丹皮酚傳遞體的制備及其穩(wěn)定性研究

李 志，胡海英，王 盼

（鄭州大學(xué)藥學(xué)院，河南 鄭州 450001）

丹皮酚傳遞體的制備及其穩(wěn)定性研究

李 志，胡海英，王 盼

（鄭州大學(xué)藥學(xué)院，河南 鄭州 450001）

目的 制備丹皮酚傳遞體并進(jìn)行質(zhì)量評價。方法 采用薄膜分散-超聲法制備丹皮酚傳遞體，以粒徑為考察指標(biāo)，通過單因素考察和正交試驗設(shè)計優(yōu)選最佳處方和工藝；考察其多分散度、Zeta電位、包封率，并對傳遞體穩(wěn)定性進(jìn)行研究。結(jié)果 丹皮酚傳遞體分散于0.9%氯化鈉注射用水中，室溫放置20 d穩(wěn)定，粒徑變化較小。最佳配方為磷脂/膽固醇3∶1，磷脂/吐溫-80 2∶1，磷脂/丹皮酚10∶1；水合溫度為37℃，平均粒徑為89.34 nm。結(jié)論 丹皮酚傳遞體制備工藝簡單可行，所得傳遞體粒徑較小且均勻。

丹皮酚；傳遞體；薄膜分散-超聲法；正交試驗

Abstract：Objective To prepare the paeonol transfersome and to evaluate its quality.Methods Paeonol transfersome was prepared by filmultrasonic dispersion method.The effects of the temperature and the ratio of different components in the transfersome products on particle size were investigated.Results The appropriate formulation was phospholipids and cholesterol 3 ∶1，phospholipids and tween-80 2 ∶1，phospholipids and paeonol 10∶1 with the temperature of 37℃ and the particle size of 89.34 nm.The transfersome remained stable during dispersion and preservation in 0.9% sodium chloride injection water for 20 d.Conclusion Thepreparation method is simpleand reasonable with small and uniform particle size.

Key words：paeonol；transfersome；film-ultrasonic dispersion method；orthogonal experiment

丹皮酚是牡丹皮和徐長卿的主要活性成分，化學(xué)名稱為2-羥基-4-甲氧基苯乙酮[1]，具有祛風(fēng)、鎮(zhèn)痛、降壓、抗菌消炎、抗氧化、活血、消瘀以及抑制腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移和誘導(dǎo)其分化、凋亡等作用[2]，臨床上用于肌肉痛、關(guān)節(jié)痛、風(fēng)濕痛、神經(jīng)痛、腹痛等。它還能抑制細(xì)胞內(nèi)O2-自由基產(chǎn)生，抑制黑色素細(xì)胞內(nèi)酪氨酸酶活性及黑色素生成，對色斑、皮膚瘙癢、牛皮癬、帶狀瘡疹、濕疹等具有較好的治療和保健效果[3]。但其在水中的溶解度很低，性質(zhì)不穩(wěn)定，易揮發(fā)，見光易氧化分解，從而嚴(yán)重影響了使用和療效。若將丹皮酚制成脂質(zhì)體可有效地解決難溶性問題，并且可以提高藥物穩(wěn)定性。但由于角質(zhì)層細(xì)胞間隙孔徑僅約為30 nm，普通脂質(zhì)體具有剛性，無法直接穿過比其自身小的角質(zhì)層細(xì)胞間隙，故在經(jīng)皮轉(zhuǎn)運過程中易沉積于皮膚角質(zhì)層，不易進(jìn)入皮膚深部[4]。傳遞體（transfersomes）又稱柔性納米脂質(zhì)體，是一種自聚集泡囊，由普通脂質(zhì)體經(jīng)處方改進(jìn)而來，即在脂質(zhì)體磷脂成分中加入了表面活性劑，與普通脂質(zhì)體相比具有適宜的柔韌性、親水性和滲透性，在透皮水化力的作用下可攜帶藥物變形穿過皮膚屏障[5]。筆者制備了丹皮酚傳遞體，考察了制備方法以及各配方成分質(zhì)量比對傳遞體粒徑的影響，并對優(yōu)選配方制備的傳遞體穩(wěn)定性作了進(jìn)一步研究。

