抗HBV特異性主動(dòng)免疫療法聯(lián)合拉米夫定治療慢性乙型肝炎療效與HLA-A2、病毒載量的相關(guān)性

楊麗敏,王守云,劉 坤,陳寒冬,趙培麗,劉志民

(河北省秦皇島市第三醫(yī)院中西醫(yī)肝病科,河北秦皇島,066001)

作者應(yīng)用抗HBV特異性主動(dòng)免疫療法聯(lián)合拉米夫定治療e抗原陽(yáng)性慢性乙型肝炎(CHB)取得了很好的療效[1],本文旨在探討抗HBV特異性主動(dòng)免疫療法聯(lián)合拉米夫定治療e抗原陽(yáng)性慢性乙型肝炎(CHB)療效與HLA-A2、病毒載量的關(guān)系以指導(dǎo)臨床用藥。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2006年1月～2007年1月于我院門(mén)診就診治療并隨訪(fǎng)的60例e抗原陽(yáng)性的慢性乙型肝炎患者,全部病例診斷符合2000年《病毒性肝炎防治方案》[2]及2005年我國(guó)《慢性乙型肝炎防治指南》[3],并且符合下述條件:①血清HBsAg陽(yáng)性 、HBeAg陽(yáng)性 、HBcAb陽(yáng)性、HBVDNA 載量1≥1×103拷貝/mL;②治療前ALT反復(fù)升高至少2周以上未用過(guò)降酶藥物,且ALT水平在1～2×ULN(正常高限值),并排除酒精、肝臟毒性藥物等原因引起者;③年齡20～50歲,性別不限;④排除妊娠、對(duì)重組乙肝疫苗及拉米夫定有過(guò)敏史及其他嚴(yán)重疾病者。60例患者分為HLAA2陽(yáng)性和HLA-A2陰性?xún)山M,各30例,以病毒載量分為兩組:HBVDNA>1.0×105為高滴度組25例、HBVDNA≤1.0×105為低滴度組 35例,2組年齡、性別、病程均無(wú)明顯差異,具有可比性。男36例、女 24例,年齡 20～45歲,平均 34.32歲,HBsAg陽(yáng)性2～27年。

1.2 治療方法

2組均采用抗HBV主動(dòng)免疫療法協(xié)作組專(zhuān)用藥品:重組乙型肝炎疫苗20 μ g×2(華北制藥金坦生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn))、重組人粒細(xì)胞刺激因子75ug和重組人白介素-2(125Ala)20萬(wàn)IU(北京雙鷺?biāo)帢I(yè)股份有限公司生產(chǎn)),三角肌皮下注射,每月1次,同時(shí)予以拉米夫定(葛蘭素史克中國(guó)制藥有限公司生產(chǎn))100/d口服,治療12月,隨訪(fǎng)12月,觀察肝功能、HBV-M 、HBVDNA定量等。兩組病例治療期間不用其它免疫調(diào)節(jié)劑及護(hù)肝藥。

1.3 觀察指標(biāo)及方法

1.3.1 ELISA 方法 檢測(cè) HBsAg、HBsAb、HBeAg 、HBeAb、HBcAb 水平:治療前 、治療期間每3～6個(gè)月、治療結(jié)束及隨訪(fǎng) 6、12個(gè)月,采用ELISA 方 法 檢 測(cè):HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb,試劑由北京萬(wàn)泰生物有限公司生產(chǎn);乙肝病毒核酸擴(kuò)增(PCR)熒光定量法檢測(cè)HBVDNA定量值(參考值 <1.0歲103拷貝/mL),試劑由杭州博口科技有限公司生產(chǎn),儀器型號(hào)為BA7600;采用日立7180全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)肝功能(主要測(cè) ALT、AST、TBIL、ALB、GLO),試劑由北京首醫(yī)生物科技有限公司生產(chǎn)。

1.3.2 PCR法檢測(cè)HLA-A2水平:具體方法如下:①HBV患者血液基因組DNA模版的提取:選用北京西波醫(yī)學(xué)技術(shù)有限責(zé)任公司提供血液/組織基因組DNA提取試劑盒。用該試劑盒依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)操作步驟提取人血液基因組DNA模板,經(jīng)紫外分光光度計(jì)檢測(cè)純度應(yīng)符合標(biāo)準(zhǔn)(經(jīng)驗(yàn)值:1.60≤OD260:OD280≤2.00)。②HLA-A2基因組群的篩查與結(jié)果鑒定、HLA-A2及內(nèi)參基因引物(北京西波醫(yī)學(xué)技術(shù)有限責(zé)任公司提供)為內(nèi)參引物1對(duì):上游引物A,下游引物B,擴(kuò)增片段長(zhǎng)度 330 bp。HLA-A2基因引物(2對(duì)):一對(duì)為上游引物P 1、下游引物P2,擴(kuò)增片段長(zhǎng)度457 bp;另一對(duì)為上游引物P3、下游引物P4,擴(kuò)增片段長(zhǎng)度813 bp。

