比阿培南對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌的抗菌活性評(píng)價(jià)

賴艷榕，彭湘明，劉少娟 ，劉燕娣

（1.廣東省廣州市紅十字會(huì)醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東廣州 510220；2.廣東醫(yī)學(xué)院，廣東東莞 523808）

鮑曼不動(dòng)桿菌是醫(yī)院感染的重要病原菌之一。近年來(lái)，由于抗生素的濫用，對(duì)美羅培南、亞胺培南、三代頭孢耐藥的鮑曼不動(dòng)桿菌不斷出現(xiàn)，給臨床治療帶來(lái)了困難[1-2]。比阿培南是一種新型的碳青霉烯類抗生素，它的C1位上有一個(gè)β-甲基，對(duì)人腎二氫肽酶-1（DHP-1）的水解穩(wěn)定。本實(shí)驗(yàn)采用瓊脂稀釋法測(cè)定比阿培南對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌的MIC，并將它與其他3種抗菌藥物進(jìn)行比較，以評(píng)價(jià)其體外抗菌活性，為臨床合理用藥提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株的來(lái)源 選擇廣東省廣州市紅十字會(huì)醫(yī)院2009年10月25日～12月10日住院患者的細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本分離的30株菌，經(jīng)美國(guó)BD公司鳳凰100全自動(dòng)細(xì)菌及藥敏分析儀鑒定為鮑曼不動(dòng)桿菌，標(biāo)本來(lái)源：1株為膽汁，2株為咽拭子，27株為痰液。質(zhì)控菌株為銅綠假單胞菌ATCC27853。

1.1.2 藥物及培養(yǎng)基 比阿培南：南京先聲東元制藥公司，批號(hào)：92-090402；亞胺培南：默沙東制藥有限公司，批號(hào)：09553；美羅培南：住友制藥有限公司，批號(hào)：2029C；頭孢他啶：葛蘭素史克公司，批號(hào)：F615；M-H 瓊脂：OXIOD 公司，批號(hào)：838703。

1.2 方法

1.2.1 MIC的測(cè)定 按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》，用瓊脂稀釋法進(jìn)行MIC測(cè)定。

1.2.2 抗菌藥物的稀釋 將比阿培南、亞胺培南、美羅培南、頭孢他啶4種藥物用倍比稀釋法從125 μg/ml至5 120 μg/ml連續(xù)倍比稀釋13個(gè)濃度梯度。

1.2.3 培養(yǎng)基制備 將已稀釋的不同濃度抗菌藥物按1∶10分別加入經(jīng)高壓滅菌過(guò)的并在45～50℃水浴中平衡的MH瓊脂中，充分混勻傾倒滅菌平皿，瓊脂厚度約4 mm，藥物的最終濃度為 0.125～512.000 μg/ml。

1.2.4 接種方法 制備濃度相當(dāng)于 0.5McFarland的菌懸液，再1∶10稀釋，吸取制備好菌液約1 μl接種于含藥MH平板表面，接種點(diǎn)的細(xì)菌濃度約為104 cfu/ml，直徑為5～8 mm的菌斑。

1.2.5 孵育 將接種好的平板置于（35±1）℃培養(yǎng) 18～24 h。

1.2.6 結(jié)果判斷 根據(jù)CLSI抗菌藥物敏感試驗(yàn)的執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)，亞胺培南敏感≤4 μg/ml；美羅培南敏感≤4 μg/ml；頭孢他啶敏感≤8 μg/ml。國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)尚未建立起比阿培南的折點(diǎn)濃度，但有文獻(xiàn)推薦，將≤4 μg/ml作為比阿培南對(duì)需氧菌的敏感濃度[3]。數(shù)據(jù)采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析，計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)30株鮑曼不動(dòng)桿菌的MIC

見(jiàn)表1，結(jié)果顯示，比阿培南的MIC集中分布在＜0.125～16.000 μg/ml濃度范圍內(nèi)，美羅培南的 MIC濃度集中分布 在0.25～16.00 μg/ml濃度范圍內(nèi)，亞胺培南的 MIC 濃度集中分布在0.25～16.00 μg/ml濃度范圍內(nèi)，頭孢他啶的 MIC 集中分布在 2～512 μg/ml濃度范圍內(nèi)。

表1 4種藥物各個(gè)濃度的MIC分布情況Tab.1 MIC distribution of 4 antibiotics in different concentration

通過(guò)多個(gè)獨(dú)立樣本比較的Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)，χ2=38.7，P=0.000，按 α=0.05 水準(zhǔn)，認(rèn)為比阿培南、美羅培南、亞胺培南、頭孢他啶4種藥物對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌的抗菌能力不同，其中比阿培南抗菌效果最好（平均秩為78.4）。