1 儀器與試藥

RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；UV-2102C型紫外分光光度計（unico-尤尼柯＜上海＞儀器有限公司）；Nano-ZS90型激光散射粒徑分析儀（英國馬爾文公司）；JY92-!型超聲波細(xì)胞粉碎機。丹皮酚（洛陽弗林生化研究所，含量為90%）；注射級卵磷脂（鄭州四維磷脂技術(shù)公司）；吐溫-80；膽固醇；魚精蛋白（上海第一生化藥業(yè)有限公司）；0.9%氯化鈉注射液；無水乙醇、乙醚均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄膜分散-超聲法制備丹皮酚傳遞體[6]

取處方量的卵磷脂、丹皮酚、膽固醇，用2 mL無水乙醇和8 mL乙醚溶解在50 mL茄形瓶中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減壓蒸發(fā)30 min，使類脂材料在容器壁上形成均勻的薄膜，再加入處方量的吐溫-80，然后在一定溫度下用0.9%氯化鈉注射液10 mL洗膜、水合1 h，再用超聲波細(xì)胞粉碎機超聲5 min(超聲2 s，停3 s，200 W，60次），接著用0.45"m濾膜過濾2次，得乳白色丹皮酚傳遞體混懸液，密封并于4℃低溫下保存。

2.2 丹皮酚普通脂質(zhì)體制備[7]

取處方量的卵磷脂、丹皮酚、膽固醇，用2 mL無水乙醇和8 mL乙醚溶解，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在一定的溫度下減壓蒸發(fā)30 min，使類脂材料在容器壁上形成均勻的薄膜，直接用0.9%氯化鈉注射液10 mL洗膜水合1 h。此后制備工藝同2.1項下方法。

2.3 粒徑、分布、Zeta電位測定

吸取樣品0.8 mL，置測量杯中，于常溫下測試，經(jīng)激光散射粒徑分析儀散射后的光在90°范圍內(nèi)變化不同角度檢測。

2.4 包封率測定

采用魚精蛋白沉淀法測定[8]。用移液槍精密吸取0.2 mL傳遞體懸液于10 mL塑料離心管中，加入10 g/L魚精蛋白溶液0.2 mL攪勻，靜置3 min，加入2.8 mL 0.9%氯化鈉注射液，5 000 r/min離心30 min，吸取上清液1 mL于10 mL量瓶中，用無水乙醇定容至刻度。在274 nm波長處，用紫外分光光度計測定吸收度。包封率計算公式為 EE=（1-W游/W總）×100%，EE為包封率，W游為未包封于傳遞體中的丹皮酚的量，W總為投藥量。

2.5 穩(wěn)定性測定

用同一方法制備一批傳遞體，在不同條件下（4℃低溫和室溫）保存放置，并在 1，3，5，10，15，20，30 d 時測定，觀察粒徑、多分散度和Zeta電位的變化。

2.6 正交試驗設(shè)計及結(jié)果

通過預(yù)試驗并參考文獻(xiàn)[9]，選擇L9（34）正交設(shè)計，考察磷脂與膽固醇的質(zhì)量比（因素A）、磷脂與吐溫-80的質(zhì)量比（因素B）、磷脂與主藥丹皮酚的質(zhì)量比（因素C）、蒸發(fā)水合溫度(因素D)等對傳遞體粒徑影響，以確定最佳制備工藝。因素水平表見表1。正交試驗結(jié)果見表2?？芍饕蛩貙α降挠绊懘笮∫来螢橐蛩谹、因素B、因素 C、因素 D，各水平對粒徑的影響為 A1＜A3＜A2，B1＜B2＜B3，C3＜C1＜C2，D1＜D3＜D2。

