對細(xì)胞產(chǎn)生毒性(表 4)。

    表 1 望江南總蒽醌苷對鼠肝癌 HepS細(xì)胞增殖的影響(x±s,n=12)Table 1 Effect of total anthraquinone glycosides from Coffee Senna on mouse hepatoma cell HepS proliferation(±s,n=12)

    表 1 望江南總蒽醌苷對鼠肝癌 HepS細(xì)胞增殖的影響(x±s,n=12)Table 1 Effect of total anthraquinone glycosides from Coffee Senna on mouse hepatoma cell HepS proliferation(±s,n=12)

    注:與對照組性比:1P<0.001。Note:vs control group:1P<0.001.

    組別Group藥物濃度Drug concentration (μg/mL)平均A值A(chǔ)verage A抑制率Inhibition ratio(%)對照組 Control group 0.79±0.0781試驗組 Experimental group 1.5625 0.08±0.012190.00 3.1250 0.07±0.023191.25 6.2500 0.03±0.000196.20 9.3750 0.06±0.015192.50 12.5000 0.05±0.021193.75 15.6250 0.05±0.038193.75 18.7500 0.04±0.025195.00 21.8750 0.04±0.038195.00 25.0000 0.00±0.0001100.00

    表 2 望江南總蒽醌苷對人肺癌A549細(xì)胞增殖的影響(x±s,n=12)Table 2 Effect of total anthraquinone glycosides from Coffee Senna on proliferation of human lung cancer cells A549(±s,n=12)

    表 2 望江南總蒽醌苷對人肺癌A549細(xì)胞增殖的影響(x±s,n=12)Table 2 Effect of total anthraquinone glycosides from Coffee Senna on proliferation of human lung cancer cells A549(±s,n=12)

    注:與對照組性比:1P<0.001。Note:vs control group:1P<0.001.

    組別Group藥物濃度Drug concentration (μg/mL)平均A值A(chǔ)verage A抑制率Inhibition ratio(%)對照組 Control group 0.84±0.103試驗組 Experimental group 6.2500 0.50±0.0501 41.18 9.3750 0.23±0.0051 72.94 12.5000 0.03±0.0201 96.47 15.6250 0.02±0.0251 97.65 18.7500 0.01±0.0201 98.82 21.8750 0.00±0.0001 100.00 25.0000 0.00±0.0001 100.00

    表 3 望江南總蒽醌苷對小鼠肉瘤 S180腹水型腫瘤細(xì)胞增殖的影響 (±s,n=12)Table 3 Effect of total anthraquinone glycosides from Coffee Senna on proliferation of S180 mouse sarcoma asides tumor cells(±s,n=12)

    表 3 望江南總蒽醌苷對小鼠肉瘤 S180腹水型腫瘤細(xì)胞增殖的影響 (±s,n=12)Table 3 Effect of total anthraquinone glycosides from Coffee Senna on proliferation of S180 mouse sarcoma asides tumor cells(±s,n=12)

    注:與對照組性比:1P<0.05,2P<0.005。Note:vs control group:1P<0.05,2P<0.005.

    組別Group藥物濃度Drug concentration (μg/mL)平均A值A(chǔ)verage A抑制率Inhibition ratio(%)對照組Ⅰ(24 h) 1.20±0.113試驗組Ⅰ(24 h) 6.2500 1.03±0.127 14.16 9.3750 0.29±0.028275.83 12.5000 0.04±0.023196.67對照組Ⅱ(48h) 0.84±0.047試驗組Ⅱ(48h) 6.2500 0.93±0.000 7.14 9.3750 0.07±0.000291.67 12.5000 0.06±0.017294.64

    表 4 望江南總蒽醌苷對人正常肝細(xì)胞 L-02細(xì)胞增殖的影響(±s,n=12)Table 4 Effect of total anthraquinone glycosides from Coffee Senna on human normal liver cell L-02 proliferation (±s,n=12)

    表 4 望江南總蒽醌苷對人正常肝細(xì)胞 L-02細(xì)胞增殖的影響(±s,n=12)Table 4 Effect of total anthraquinone glycosides from Coffee Senna on human normal liver cell L-02 proliferation (±s,n=12)

    組別Group藥物濃度Drug concentration (μg/mL)平均A值A(chǔ)verage A抑制率Inhibition ratio(%)對照組 Control group 0.98±0.053試驗組 Experimental group 1.5625 1.23±0.0001-25.51 3.1250 1.29±0.0001-31.63

    注:與對照組性比:1P<0.001。Note:vs control group:1P<0. 001.