1.4 療效判定標(biāo)準(zhǔn)[3]

完全應(yīng)答:治療后ALT恢復(fù)正常,HBVDNA檢測(cè)不到和HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換;部分應(yīng)答:介于完全應(yīng)答與部分應(yīng)答之間,如治療后出現(xiàn)生化學(xué)應(yīng)答(ALT復(fù)常)并有病毒學(xué)應(yīng)答(HBVDNA載量下降2個(gè)㏒值以上或檢測(cè)不到)和/或血清學(xué)應(yīng)答(HBeAg陰性或HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換、HBeAb陽(yáng)性);無(wú)應(yīng)答:未達(dá)到以上應(yīng)答者。

2 結(jié) 果

2.1 60例患者HLA-A2結(jié)果與治療應(yīng)答效果

60例患者治療結(jié)束時(shí)完全應(yīng)答1例、部分應(yīng)答40例,總有效率68.33%(41/60)。隨訪(fǎng)12個(gè)月時(shí)完全應(yīng)答2例、部分應(yīng)答 41例,總有效率71.67%(43/60)。統(tǒng)計(jì)治療結(jié)束時(shí)和隨訪(fǎng)12個(gè)月時(shí)的應(yīng)答效果,治療后HLA-A2陽(yáng)性應(yīng)答效果與HLA-A2陰性比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表1。

表1 HLA-A2與療效的關(guān)系(n)

2.2 60例患者血清病毒載量水平與治療應(yīng)答效果

統(tǒng)計(jì)治療結(jié)束時(shí)和隨訪(fǎng)12個(gè)月時(shí)的應(yīng)答效果,結(jié)果顯示治療后低滴度組應(yīng)答效果與高滴度組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表2。

表2 病毒載量與療效的關(guān)系(n)

3 討 論

在ALT輕微升高的慢性乙型肝炎患者,免疫反應(yīng)的攻擊造成的肝損傷是隱匿且長(zhǎng)期慢性的,它會(huì)最終導(dǎo)致肝臟更為嚴(yán)重與長(zhǎng)久的損傷[4]?；诖俗髡咴鴳?yīng)用拉米夫定聯(lián)合抗HBV特異性主動(dòng)免疫療法治療慢性乙型肝炎60例取得了很好的效果[1]。國(guó)內(nèi)外研究表明,治療前血清HBV載量水平是影響治療效果的重要因素之一[5-6]。在多途徑清除HBV免疫應(yīng)答中MHC-1限制特異性CTL反應(yīng)起關(guān)鍵作用,特異性CTL對(duì)HBV特異性抗原發(fā)生免疫應(yīng)答時(shí)其表位多屬于HLAA2限制性。我們?cè)趹?yīng)用拉米夫定聯(lián)合抗HBV特異性主動(dòng)免疫療法治療慢性乙型肝炎過(guò)程中,觀察到HLA-A2陽(yáng)性組完全應(yīng)答率、部分應(yīng)答率高于HLA-A2陰性組,兩組比較有顯著差異(P<0.05),同時(shí)觀察了病毒載量與療效的關(guān)系表明:完全應(yīng)答率、部分應(yīng)答率與病毒載量有明顯的相關(guān)性,病毒載量高的一組與比病毒載量低的一組比較有顯著差異(P<0.05),因此,在治療前檢測(cè)HBVDNA水平及HLA-A2對(duì)于預(yù)測(cè)療效具有指導(dǎo)意義,為病例的選擇提供了依據(jù),對(duì)進(jìn)行個(gè)體化治療,優(yōu)化治療方案起著重要的作用,從而可以減少盲目用藥,減輕患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。

[1]王守云,彭勛,王玉華,等.抗乙型肝炎病毒特異性主動(dòng)免疫療法聯(lián)合拉米夫定治療慢性乙型肝炎臨床療效觀察[J].中國(guó)綜合臨床,2009,25:463.

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[3]中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì),感染病學(xué)會(huì).慢性乙型肝炎防治指南[J].中華肝臟病雜志,2005,13:881.

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