嗎啡緩釋栓的研制及其體內(nèi)外釋藥相關(guān)性研究

夏亞子 ，劉立瓊 ，丁明和 ，盧 青 ，王 瑋 ，婁 杰 ，束家有

（1.武漢大學(xué)藥學(xué)院，湖北武漢 430072；2.武漢市馬應(yīng)龍藥業(yè)股份公司，湖北武漢 430000）

嗎啡栓劑特別是緩控釋栓劑經(jīng)直腸給藥[1-3]臨床緩解癌癥疼痛已成為一種常用的口服替代方法。一種商品名為Moraxen嗎啡緩控釋栓已在英國(guó)上市[4]，該制劑用高于普通栓劑3～4倍的嗎啡劑量維持24 h鎮(zhèn)痛作用。Moraxen不僅解決了許多癌癥患者吞咽困難的服藥問題，而且避免嗎啡肝臟首過效應(yīng)。參考文獻(xiàn)[5-6]，以PEG6000和PEG400為組合基質(zhì)，添加阻滯劑卡波姆，氮酮為促滲透劑制備嗎啡緩控釋栓；采用自行設(shè)計(jì)的體外溶出裝置，以栓劑釋放度和理化性質(zhì)為指標(biāo)進(jìn)行體外溶出篩選；經(jīng)大白兔直腸給藥測(cè)定動(dòng)物體內(nèi)藥物釋放曲線，進(jìn)行體內(nèi)釋藥模式篩選，并用3p87程序計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

1.5 g栓模（諸暨市云路九巖山公司）；KA-10000臺(tái)式離心機(jī)（上海安亭科技儀器廠）；可調(diào)微量移液器（10～100 μl，100～1000 μl，日本 NICHIRYO）；KQ-250DB 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；Waters高效液相色譜系統(tǒng)；Waters 484紫外檢測(cè)器；Waters 745B數(shù)據(jù)處理機(jī)。

1.2 試藥

嗎啡標(biāo)準(zhǔn)品（北京藥品生物制品檢定所）；嗎啡原料藥（馬應(yīng)龍制藥有限公司）；冰醋酸（分析純，北京紅星化工廠）；甲醇（分析純，天津市博迪化工有限公司）；藥用PEG400、PEG6000（北京會(huì)友化工有限公司）；卡波姆940（天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心）；庚烷磺酸鈉（色譜級(jí)，上海晶純實(shí)業(yè)有限公司）；普通栓（武漢馬應(yīng)龍藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，批號(hào)：060505）；氮酮（分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心）；二丁基羥基甲苯BHT（分析純，北京益中偉業(yè)化工有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 栓劑的制備

按栓劑的規(guī)格（35 mg/1.5 g）進(jìn)行投料，將碾碎過80目篩的PEG6000、卡波姆、BHT混勻，80℃水浴加熱熔化，滴加處方量的PEG400、氮酮；加入過200目篩的嗎啡細(xì)粉，攪拌約0.5 h；倒入栓模冷卻，刮去多余部分，脫模即得。

2.2 體外溶出試驗(yàn)與體外釋放度的測(cè)定

將特制的若干個(gè)6 ml帶磨口塞刻度玻璃試管（L*Φ=6 cm×1 cm）分兩排固定在木板孔道中，使刻度玻璃試管下部盡量伸出；在試管底部向上伸出一根細(xì)玻璃管（L*Φ=4.0 cm×0.1 cm）供取樣用；在刻度試管中插入略小于試管內(nèi)徑的網(wǎng)狀塑料管，構(gòu)成簡(jiǎn)易的往復(fù)式溶出裝置。將上述試管板裝在水浴鍋上，使試管底部3～4cm浸入水中。將按處方制備的嗎啡緩釋栓置于體外溶出儀的玻璃試管內(nèi)，加入2 ml蒸餾水，（37.5±2.0）℃恒溫。 分別在 0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0 h時(shí)從試管取出溶出液10 μl，補(bǔ)充同等體積介質(zhì)，置于離心管中，稀釋至1 ml，用0.45 μm的微孔濾膜濾過，HPLC法測(cè)定含量，計(jì)算其累積釋放率。為了符合漏槽條件，分別在3、6 h用30%PEG溶液置換試管中的溶出液。

2.3 體內(nèi)血藥濃度測(cè)定

2.3.1 體內(nèi)篩選試驗(yàn) 將按比例縮小制備的微型緩釋栓（含嗎啡 18～20 mg）與普通栓（含嗎啡 18～20 mg）蘸少許石蠟，分別塞入禁食 24 h的新西蘭兔肛門內(nèi)。 分別于 0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、8.0、10.0、12.0 h 以及 24.0 h 時(shí)從兩只家兔的耳緣靜脈取血1 ml，置于含少量肝素鈉溶液（肝素鈉∶水=1∶4）離心管中。

2.3.2 血樣處理 家兔耳緣靜脈取血1 ml，加入1%肝素抗凝，7 000 r/min離心10 min，精密吸取血漿0.2 ml，加入0.8 ml甲醇溶液，4 000 r/min離心10 min，濾膜過濾，37℃水浴中氮?dú)獯蹈桑?00 μl甲醇溶液重新溶解，過濾，精密吸取 20 μl進(jìn)樣，進(jìn)行高效液相色譜測(cè)定。高效液相色譜分析參考文獻(xiàn)[7]進(jìn)行。

