鈦鎳記憶合金組織吻合器細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)方法的研究

張成 陜西省醫(yī)療器械檢測(cè)中心 (西安 710061)

鈦鎳記憶合金組織吻合器是在不銹鋼醫(yī)用縫合針的尾部連接一根用鈦鎳記憶合金絲制作的組織吻合器。它主要利用了記憶合金的生物相容性、形狀記憶性和超彈性的性能特點(diǎn)，鈦鎳記憶合金絲在低于37?C時(shí)絲質(zhì)柔軟，進(jìn)入人體內(nèi)后，在體溫條件下回復(fù)為記憶形狀，由此產(chǎn)生超彈性。通過(guò)在超彈性作用下產(chǎn)生的機(jī)械壓力，自動(dòng)將切口組織對(duì)合，達(dá)到組織吻合為目的的醫(yī)療器械。由于該產(chǎn)品直接與人體組織和血液接觸，所以其中細(xì)菌內(nèi)毒素是否存在和存在多少將影響該產(chǎn)品的質(zhì)量，甚至將會(huì)危害患者的健康和生命安全。因此對(duì)該產(chǎn)品的細(xì)菌內(nèi)毒素通過(guò)檢測(cè)來(lái)控制其質(zhì)量，就顯得尤其重要。然而目前該產(chǎn)品尚無(wú)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，而企業(yè)的產(chǎn)品注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測(cè)方法缺乏可操作性，本文通過(guò)研究該產(chǎn)品的細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)方法，為企業(yè)進(jìn)一步完善標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)，為人民群眾安全用械提供保障。

1 儀器及材料

1.1 儀器

ZH-2型自動(dòng)漩渦混合器(天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器廠(chǎng))；可調(diào)試移液器(上海榮泰生化工程有限公司)；無(wú)熱原吸咀；DC-3A型細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)干式恒溫器(南京三愛(ài)斯技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司)，BD240生化培養(yǎng)箱(德國(guó)BINDER)，DHG-9070A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海一恒科技有限公司)。

1.2 試劑及試驗(yàn)材料

細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品：效價(jià)120EU/支，批號(hào)為150601-200862 ，購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。

鱟試劑：靈敏度0.25EU/mL，規(guī)格為0.1mL，批號(hào)為0903030，購(gòu)自湛江博康海洋生物有限公司。

細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水：細(xì)菌內(nèi)毒素含量標(biāo)示值<0.005EU/mL，批號(hào)為 080808，購(gòu)自湛江博康海洋生物有限公司。

鈦鎳記憶合金組織吻合器由陜西福泰醫(yī)療科技有限公司提供(規(guī)格：6×14mm×3/8 30cm；批號(hào)：090801、100101、100501)。

2 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法的建立

2.1 試驗(yàn)準(zhǔn)備

試驗(yàn)所用器材，經(jīng)180?C烘烤2小時(shí)，以除去可能存在的外源性細(xì)菌內(nèi)毒素。

2.2 鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)

根據(jù)鱟試劑靈敏度的標(biāo)示值(λ)，將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水溶解，在漩渦混合器上混勻15min，然后制成2λ、1λ、0.5λ、0.25λ四個(gè)濃度的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，依據(jù)《中國(guó)藥典》2005版二部附錄收載的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 鱟試劑靈敏度復(fù)核結(jié)果

λc=lg–1(ΣX/4)= 0. 5λ，當(dāng) λc在 0.5λ～2.0λ 范圍內(nèi)，表明該鱟試劑可用于供試品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。

2.3 供試品干擾試驗(yàn)

按“鱟試劑靈敏度復(fù)核”方法，用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水和未檢出細(xì)菌內(nèi)毒素的供試品溶液或其不超過(guò)最大有效稀釋倍數(shù)(MVD) 的稀釋液分別將同一支( 瓶)細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品制成含細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品2.0λ、1.0λ、0.5λ和0.25λ四種濃度的細(xì)菌內(nèi)毒素溶液。用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水和用供試品溶液或其稀釋液制成的每一濃度平行做4支，另取細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水和供試品溶液或其稀釋液各做2支陰性對(duì)照。結(jié)果見(jiàn)表2、表3。

Es=lg–1(ΣXs/4)=0.707λ，Et=lg-1(ΣXt/4)=0.841λ ；當(dāng)Es 在0.5λ～2.0λ范圍內(nèi)，且當(dāng)ES /Et在0.5～2.0范圍內(nèi)，則認(rèn)為供試品在該濃度下不干擾試驗(yàn)，可以采用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法控制其質(zhì)量。

表2 供試品干擾試驗(yàn)結(jié)果(檢查用水)

表3 供試品干擾試驗(yàn)結(jié)果(供試液)

2.4 供試品溶液的制備

取供試品1根，置于25ml除去熱原的錐形瓶?jī)?nèi)，剪成1cm長(zhǎng)的小段，加入細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水10ml，(37±1)?C恒溫培養(yǎng)1h作為供試液。

2.5 樣品試驗(yàn)

取3批樣品的供試液，用靈敏度為0.25EU/mL的鱟試劑依據(jù)《中國(guó)藥典》2005版二部附錄收載的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表4

表4 供試品試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

干擾試驗(yàn)結(jié)果表明，鈦鎳記憶合金組織吻合器使用靈敏度為0.25EU/mL的鱟試劑在樣品供試液下無(wú)干擾，說(shuō)明用鱟試劑對(duì)該產(chǎn)品進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)是可行的?，F(xiàn)提出鈦鎳記憶合金組織吻合器的細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)方法：取供試品1根，剪成1cm長(zhǎng)的小段，置于25ml除去熱原的錐形瓶?jī)?nèi)，加入細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水10ml，(37±1)?C恒溫培養(yǎng)1h作為供試液。用靈敏度為0.25EU/mL的鱟試劑依據(jù)《中國(guó)藥典》2005版二部附錄收載的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法進(jìn)行試驗(yàn)，每件鈦鎳記憶合金組織吻合器的細(xì)菌內(nèi)毒素含量應(yīng)小于2.5 EU，供參考。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì)，中華人民共和國(guó)藥典。2005年版二部；化學(xué)工業(yè)出版社，2005，附錄XIE。

[2]醫(yī)療器械檢驗(yàn)操作規(guī)范，第一冊(cè)。中國(guó)科學(xué)技術(shù)出版社 2005。

[3]醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法 第1部分：化學(xué)分析方法 GB/T14233.1—2008。 ■