    3.2 望江南總蒽醌苷對 HepS實體瘤生長的抑制作用

    實驗結(jié)果表明,望江南總蒽醌苷對實體瘤小鼠的瘤重有抑制作用 (表 5),能提高脾指數(shù)和胸腺指數(shù)(表 6),抑制腫瘤生長的同時可以保護小鼠的免疫器官,與模型組相比差異有顯著性。

    表 5 望江南總蒽醌苷對荷瘤小鼠瘤重的影響 (±s,n= 12)Table 5 Effect of total anthraquinone glycosides from Coffee Senna on tumorweight of tumor-bearingmice(±s,n=12)

    表 5 望江南總蒽醌苷對荷瘤小鼠瘤重的影響 (±s,n= 12)Table 5 Effect of total anthraquinone glycosides from Coffee Senna on tumorweight of tumor-bearingmice(±s,n=12)

    注:與模型組相比:1P<0.001,2P<0.005。Note:vsmodle group:1P<0.001,2P<0.005。

    表 6 望江南總蒽醌苷對荷瘤小鼠脾指數(shù)和胸腺指數(shù)的影響(±s,n=12)Table 6 Effect of total anthraquinone glycosides from Coffee Senna on spleen index and thymus index of tumorbearingmice(±s,n=12)

    表 6 望江南總蒽醌苷對荷瘤小鼠脾指數(shù)和胸腺指數(shù)的影響(±s,n=12)Table 6 Effect of total anthraquinone glycosides from Coffee Senna on spleen index and thymus index of tumorbearingmice(±s,n=12)

    注:與陽性對照組相比:1P<0.05,2P<0.005。Note:vs positive group:1P<0.05,2P<0.005.

    組別Group劑量Dose (mg/kg·d)脾指數(shù)Spleen index (mg/g)胸腺指數(shù)Thymus index (mg/g)模型組 6.56±0.295 2.85±0.307 CTX組 20 4.87±0.083 1.50±0.143高劑量組 0.4 7.28±0.34721.75±0.1141中劑量 0.2 7.07±0.58222.18±0.0602低劑量組 0.1 7.17±0.71722.28±0.3922

    3.3 DNA凝膠電泳法測定 CSAG對 HepS肝癌細(xì)胞凋亡的影響

    實驗結(jié)果表明(圖 1),25μg/mL沒有小分子量的DAN片段,大部分細(xì)胞直接壞死;其他四組與空白對照組相比,有較多的小分子 DNA條帶且形成“Ladder”,大分子量 DNA量較少,說明細(xì)胞內(nèi)的大部分DNA已降解成分子量為核小體整數(shù)倍的DNA梯形片段,而對照組為連續(xù)性DNA碎片。結(jié)果表明四個低劑量的望江南總蒽醌苷對 HepS的凋亡有顯著的促進(jìn)作用。

    圖1 DNA凝膠電泳圖Fig.1 Map ofDNA agarose gel electrophoresis

    4 討論

    體外實驗表明,望江南總蒽醌苷對HepS、A549、S180的增殖具有顯著的抑制作用;體內(nèi)抑瘤實驗表明,望江南總蒽醌苷對小鼠 HepS肝癌有明顯的抑制作用,且能抑制腫瘤生長,提高脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù),增強免疫功能,其增強免疫功能是望江南抗腫瘤的機制之一。DNA凝膠電泳法和結(jié)果說明,望江南總蒽醌苷抑制 HepS細(xì)胞增殖的機制可能是,在低濃度時引起細(xì)胞凋亡,高濃度時細(xì)胞毒作用直接毒殺細(xì)胞。

    以上實驗說明望江南總蒽醌苷在體內(nèi)外均具有顯著的抗腫瘤活性,其可能機制為提高免疫力和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。本實驗只是一個初步研究,需進(jìn)一步探明望江南總蒽醌苷抗腫瘤的作用靶點,為合理開發(fā)利用望江南提供依據(jù)。

    1 Liu Y(劉野),Zhang Y(張巖).Application of folkmedicine Herbal Cffee Seena.China’sNaturopathy(中國民間療法), 2001,9(6):10.

    2 Jin B(金波),LiW(李薇),CaiW(蔡偉).Study on extraction and purification process of total Anthraquinone in Rheum.Liahizhen M ed M at M ed Resh(時珍國醫(yī)國藥), 2005,16:756-758.