2.2 對(duì)30株臨床分離的鮑曼不動(dòng)桿菌的體外抗菌活性

見(jiàn)表2。

表2 4種抗菌藥物對(duì)30株臨床分離的鮑曼不動(dòng)桿菌的體外抗菌活性Tab.2 Antimicrobial activity of 4 antibiotics against 30 strains of Acinetobacter baumannii in vitro

結(jié)果分析，經(jīng) χ2檢驗(yàn)，χ2=18.2，P=0.000，按 α=0.05 水準(zhǔn)，可認(rèn)為4種抗菌藥物的抗菌活性有差異。多個(gè)樣本率間的多重比較結(jié)果為比阿培南抗菌活性優(yōu)于美羅培南、亞胺培南，高于三代頭孢——頭孢他啶。

3 討論

碳青霉烯類抗生素具有抗菌譜廣，抗菌作用強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，在臨床廣泛被應(yīng)用，特別是對(duì)于重癥感染的患者。早期的碳青霉烯類抗生素對(duì)人腎脫氫肽酶-1的水解作用不穩(wěn)定，因此需要和脫氫肽酶-1抑制劑聯(lián)用。比阿培南是一種新型胃腸外吸收藥物的注射用有4位（R）甲基的碳青霉烯類抗生素，對(duì)DHP-1的水解穩(wěn)定，無(wú)需與DHP-1抑制劑合用。

碳青霉烯類抗生素對(duì)革蘭陰性桿菌具有較強(qiáng)的抗菌活性，但是隨著時(shí)間的變化，革蘭陰性桿菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素（包括碳青霉烯類抗生素）和第三代頭孢類抗生素的耐藥性逐漸增強(qiáng)。有研究將比阿培南、亞胺培南、美羅培南和帕尼培南對(duì)革蘭陰性桿菌的MIC90值進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)隨著時(shí)間的變化，比阿培南與其他碳青霉烯類抗生素相比，較少出現(xiàn)耐藥問(wèn)題[4]。鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)碳青霉烯類抗生素耐藥機(jī)制主要包括產(chǎn)碳青霉烯酶、OMP丟失和主動(dòng)外排，而比阿培南可以抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的合成，耐受多種β-內(nèi)酰胺酶的水解，與主要的青霉素結(jié)合蛋白高度結(jié)合，對(duì)革蘭陰性菌有良好的細(xì)胞穿透力，較少發(fā)生其他β-內(nèi)酰胺類抗生素常見(jiàn)的細(xì)菌耐藥性問(wèn)題[5]，對(duì)頭孢菌素耐藥菌仍能發(fā)揮強(qiáng)效的抗菌作用。

表1、2結(jié)果顯示，比阿培南、美羅培南、亞胺培南、頭孢他啶四種藥物對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌的抗菌能力有差異，而以比阿培南的抗菌效果最好，其對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌的抗菌活性優(yōu)于同類藥物，高于三代頭孢——頭孢他啶，與Hiraishi等[6]結(jié)果基本相符。據(jù)日本化學(xué)療法學(xué)會(huì)雜志報(bào)道，平瀉洋一等[7]研究：比阿培南對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌的MIC50和MIC90分別為0.1 μg/ml和0.2 μg/ml，較亞胺培南和美羅培南顯示更強(qiáng)的抗菌活性。本實(shí)驗(yàn)中比阿培南的 MIC50和 MIC90分別為 1 μg/ml和 8 μg/ml，較平瀉洋一等[7]的研究數(shù)值高，但比阿培南仍比亞胺培南和美羅培南等其他抗菌藥物抗菌活性要好，這可能是由于抗生素的廣泛應(yīng)用，耐藥菌株的增加，細(xì)菌不斷增殖，使其基因型發(fā)生了的改變，以適應(yīng)環(huán)境。

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，作為碳青霉烯類抗生素新型藥物，比阿培南對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌的抗菌作用強(qiáng)。由于比阿培南特殊的結(jié)構(gòu)，它在注射入體內(nèi)后較其他碳青霉烯類抗生素更穩(wěn)定，不易被水解，而且其腎毒性幾乎為零，具有能夠單獨(dú)給藥的優(yōu)勢(shì)，所以比阿培南是更安全、有效的碳青霉烯類抗生素。比阿培南不僅可用于治療呼吸系統(tǒng)、泌尿生殖系統(tǒng)等方面的疾病，而且因其無(wú)中樞神經(jīng)系統(tǒng)毒性，不會(huì)誘發(fā)癲癇發(fā)作，故可用于治療細(xì)菌性腦膜炎。亞胺培南、美羅培南等碳青酶烯類藥物已在國(guó)內(nèi)臨床廣泛使用，而比阿培南只在日本等少數(shù)國(guó)家使用，在國(guó)內(nèi)還沒(méi)有正式投入臨床應(yīng)用。因此，本研究為將來(lái)國(guó)內(nèi)廣泛開展比阿培南的臨床應(yīng)用提供了可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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