薏苡仁中酯類化學(xué)物質(zhì)組提取工藝研究

鞏曉杰，孟憲生，包永睿，郭小瑞

（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，遼寧大連 116600）

薏苡仁，另名苡仁、米仁，為禾本科植物薏苡（coix lacryma-jobi L.）的干燥成熟種仁，其性甘味淡涼，具有利水滲濕、健脾止瀉、除痹、排膿、解毒散結(jié)的功效[1]?！侗静菥V目》稱其為上品養(yǎng)心藥。薏苡仁含蛋白質(zhì) 14.70%～19.80%， 脂肪 6.23%～15.27%， 淀粉 53.00%～60.00%，少量維生素 B1和豐富的人體必需的礦物元素，營養(yǎng)價(jià)值堪稱禾本科植物之首，民間常將其作為滋補(bǔ)食品食用。薏苡仁中主要活性成分為三酰甘油[2-3]，提取方法主要有水煎煮、醇提[4]、CO2超臨界流體萃取法[5]等。其中，CO2超臨界流體萃取法成本較高，而回流提取法設(shè)備簡便，使用廣泛。本實(shí)驗(yàn)選取回流提取法，分別對提取部位、溶劑、粒度進(jìn)行考察，再采用L9（34）正交試驗(yàn)法，以薏苡仁中酯類化學(xué)物質(zhì)組（以甘油三油酸酯含量計(jì)）的含量為指標(biāo)應(yīng)用高效液相色譜法進(jìn)行分析，同時(shí)結(jié)合出膏率考察最佳提取工藝，優(yōu)選出薏苡仁中酯類化學(xué)物質(zhì)組的最佳提取工藝。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-10A高效液相色譜儀（日本島津）；SEDERE SEDEX75蒸發(fā)光散射檢測器 （法國SEDERE公司）；XWK-Ⅲ無油無音空氣泵 （天津市分析儀器廠）；ACCULAB ALC-11C.4型電子天平（德國賽多利斯集團(tuán)）；HHS型恒溫水浴鍋（上海博訊）。

1.2 試藥

乙腈、二氯甲烷、甲醇（色譜純，美國TEDIA公司）；丙酮（分析純，天津市凱信化學(xué)工業(yè)有限公司）；標(biāo)準(zhǔn)品甘油三油酸酯（批號(hào)：111692-200501，中國藥品生物制品檢定所）；薏苡仁藥材購于超市。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

流動(dòng)相的篩選與確立：甘油三油酸酯的含量測定是在《中國藥典》的方法基礎(chǔ)上建立的，但是在檢測中為了使對照品峰達(dá)到基線分離且有適宜的保留時(shí)間，考察了乙腈-二氯甲烷的多個(gè)比例后，將流動(dòng)相比例調(diào)整為乙腈-二氯甲烷（60∶40）。本實(shí)驗(yàn)均以薏苡仁中酯類化學(xué)物質(zhì)組的含量（以甘油三油酸酯含量計(jì)）為指標(biāo)進(jìn)行測定。色譜條件：色譜柱為迪馬C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈-二氯甲烷（60∶40）；流速：1 ml/min；柱溫：25℃；ELSD 參數(shù)：漂移管溫度為 35℃。

2.2 單因素試驗(yàn)

2.2.1 提取部位考察 將薏苡仁分為種殼、種皮、種仁三部分，分別精密稱取4 g，各加20 ml丙酮，60℃回流提取 1 h，過濾，濾液定容至10 ml。分別吸取上述三種供試品溶液10 μl，應(yīng)用高效液相色譜法進(jìn)行測定，結(jié)果見表1。

2.2.2 提取溶劑的考察 根據(jù)溶劑毒性、極性等因素選取乙醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷4種溶劑進(jìn)行平行提取。精密稱取1 g薏苡仁粉末4份，分別加上述有機(jī)溶劑10 ml，分3次室溫浸提，每次30 min，合并提取液，定容至10 ml。分別吸取上述4種供試品液20 μl，應(yīng)用高效液相色譜法進(jìn)行測定，結(jié)果見表2。

表1 薏苡仁提取部位考察

表2 薏苡仁提取溶劑考察

2.2.3 粒度考察 薏苡仁藥材粉碎過20、60、100目，分別精密稱取10 g，2倍量丙酮回流提取2次，每次1 h，定容至50 ml。分別吸取上述4種供試品液10 μl，應(yīng)用高效液相色譜法進(jìn)行測定，結(jié)果見表3。

表3 薏苡仁提取粒度考察

2.3 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

2.3.1 正交試驗(yàn)因素、水平的確定 以溶劑用量，提取時(shí)間，提取次數(shù)為考察因素，每個(gè)因素選擇三個(gè)水平，按正交試驗(yàn)L9（34）設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)因素水平表，見表4。

表4 正交試驗(yàn)因素水平

2.3.2 試驗(yàn)方法 精密稱取薏苡仁細(xì)粉20 g，按正交試驗(yàn)安排進(jìn)行，用丙酮回流提取，過濾，濾液定容至50 ml，取定容后的供試液10 μl，應(yīng)用高效液相色譜法進(jìn)行測定。精密吸取上述正交試驗(yàn)的1～9號(hào)樣品液各25 ml置于干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，蒸干，置于105℃的烘箱中至恒重，精密稱量，計(jì)算出膏率，結(jié)果見表5、6。