    3 Liu FQ(劉峰群),YiM(易毛),Liu LP(劉麗萍),et al. Study on purification of combination of the total extractof anrhraquinone from Rheum by macroporous resin adsorption.M odern M ed J China(中國現(xiàn)代醫(yī)藥雜志),2006,8(4): 104.

    4 Cao Y(曹陽),Chen WN(陳文娜),Zhao DY(趙丹玉),et al.An experimental study on the motivational effect of Elemene on apoptosis of the cell A549 of pulmonary cancer.J Liaoning Univ Tradit Chin M ed(遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報), 2008,10(4):146-147.

    5 Jiang LN(蔣麗娜),Sun L(孫黎),Cheng JZ(程建貞),et al.Study on apoptosis of s180 cellin vitroinduced by Newcastle disease virus.J HebeiNorth Univ,M ed Ed(河北北方學(xué)院報,醫(yī)學(xué)版),2008,25(3):11-13.

    6 Yu LL(喻玲玲),Zou K(鄒坤),Wang YZ(汪鋆植),et al. Study on effectsof anti-tumorin vivoandin vitroof total saponins ofTrillium.J Chin M ed M at(中藥材),2008,31:733-736.

    7 Lin K(林科),ZHang TP(張?zhí)?,Zhang HY(張鶴云),et al. Immunological effects of ursolic acid from hawthorn fruits on hepatocellular carcinoma HepS cell in mice.Chin J B iochem Phar m(中國生化藥物雜志),2007,28:308-311.

    Study on Anti-tumor Effects of Total Anthraquinone Glycosides from Coffee Senna

    L I Yue-ling,ZHANG Tai-ping,PENG Shi-ming,ZHANG He-yun*
    State Key Laboratory of Phar m aceutical B iotechnology,School of Life Sciences,Nanjing University,Nanjing 210093,China

    To study anti-tumor effect of anthraquinone glycosides from the tuber of Coffee Senna(CSAG)and itsmechanis m of action.The effects of CSAG on proliferation of human lung cancer cellsA549,S180 mouse sarcoma ascites tumor cells,mouse hepatoma cells HepS and human normal liver cellsL-02 was detected byMTT colorimetric assay;HepS solid tumormouse modelwasmade by subcutaneous injection of logarithmic phase of HepS cells.After medications for 12 days,the effect of CSAG at different dose(0.4,0.2,0.1 mg/kg·d)on inhibition rate of tumorweight,thymus index and spleen indexwas detected.The result is thatCSAG can inhibit the proliferation of these tumor cells,and also can significantly inhibited the growth of the tumorof tumor-bearingmice,increase thymus index and spleen index at the same time. So CSAG have significantly anti-tumor effects.The mechanis m of anti-tumor effects of CSAGmight be related to the increased immunity function ofmice and induced apoptosis.

    total anthraquinone glycosides from Coffee Senna;HepS;anti-tumor;immunity;apoptposis