表1 因素水平表

表2 正交試驗結(jié)果

2.7 投藥比對粒徑的影響

投藥比指投料中磷脂與丹皮酚的質(zhì)量比。根據(jù)正交試驗結(jié)果，在A1B1的條件下改變投藥比，測定傳遞體粒徑。結(jié)果見圖1。可見，投藥比為12∶1時，粒徑最大，其后粒徑隨丹皮酚用量增加而減少?？紤]到配方中主藥含量過低，可能影響療效，故綜合投藥比與粒徑兩因素，采用磷脂/丹皮酚（mg/mg）為10∶1為宜，優(yōu)選配方A1B1C1D1。

圖1 投料比對粒徑的影響

2.8 傳遞體理化特性及包封率測定結(jié)果

由表2可見，隨著配方中膽固醇用量增加，傳遞體粒徑明顯增加。最終按A3B1C1D1配方制備的傳遞體的平均粒徑為89.34 nm，多分散度為0.226，Zeta電位為-1.953 mV。按A1B1C1D1配方制備傳遞體的平均粒徑為62.97 nm，多分散度為0.167，Zeta電位為-2.927 mV。兩配方平均粒徑相差不大。按A3C1D1制備的普通丹皮酚脂質(zhì)體的平均粒徑為221.8 nm，多分散度為0.316，Zeta電位為-3.355 mV，粒徑明顯大于傳遞體粒徑。可見，配方中加入表面活性劑可明顯減少脂質(zhì)體粒徑。根據(jù)相關(guān)報道[10]，增加膽固醇用量有利于增加包封率。結(jié)果顯示，包封率按A3B1C1D1配方制備的傳遞體為44.00%，按A1B1C1D1配方制備的為33.99%，普通脂質(zhì)體為35.67%?？紤]到膽固醇用量對傳遞體粒徑和包封率兩方面因素的影響，最終確定最佳配方為A3B1C1D1。

2.9 溫度對傳遞體穩(wěn)定性影響

按最佳配方A3B1C1D1制得的傳遞體，在不同溫度下保存放置一段時間后測得的粒徑、多分散度（PDI）和Zeta電位的變化見表3?？梢妭鬟f體在4℃低溫條件下，粒徑、多分散度和Zeta電位在20 d內(nèi)的變化比較小；在室溫條件下，放置10 d，各項參數(shù)變化較小，超過10 d粒徑迅速增大。這可能與傳遞體的Zeta電位絕對值較小，不容易產(chǎn)生電位相斥，導(dǎo)致放置時容易聚集，使其粒徑明顯增大。因此在不加入穩(wěn)定劑情況下，宜4℃低溫保存?zhèn)鬟f體。

表3 傳遞體在不同溫度下粒徑、PDI和Zeta電位隨時間變化的結(jié)果（n=3）

3 結(jié)論

采用薄膜分散-超聲法制備丹皮酚傳遞體方法簡單易行，最佳配方為磷脂/膽固醇3∶1、磷脂/吐溫-80 2∶1、磷脂/丹皮酚10∶1，水合溫度為37℃，低溫4℃可長期存放。傳遞體粒徑大小與膽固醇用量有關(guān)，隨膽固醇用量減少而減少，而傳遞體的包封率則相反。因此在優(yōu)選配方時，應(yīng)根據(jù)要求綜合兩因素，合理選擇膽固醇用量。

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Preparation and Stability of Paeonol Transfersome

Li Zhi，Hu Haiying，Wang Pan
(College of Pharmacy，Zhengzhou University，Zhengzhou，Henan，China 450001)

TQ461

A

1006－4931(2010）01－0029－02

李志（1977-），女，河南鄭州人，講師，碩士研究生，（電子信箱）Bianca@zzu.edu.cn。

2009－02－19）