表5 正交試驗(yàn)結(jié)果

表6 方差分析

2.4 薏苡仁化學(xué)物質(zhì)組分析

2.4.1 色譜條件 C18柱（美國Agilent公司，4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈-二氯甲烷（60∶40）；流速：1 ml/min；柱溫：25℃；ELSD參數(shù)：漂移管溫度為35℃。

2.4.2 對照品溶液制備 精密稱取甘油三油酸酯對照品適量，加流動(dòng)相制成每毫升含0.14 mg的溶液，即得。

2.4.3 供試品溶液制備 薏苡仁藥材過40目篩，加3倍量丙酮，60℃回流提取3次，每次30min，合并提取液，過濾，回收溶劑，減壓干燥至無溶劑，即得薏苡仁化學(xué)物質(zhì)組。取薏苡仁化學(xué)物質(zhì)組，加適量流動(dòng)相混勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4.4 系統(tǒng)使用性試驗(yàn) 取對照品溶液5 μl，供試品溶液10 μl，以薏苡仁中酯類化學(xué)物質(zhì)組的含量為指標(biāo)，以甘油三油酸酯含量計(jì)，色譜圖見圖1，經(jīng)試驗(yàn)和查閱相關(guān)文獻(xiàn)[6]，化學(xué)物質(zhì)組中各成分見表7。

表7 薏苡仁酯類化學(xué)物質(zhì)組

3 討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，種仁中薏苡仁酯類化學(xué)物質(zhì)組含量最多；丙酮提取有效物質(zhì)組的含量高于乙酸乙酯、乙醇、乙酸乙酯和二氯甲烷；粉碎粒度越小，提取率越高。

直觀分析可知，各因素對綜合評分影響大小排序?yàn)镃＞A＞D＞B，最佳工藝為A2B1C1。所以薏苡仁中活性成分的最佳提取工藝為：6倍量丙酮回流提取1次，每次30 min。

薏苡仁具有降壓、降血糖和抗感染鎮(zhèn)痛作用，近年又發(fā)現(xiàn)有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗病毒的作用?，F(xiàn)代藥理研究表明，薏苡仁中的薏苡仁油具有抗腫瘤的作用，其抗腫瘤的活性成分為酯類化學(xué)物質(zhì)組。本文對薏苡仁中抗腫瘤活性成分的提取方法進(jìn)行考察，確定了最佳工藝，為工業(yè)生產(chǎn)提供了基礎(chǔ)，同時(shí)也為薏苡仁抗腫瘤活性成分的進(jìn)一步分離篩選提供了資料和依據(jù)。

本文采用薏苡仁中酯類化學(xué)物質(zhì)組的含量對提取方法進(jìn)行評價(jià)，參與評價(jià)的化學(xué)物質(zhì)較多，能更加有效、客觀、全面地反映提取參數(shù)。計(jì)算方法：以甘油三油酸酯計(jì)，以其峰面積的自然對數(shù)值為縱坐標(biāo)，以進(jìn)樣量的自然對數(shù)值為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，對化學(xué)物質(zhì)組中10個(gè)峰的峰面積進(jìn)行累加，計(jì)算得到的含量即為薏苡仁中酯類化學(xué)物質(zhì)組的總含量。

本文經(jīng)試驗(yàn)和查閱文獻(xiàn)，確定了薏苡仁酯類化學(xué)物質(zhì)組成分。經(jīng)比較，本實(shí)驗(yàn)與相關(guān)文獻(xiàn)[6]均采用高效液相色譜法、C18色譜柱（美國 Agilent公司，4.6 mm×250 mm，5 μm）、流速為1 ml/min，柱溫為25℃，只是在流動(dòng)相比例篩選時(shí)，選取了乙腈-二氯甲烷（60∶40）使組分中各峰基本達(dá)到基線分離的同時(shí)又有適宜的保留時(shí)間，但組分中各峰的流出順序一致，所以確定了組分中10個(gè)化合物的分子式。

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典[S].一部.北京∶化學(xué)工業(yè)出版社,2010∶353-354.

[2]鄒耀洪.薏苡仁揮發(fā)性成份的分析[J].分析化學(xué),1995,23(1)∶93-96.

[3]陳勇,陳碧蓮,何云珍,等.高效液相色譜法測定薏苡仁中甘油三油酸酯的含量[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志,2005,22(3)∶246-247.

[4]何東平,宋光森,雷達(dá),等.用乙醇溶劑提取薏苡仁油的研制報(bào)告[J].武漢食品工業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào),1995,4∶10-12.

[5]唐明,邵偉,熊澤.超臨界二氧化碳萃取薏苡仁油的研究[J].現(xiàn)代食品科技,2006,22(4)∶101-103.

[6]向智敏,祝明,陳碧蓮,等.HPLC-MS分析薏苡仁油中的甘油三酯成分[J].中國中藥雜志,2005,30(18)∶1436-1437.