    R285;Q946.91

    A

    1001-6880(2010)04-0701-05

    2009-06-29 接受日期:2009-10-23

    *通訊作者 Tel:86-25-83592335;E-mail:cflab@126.com

    猜你喜歡
    望江南蒽醌胸腺
    兒童巨大胸腺增生誤診畸胎瘤1例
    望江南·荷韻
    心聲歌刊(2021年1期)2021-07-22 07:52:14
    胸腺鱗癌一例并文獻(xiàn)復(fù)習(xí)
    大孔吸附樹脂純化決明子總蒽醌工藝
    中成藥(2018年10期)2018-10-26 03:41:32
    超聲輔助雙水相提取大黃中蒽醌類成分
    大黃總蒽醌提取物對腦缺血再灌注損傷的保護作用及其機制
    中成藥(2018年4期)2018-04-26 07:12:34
    PBS/望江南提取物抗菌高分子材料的性能研究
    中國塑料(2018年1期)2018-03-30 05:16:54
    胸腔鏡胸腺切除術(shù)后不留置引流管的安全性分析
    甲狀腺顯示胸腺樣分化的癌1例報道及文獻(xiàn)回顧
    新健胃包芯片中大黃總蒽醌類成分提取因素的優(yōu)化
    汤姆久久久久久久影院中文字幕| 97在线人人人人妻| www.999成人在线观看| 满18在线观看网站| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 手机成人av网站| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产欧美日韩一区二区三 | 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 亚洲综合色网址| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 午夜视频精品福利| 美女高潮到喷水免费观看| 91国产中文字幕| 国产精品免费大片| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 日韩视频在线欧美| 男女之事视频高清在线观看 | 国产成人欧美| 国产在线免费精品| 少妇人妻 视频| 免费在线观看日本一区| 久久久久久久大尺度免费视频| 国产伦理片在线播放av一区| 婷婷色麻豆天堂久久| 国产男女内射视频| 久久久久国产精品人妻一区二区| 国产午夜精品一二区理论片| 又大又爽又粗| 9色porny在线观看| 亚洲成人免费电影在线观看 | 极品人妻少妇av视频| 狂野欧美激情性xxxx| 亚洲国产中文字幕在线视频| 国产成人啪精品午夜网站| av天堂久久9| 黄色毛片三级朝国网站| av电影中文网址| 国产精品久久久久久精品电影小说| 国产精品免费视频内射| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 久久人人97超碰香蕉20202| av在线app专区| 久热这里只有精品99| 国产欧美亚洲国产| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 99九九在线精品视频| 韩国精品一区二区三区| 中文字幕人妻丝袜制服| 中文字幕色久视频| 精品少妇久久久久久888优播| 久久影院123| 国精品久久久久久国模美| 精品高清国产在线一区| 精品卡一卡二卡四卡免费| 老司机深夜福利视频在线观看 | 一级黄片播放器| 国产精品国产三级国产专区5o| 亚洲国产精品成人久久小说| 午夜福利视频精品| 丁香六月欧美| 高清欧美精品videossex| 男人爽女人下面视频在线观看| 久久久久久免费高清国产稀缺| 久久精品国产a三级三级三级| 午夜免费成人在线视频| avwww免费| 宅男免费午夜| 久久久国产精品麻豆| 交换朋友夫妻互换小说| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 亚洲情色 制服丝袜| 激情视频va一区二区三区| 亚洲,欧美精品.| 一区二区三区精品91| 制服人妻中文乱码| 丰满饥渴人妻一区二区三| 免费在线观看完整版高清| 国产一区二区三区av在线| 精品一区二区三区av网在线观看 | 人人澡人人妻人| 亚洲精品在线美女| 免费高清在线观看日韩| 一级片'在线观看视频| 国产片特级美女逼逼视频| 精品一区二区三卡| 久久99精品国语久久久| 国产成人免费无遮挡视频| 91字幕亚洲| 亚洲成色77777| 亚洲国产av影院在线观看| 国产免费一区二区三区四区乱码| 国产野战对白在线观看| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 久久国产精品人妻蜜桃| 9热在线视频观看99| 亚洲国产欧美日韩在线播放| av在线老鸭窝| 热99久久久久精品小说推荐| 欧美激情极品国产一区二区三区| 人成视频在线观看免费观看| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 亚洲av成人精品一二三区| 男女边吃奶边做爰视频| 久久久久久久精品精品| 日韩免费高清中文字幕av| 亚洲熟女毛片儿| 精品亚洲成国产av| 亚洲久久久国产精品| 成年美女黄网站色视频大全免费| 久久久久视频综合| 欧美性长视频在线观看| 免费看不卡的av| 亚洲五月婷婷丁香| 午夜日韩欧美国产| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 日韩伦理黄色片| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 亚洲国产精品一区三区| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 欧美日韩福利视频一区二区| 亚洲成人手机| h视频一区二区三区| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 久久精品国产综合久久久| 少妇精品久久久久久久| 国产福利在线免费观看视频| 久久久久久久精品精品| 欧美97在线视频| 嫁个100分男人电影在线观看 | 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 