2.4 結(jié)果

2.4.1 體外溶出試驗(yàn) 水凝膠機(jī)制的緩釋栓劑溶出度測(cè)定一直是個(gè)難題，各國(guó)藥典未列出有實(shí)際使用價(jià)值的方法。常規(guī)溶出儀測(cè)定體系與直腸環(huán)境相差甚遠(yuǎn)，測(cè)定數(shù)據(jù)沒有體內(nèi)相關(guān)性。針對(duì)現(xiàn)存的問題，本實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)了簡(jiǎn)易的模擬裝置，按照“2.2”方法得A、B、C三種嗎啡緩釋栓體外溶出度，并將累積溶出百分率與時(shí)間進(jìn)行線性回歸，得到累積溶出百分率（M）-時(shí)間（t）曲線，見圖 1。

2.4.2 嗎啡緩釋栓體內(nèi)篩選與藥代動(dòng)力學(xué)研究 使用體外溶出度遞增幅度平緩的B型嗎啡緩釋栓，考查指標(biāo)R2＞0.9，按照“2.3.1”項(xiàng)下方法進(jìn)行大白兔體內(nèi)篩選，測(cè)得其血藥濃度與時(shí)間曲線，并與普通栓比較，結(jié)果見圖2。B型嗎啡緩釋栓體內(nèi)藥時(shí)曲線為6次實(shí)驗(yàn)平均結(jié)果。

2.4.3 嗎啡緩釋栓藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù) 將“2.4.1”所測(cè)普通栓與B型緩釋栓血藥濃度結(jié)果經(jīng)3p87軟件處理，獲得藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)見表1。

表1 硫酸嗎啡普通栓與緩釋栓的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)

3 討論

3.1 體外溶出試驗(yàn)結(jié)果分析

由圖1可知，PEG 組合基質(zhì)有一定的緩釋作用，但緩釋時(shí)限較短，2～3 h；加入卡波姆（Cb）后不僅緩釋時(shí)限延長(zhǎng)至7～8 h，零級(jí)釋放的相關(guān)系數(shù)R2值也大幅度提高。普通栓3～3.5 h溶出98.3%。A型緩釋栓3 h溶出65.2%，6 h溶出99.4%，t50%=2.7 h。B型緩釋栓 3 h溶出 47.3%，7 h溶出 99.5%，t50%=3.4 h。C型緩釋栓3 h溶出32.5%，8 h溶出83.0%，t50%=4.6 h。試驗(yàn)結(jié)果顯示，加卡波姆0.4 g的B型栓2 h體外釋藥29.0%，3 h體外釋藥50.0%，7 h體外釋藥99.0%，R2為0.994 9，達(dá)到《中國(guó)藥典》規(guī)定的控釋制劑標(biāo)準(zhǔn)。

3.2 體內(nèi)血藥濃度結(jié)果分析

由圖2可知，嗎啡普通栓和B型嗎啡緩釋栓大白兔直腸給藥試驗(yàn)結(jié)果可見：普通栓 Cmax為（40±2） μg/ml，且迅速消除，有效血藥濃度保持5h；同等劑量的嗎啡緩釋栓Cmax為（25±10）μg/ml，血藥濃度的峰高僅為普通栓的1/2，呈現(xiàn)的血藥平臺(tái)，持續(xù)時(shí)間為普通栓的1.0～2.5倍，具有明顯的緩控釋特點(diǎn)。體外溶出度按零級(jí)釋放模式統(tǒng)計(jì)，相關(guān)系數(shù)R2＞0.9的處方，進(jìn)行體內(nèi)篩選的血藥濃度曲線均出現(xiàn)穩(wěn)定的血藥平臺(tái)，顯示良好的體內(nèi)相關(guān)性。

3.3 嗎啡緩釋栓藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)描述

根據(jù)3p87軟件處理家兔血藥濃度數(shù)據(jù)，判定家兔肛門納入硫酸嗎啡緩釋栓后體內(nèi)處置符合二室模型。嗎啡緩控釋栓與普通栓在兔體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)過程為二室模型。硫酸嗎啡普通栓與緩釋栓的體清除率（CL）分別為0.065 8和0.062 9 mg·kg·h·（μg/ml），其中緩釋栓劑的值相對(duì)較小，表明硫酸嗎啡緩釋栓在體內(nèi)實(shí)際滯留時(shí)間較長(zhǎng)，有更長(zhǎng)的療效。

嗎啡緩控釋栓藥動(dòng)學(xué)參數(shù)t1/2意義不及平均滯留時(shí)間（MRT）[8]。通過比較普通栓與緩釋栓的MRT可以看出，硫酸嗎啡緩釋栓在體內(nèi)實(shí)際滯留時(shí)間延長(zhǎng)5 h，具有明顯的緩釋特性。緩釋栓的相對(duì)生物利用度為104.7%。對(duì)兩種制劑的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)進(jìn)行雙、單側(cè)t檢驗(yàn)，均無顯著性差異（P＞0.05），但嗎啡緩釋栓與普通栓具有相同生物等效性。

[1]Kittisupamongkol W.Morphine as an analgesic that causes vomiting[J].Southern Medical Journal,2009,102(5):554.

[2]Eugene R,David R,Thomas L,et al.Pharmacokinetics of extendedrelease epidural morphine sulfate:pooled analysis of six clinical studies[J].The Veterinary Journal,2009,181(3):299-304.

[3]Declan Walsh,Pamela S.Long-term rectal administration of high-dose sustained-release morphine tablets[J].Supportive Care in Cancer,2002,10(8):571-659.

[4]Schwarz P,Schwarz H,East S,et al.Prescription products Moraxen suppositories[J].The Pharmaceutical Journal,2000,265:378.

[5]Vromans H,Moolenaar F,Visser J,et al.Rectal absorption of metronidazol from polyethylene glycol suppositories[J].Pharmacy World&Science,2005,6(1):18-20.

[6]HansE,Junginger.ExcipientsasAbsorptionEnhancers[M].Biopharmaceutics Applications in Drug Development:Springer US,2007:139-174.

[7]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].二部.北京:化工出版社,2005:728.

[8]梁文權(quán).生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2003:354.