抗凝血酶Ⅲ對家兔靜脈血栓形成的實驗研究

陳秋生，梁澤華，何 康

（廣東醫(yī)學(xué)院生理科學(xué)實驗室，廣東湛江 524023）

正常情況下，機體凝血與抗凝系統(tǒng)處于動態(tài)平衡，在病理條件下，當凝血與抗凝系統(tǒng)功能異常時，可導(dǎo)致血液高凝，甚至導(dǎo)致血栓形成。血栓可發(fā)生于許多疾病中，如血栓發(fā)生在動脈，導(dǎo)致供血的重要器官或組織嚴重缺血，如不及時診治，常危及生命。病理性過程中血栓的形成通常是由組織因子途徑啟動，然后通過內(nèi)在的途徑放大，最終導(dǎo)致凝血酶的產(chǎn)生，使纖維蛋白原水解為纖維蛋白，纖維蛋白交聯(lián)在一起，形成血栓?？鼓涪螅╝ntithrombin-Ⅲ，AT-Ⅲ）是主要的生理性血漿抗凝物質(zhì)，其對凝血酶的滅活能力占所有抗凝蛋白的70%～80%，除凝血酶外，還能抑制凝血因子Ⅹa、Ⅸa、Ⅺa、Ⅻa以及纖溶酶、胰蛋白酶、激肽釋放酶等，從而發(fā)揮抗凝作用。本文旨在探討國產(chǎn)AT-Ⅲ對家兔靜脈血栓形成的預(yù)防作用。

1 材料與方法

1.1 材料

AT-Ⅲ（華蘭生物工程有限公司，250 U/瓶、500 U/瓶凍干劑型），抗凝劑（0.109 mmol/L枸櫞酸鈉，分析純，廣州化學(xué)試劑廠），電子天平（上海天平儀器廠），自動血凝儀（thromboscreen 400c-plus，美國），家兔（實驗級，體重 2.5 kg 左右，由廣東醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供）。

1.2 方法

AT-Ⅲ 凍 干 劑 用 注 射 用 水 溶 解 到 62.5、125.0、250.0、500.0 U/6 ml，置 37℃水浴箱孵育 30 min。 50只家兔隨機分為5組，每組10只。以戊巴比妥鈉麻醉，于正中切開腹壁，分離下腔靜脈，在腎靜脈下結(jié)扎靜脈，然后縫合腹壁。結(jié)扎腔靜脈前15 min，于耳緣靜脈注射不同濃度的AT-Ⅲ（按5 ml/kg體重給藥）；對照組注射同體積的生理鹽水。8 h后重新開腹，在髂內(nèi)靜脈匯合處用手術(shù)縫線結(jié)扎下腔靜脈，緊靠結(jié)扎線外側(cè)剪下血管，迅速固定于木板上，剪開，讓未凝血液自然流出。若有血栓形成，用尺測量血栓長度，用吸水紙吸干，于電子天平上稱量血栓濕重，稱量完后將血栓置于37℃烤箱烤24 h，然后稱量血栓干重。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

在下腔靜脈結(jié)扎后8 h，對照組各動物下腔靜脈內(nèi)見明顯血栓形成。與生理鹽水對照組相比，小劑量AT-Ⅲ（62.5 U/kg）對血栓的形成未見明顯的抑制作用，但隨著AT-Ⅲ濃度的增大，血栓的長度逐漸縮短，血栓濕重和干重逐漸減輕。結(jié)果見表1。

3 討論

抗凝血酶是體內(nèi)重要的天然抗凝蛋白，屬于絲氨酸蛋白酶抑制物家族成員，抗凝血酶通過與凝血酶結(jié)合形成凝血酶-抗凝血酶（TAT）復(fù)合物，從而滅活凝血酶。此外，它還具有較強的抑制因子Ⅹa、Ⅸa活性的作用，對因子Ⅺa、Ⅶa纖溶酶及激肽釋放酶的活性也有一定的抑制作用[1-2]，廣譜的抗凝活性使其成為體內(nèi)的一種重要凝血系統(tǒng)調(diào)節(jié)劑。除此之外，抗凝血酶還具有抗感染活性，通過細胞信號傳導(dǎo)通路，改變細胞的生化特性及對炎癥細胞刺激因子的反應(yīng)，包括下調(diào)促炎、促凝因子，如 IL-1、IL-6、TNF、TF、ADP；并上調(diào)抗凝因子，如前列環(huán)素（PGI2）或CD39/ATP去氧核糖核酸酶，從而發(fā)揮抗感染作用。AT-Ⅲ對FⅩa與凝血酶的滅活作用十分重要，它可以直接抑制凝血酶，也可與凝血酶形成復(fù)合物抑制多種凝血因子的活性。AT-Ⅲ在肝素的協(xié)同作用下與凝血酶形成復(fù)合物，這樣內(nèi)源性或外源性凝血機制都可被AT-Ⅲ阻斷，當血液中的AT-Ⅲ含量減少時，只外加肝素不能阻斷凝血過程。

表1 AT-Ⅲ對靜脈血栓形成的抑制作用（±s）Tab.1 The inhibitory effect of AT-Ⅲ on venous thrombosis(±s)

表1 AT-Ⅲ對靜脈血栓形成的抑制作用（±s）Tab.1 The inhibitory effect of AT-Ⅲ on venous thrombosis(±s)

與生理鹽水對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01Compared with normal sodium control group,*P＜0.05,**P＜0.01

生理鹽水對照組AT-Ⅲ不同劑量組62.5 U/kg 125.0 U/kg 250.0 U/kg 500.0 U/kg組別 血栓長度（mm） 血栓濕重（mg）9.20±1.3139.65±4.78血栓干重（mg）9.77±1.36 9.12±1.20 6.90±1.35*4.20±0.98**3.79±0.83**38.71±5.12 29.37±3.11**17.64±4.65**13.58±5.34**9.65±1.23 7.89±1.69*4.12±1.28**3.10±1.01**

靜脈血液凝固系統(tǒng)是一個動態(tài)平衡的過程，即血凝和纖溶的平衡?？鼓溉狈κ前l(fā)生靜脈血栓與肺栓塞的常見原因之一[3]；但是在臨床上靜脈血栓形成大多是后天獲得性的，血液停滯是其最常見的獲得性原因[4]。AT-Ⅲ在生理性凝血以及控制凝血過程中起著重要的作用。當血漿中AT-Ⅲ活性＜70%時，血栓形成的危險性就會增加，凝血功能亢進會消耗AT-Ⅲ，加之內(nèi)皮細胞受損，凝血因子合成減少，所以AT-Ⅲ活性下降與消耗及合成減少有關(guān)。AT-Ⅲ缺乏，約有60%發(fā)生血栓栓塞癥，主要為靜脈血栓形成，發(fā)病部位多在下肢深部靜脈，其次為髂靜脈、腸系膜靜脈[5-7]。有實驗證實，補充AT-Ⅲ可有效減少腦梗死區(qū)的范圍及改善預(yù)后[8]。

本研究顯示，大劑量的AT-Ⅲ對靜脈血栓的形成具有抑制作用，劑量與效應(yīng)之間呈明顯的線性關(guān)系，臨床上應(yīng)用AT-Ⅲ可用于預(yù)防深靜脈血栓形成。

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