成人国产av品久久久| 亚洲精品国产一区二区精华液| 老司机在亚洲福利影院| 欧美日本中文国产一区发布| 国产97色在线日韩免费| 婷婷色av中文字幕| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 午夜免费鲁丝| 日本欧美视频一区| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 好男人视频免费观看在线| 国产成人系列免费观看| 日韩人妻精品一区2区三区| 两个人看的免费小视频| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产成人系列免费观看| 制服诱惑二区| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 在线精品无人区一区二区三| 爱豆传媒免费全集在线观看| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 爱豆传媒免费全集在线观看| 悠悠久久av| 欧美日韩综合久久久久久| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 久久国产精品影院| 国产高清不卡午夜福利| 国产人伦9x9x在线观看| av在线老鸭窝| 99精品久久久久人妻精品| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 精品人妻在线不人妻| 香蕉国产在线看| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 男人添女人高潮全过程视频| 国产熟女午夜一区二区三区| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 亚洲国产精品999| 少妇人妻 视频| 欧美日韩av久久| 国产在线视频一区二区| 欧美另类一区| 免费黄频网站在线观看国产| 99精品久久久久人妻精品| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 亚洲国产精品999| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 日本av手机在线免费观看| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 在线观看人妻少妇| 国产精品.久久久| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 黄片播放在线免费| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 亚洲av片天天在线观看| 国产日韩欧美视频二区| 免费黄频网站在线观看国产| 国产一区二区激情短视频 | 欧美日韩福利视频一区二区| 久久久国产一区二区| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产伦理片在线播放av一区| 交换朋友夫妻互换小说| 国产成人免费观看mmmm| 国产免费视频播放在线视频| 国产成人欧美| 看十八女毛片水多多多| 午夜av观看不卡| 一本久久精品| 捣出白浆h1v1| 国产精品 欧美亚洲| 欧美+亚洲+日韩+国产| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| av国产精品久久久久影院| 午夜影院在线不卡| 黄色片一级片一级黄色片| 欧美日韩精品网址| 成在线人永久免费视频| 国产精品一区二区在线不卡| 日本欧美视频一区| 精品熟女少妇八av免费久了| 天堂俺去俺来也www色官网| 香蕉丝袜av| 我的亚洲天堂| 国产真人三级小视频在线观看| 69精品国产乱码久久久| 久久国产精品影院| 亚洲国产精品一区二区三区在线| av国产久精品久网站免费入址| 国产一卡二卡三卡精品| 亚洲精品国产一区二区精华液| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 国产一区二区三区av在线| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 天堂中文最新版在线下载| 人人澡人人妻人| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 观看av在线不卡| 国产精品99久久99久久久不卡| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| av一本久久久久| 亚洲伊人色综图| 视频在线观看一区二区三区| 一边摸一边抽搐一进一出视频| av有码第一页| 高潮久久久久久久久久久不卡| 天天影视国产精品| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲五月色婷婷综合| 最近中文字幕2019免费版| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 国产一区有黄有色的免费视频| 午夜av观看不卡| 国产精品久久久久久精品电影小说| 国产免费现黄频在线看| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 久热这里只有精品99| 少妇人妻久久综合中文| 国产高清视频在线播放一区 | 大香蕉久久网| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 美女午夜性视频免费| 日韩伦理黄色片| 一级黄片播放器| 国产伦人伦偷精品视频| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 91精品三级在线观看| 男女边吃奶边做爰视频| 欧美在线黄色| 亚洲免费av在线视频| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 中文欧美无线码| 手机成人av网站| 国产av精品麻豆| 久久99热这里只频精品6学生| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 视频区图区小说| 一区二区三区激情视频| 亚洲精品自拍成人| 下体分泌物呈黄色| 国产伦人伦偷精品视频| 日韩免费高清中文字幕av| 啦啦啦 在线观看视频| av天堂久久9| 久久狼人影院| 777米奇影视久久| 成年av动漫网址| 久久性视频一级片| 日韩 亚洲 欧美在线| 久久天堂一区二区三区四区| 国产成人91sexporn| 亚洲三区欧美一区| 手机成人av网站| 国产av一区二区精品久久| 男女下面插进去视频免费观看| 老司机午夜十八禁免费视频| 欧美乱码精品一区二区三区| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 人成视频在线观看免费观看| 伦理电影免费视频| 亚洲中文字幕日韩| 精品少妇黑人巨大在线播放| 欧美日韩福利视频一区二区| 国产1区2区3区精品| 波多野结衣av一区二区av| 最近中文字幕2019免费版| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 一边摸一边做爽爽视频免费| 黄色视频不卡| 人人妻人人澡人人看| 下体分泌物呈黄色| 99国产精品一区二区蜜桃av | 最新的欧美精品一区二区| 国产精品久久久久久精品电影小说| 久久中文字幕一级| 一本综合久久免费| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 久久青草综合色| 久久久欧美国产精品| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 国产成人系列免费观看| 日韩中文字幕视频在线看片| 在线观看人妻少妇| 在线av久久热| 午夜福利视频在线观看免费| e午夜精品久久久久久久| 自线自在国产av| 男人操女人黄网站| 欧美日韩亚洲高清精品| 欧美日韩一级在线毛片| 18禁观看日本| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 晚上一个人看的免费电影| 国产精品偷伦视频观看了| 老司机在亚洲福利影院| 日韩一本色道免费dvd| a级毛片黄视频| 欧美xxⅹ黑人| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 日本欧美国产在线视频| 99国产精品一区二区蜜桃av | 在线观看免费日韩欧美大片| 一边摸一边做爽爽视频免费| 一区二区三区精品91| 国产亚洲av高清不卡| 日韩av不卡免费在线播放| 国产精品久久久久成人av| 捣出白浆h1v1| 最新在线观看一区二区三区 | 少妇精品久久久久久久| 大香蕉久久成人网| 真人做人爱边吃奶动态| 精品视频人人做人人爽| 黄色片一级片一级黄色片| 9191精品国产免费久久| 精品亚洲成国产av| 人成视频在线观看免费观看| 久久综合国产亚洲精品| av天堂在线播放| 1024视频免费在线观看| 亚洲精品av麻豆狂野| 精品一区二区三卡| 久9热在线精品视频| a级毛片黄视频| av有码第一页| www.精华液| 三上悠亚av全集在线观看| 国产成人精品无人区| 日本av手机在线免费观看| 国产又爽黄色视频| 国产精品国产三级专区第一集| 丰满少妇做爰视频| 国产伦理片在线播放av一区| 国产成人av教育| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 国产av精品麻豆| 中文字幕av电影在线播放| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 亚洲情色 制服丝袜| 高清视频免费观看一区二区| 啦啦啦在线免费观看视频4| 久久鲁丝午夜福利片| 高清不卡的av网站| 色94色欧美一区二区| 黄色毛片三级朝国网站| 久久国产精品大桥未久av| 咕卡用的链子| 国产成人精品久久二区二区91| a级毛片黄视频| 电影成人av| 99国产精品一区二区三区| 欧美日韩综合久久久久久| av电影中文网址| 黄频高清免费视频| a 毛片基地| 亚洲精品自拍成人| 亚洲精品中文字幕在线视频| bbb黄色大片| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| av片东京热男人的天堂| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 91麻豆av在线| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 激情五月婷婷亚洲| 亚洲av美国av| 国产av国产精品国产| 国产在线免费精品| 一本久久精品| 美女大奶头黄色视频| 国产精品99久久99久久久不卡| 视频在线观看一区二区三区| 美女视频免费永久观看网站| 18禁黄网站禁片午夜丰满| www.自偷自拍.com| 日韩中文字幕视频在线看片| 国产av一区二区精品久久| 中国国产av一级| 亚洲av美国av| 中文字幕高清在线视频| 99精国产麻豆久久婷婷| 欧美国产精品va在线观看不卡| 亚洲av欧美aⅴ国产| 秋霞在线观看毛片| av福利片在线| 免费黄频网站在线观看国产| 夫妻午夜视频| 午夜福利,免费看| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 热99国产精品久久久久久7| 叶爱在线成人免费视频播放| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 久久性视频一级片| 三上悠亚av全集在线观看| 少妇人妻久久综合中文| 精品视频人人做人人爽| 久久热在线av| 国产一区二区激情短视频 | 亚洲av在线观看美女高潮| 狂野欧美激情性xxxx| 一区福利在线观看| 丰满迷人的少妇在线观看| 岛国毛片在线播放| 人妻人人澡人人爽人人| 日韩人妻精品一区2区三区| 一区二区三区激情视频| 国产成人一区二区三区免费视频网站 | 国产成人精品在线电影| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 母亲3免费完整高清在线观看| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 中文字幕人妻熟女乱码| 少妇精品久久久久久久| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 一区福利在线观看| 我的亚洲天堂| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 国产午夜精品一二区理论片| 亚洲精品久久午夜乱码| 精品国产乱码久久久久久男人| 老司机在亚洲福利影院| 男人操女人黄网站| 日本91视频免费播放| 国产亚洲欧美精品永久| 亚洲,欧美,日韩| 99国产精品99久久久久| 国产成人精品无人区| 亚洲欧美激情在线| 操出白浆在线播放| 97在线人人人人妻| 黑人猛操日本美女一级片| 亚洲男人天堂网一区| 99久久综合免费| 99国产精品一区二区蜜桃av | 首页视频小说图片口味搜索 | 亚洲,一卡二卡三卡| 人体艺术视频欧美日本| 老司机在亚洲福利影院| 日本午夜av视频| 亚洲成人免费av在线播放| 国产精品三级大全| 黄色视频不卡| 女性被躁到高潮视频| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 亚洲国产成人一精品久久久| 狂野欧美激情性xxxx| 蜜桃在线观看..| 99国产精品99久久久久| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | av一本久久久久| www.av在线官网国产| 无限看片的www在线观看| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 悠悠久久av| 狂野欧美激情性xxxx| 亚洲精品一二三| 久久国产亚洲av麻豆专区| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 女人精品久久久久毛片| 国产又色又爽无遮挡免| 91精品国产国语对白视频| 国产伦人伦偷精品视频| 久久精品久久久久久久性| 亚洲伊人久久精品综合| 欧美黑人精品巨大| 久久 成人 亚洲| 男女下面插进去视频免费观看| 亚洲av综合色区一区| 日韩大片免费观看网站| 亚洲国产精品999| 丰满少妇做爰视频| 十八禁人妻一区二区| 久久精品国产a三级三级三级| 午夜久久久在线观看| 九草在线视频观看| 国产精品久久久久久精品电影小说| 一区在线观看完整版| 欧美人与善性xxx| 久久热在线av| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 日韩一区二区三区影片| e午夜精品久久久久久久| 国产又色又爽无遮挡免| 9191精品国产免费久久| 这个男人来自地球电影免费观看| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 男女国产视频网站| 亚洲av日韩精品久久久久久密 | 人妻一区二区av| 9191精品国产免费久久| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 亚洲国产精品国产精品| 国产高清国产精品国产三级| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 日本午夜av视频| 久久狼人影院| 久久国产亚洲av麻豆专区| 男的添女的下面高潮视频| 999久久久国产精品视频| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 国产三级黄色录像| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 女警被强在线播放| 赤兔流量卡办理| 好男人视频免费观看在线| 亚洲av国产av综合av卡| 新久久久久国产一级毛片| 青春草亚洲视频在线观看| 久久国产精品大桥未久av| 一级黄片播放器| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 午夜福利视频在线观看免费| 日韩制服骚丝袜av| 国产高清视频在线播放一区 | 观看av在线不卡| 亚洲精品国产区一区二| 成年人黄色毛片网站| 黄色 视频免费看| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 亚洲精品一区蜜桃| 成年女人毛片免费观看观看9 | 国产亚洲精品第一综合不卡| 桃花免费在线播放| 国产日韩欧美亚洲二区| 精品久久久久久电影网| 波多野结衣av一区二区av| 亚洲精品国产一区二区精华液| 国产不卡av网站在线观看| 黄片播放在线免费| 国产在线免费精品| 精品久久久精品久久久| 满18在线观看网站| 久久人人爽人人片av| 男人操女人黄网站| 乱人伦中国视频| 色综合欧美亚洲国产小说| 久久天堂一区二区三区四区| av国产精品久久久久影院| 国产亚洲欧美在线一区二区| 久热爱精品视频在线9| 色婷婷av一区二区三区视频| 国产成人一区二区在线| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 免费高清在线观看视频在线观看| 亚洲欧美色中文字幕在线| 高清不卡的av网站| 婷婷色麻豆天堂久久| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产99久久九九免费精品| 欧美在线一区亚洲| 国产在线一区二区三区精| 制服人妻中文乱码| 亚洲av日韩在线播放| 成年av动漫网址| 久久影院123| 男女免费视频国产| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 悠悠久久av| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 天天添夜夜摸| 老汉色∧v一级毛片| 国产精品 欧美亚洲| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 午夜视频精品福利| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 免费观看av网站的网址| 亚洲精品国产av蜜桃| 激情五月婷婷亚洲| 免费观看av网站的网址| 男人舔女人的私密视频| 久久热在线av| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 精品亚洲成国产av| 国产成人免费无遮挡视频| 亚洲五月婷婷丁香| 一区福利在线观看|