多毛番茄LYC4對(duì)灰霉病的抗性鑒定

鄒慶道 張子君 李海濤 朱 華 呂書文 楊國棟 徐 明

（遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜研究所，遼寧沈陽 110161）

多毛番茄LYC4對(duì)灰霉病的抗性鑒定

鄒慶道 張子君 李海濤*朱 華 呂書文 楊國棟 徐 明

（遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜研究所，遼寧沈陽 110161）

采用孢子懸浮液接種法，鑒定了多毛番茄LYC4葉、莖、果實(shí)對(duì)灰霉病菌的抗性。結(jié)果表明：多毛番茄LYC4整株接種的病情指數(shù)為0，離體葉接種的發(fā)病率為0；離體莖接種的相對(duì)莖侵染率為0，相對(duì)莖腐擴(kuò)展速率為0；離體果實(shí)接種的相對(duì)病斑擴(kuò)展速率為5.7 %。多毛番茄LYC4葉、莖、果實(shí)3個(gè)部位接種均表現(xiàn)高抗，是1份優(yōu)秀的灰霉病抗源材料。

多毛番茄LYC4；灰霉??；抗病性

番茄灰霉病（Botrytis cinerea）是設(shè)施番茄（Lycopersicon esculentummill.）的重要病害之一，一般年份產(chǎn)量損失20 %左右，嚴(yán)重年份達(dá)50 %左右（張智 等，2005；鄒慶道 等，2008）。由于灰霉病的抗病資源材料并不豐富及資源材料經(jīng)濟(jì)性狀差等原因，導(dǎo)致抗病育種工作進(jìn)展緩慢，缺乏抗病品種。生產(chǎn)上對(duì)該病的防治主要采用農(nóng)藥防治、溫濕環(huán)境調(diào)控及人工摘除花瓣等措施，常難以達(dá)到理想的防效（李寶聚 等，1999）。因此，加速抗病資源材料的篩選與挖掘，選育適應(yīng)生產(chǎn)需要的抗病品種已成為防治灰霉病的關(guān)鍵。

由于國外番茄多為高架長季節(jié)栽培，莖部為害可導(dǎo)致整株死亡。因此，國外對(duì)資源材料的抗性研究多以莖部抗性為重點(diǎn)，對(duì)其他部位的研究相對(duì)較少。而我國番茄日光溫室栽培條件下，灰霉病菌可侵染葉、莖、花、果實(shí)等不同部位，各部位的侵染均可造成損失，尤其是果實(shí)侵染，可產(chǎn)生爛果，直接造成產(chǎn)量的損失。鑒于灰霉病侵染部位的多樣性，對(duì)各部位分別接種后進(jìn)行抗性的綜合評(píng)價(jià)很有必要。國外曾對(duì)多毛番茄LYC4的抗病性進(jìn)行接種鑒定，結(jié)果表明莖部和葉部對(duì)灰霉病均表現(xiàn)較高的抗性（Ten Have et al.，2007），但該份材料對(duì)中國灰霉病菌是否表現(xiàn)抗性，果實(shí)的抗性表現(xiàn)如何，目前尚不清楚。本試驗(yàn)對(duì)多毛番茄LYC4葉、莖、果實(shí)3個(gè)部位的抗性進(jìn)行了系統(tǒng)鑒定，為今后抗病種質(zhì)創(chuàng)新及品種選育奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)于2008年在遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜研究所進(jìn)行。抗病材料多毛番茄（Lycopersicon hirdutum）LYC4及感病材料普通番茄 T2-01由本所提供；灰霉病菌株由本所番茄研究室提供。

1.2 方法

1.2.1 灰霉病菌孢子懸浮液的制備 將菌株接種于PDA培養(yǎng)基上，待菌絲變成暗灰黑色、形成孢子后，用無菌水沖洗菌落形成孢子懸浮液，然后用紗布過濾菌絲，再用2 %蔗糖無菌水液配制孢子濃度為1×106個(gè)·mL-1的懸浮液。

1.2.2 苗期整株噴霧接種 采用噴霧法接種。選取四葉期、六葉期和八葉期的幼苗，在20℃、相對(duì)濕度100 %的黑暗條件下保濕24 h。每份試材3次重復(fù)，每重復(fù)10株。接種7d后按陳立芹（2000）的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算病情指數(shù)。

1.2.3 離體葉接種 參照李君明（2005）的方法，采用孢子懸浮液點(diǎn)滴法。取幼苗的第3片復(fù)葉接種，在小葉中心近軸處用移液器加5 μL孢子懸浮液，以無菌水作對(duì)照。將接種后的葉片置于直徑9cm的培養(yǎng)皿內(nèi)，封口膜封口。在20℃、相對(duì)濕度100 %的黑暗條件下培養(yǎng)24 h后進(jìn)行光照培養(yǎng)，光照時(shí)間為12 h·d-1，光照強(qiáng)度為3000 lx。接種4d后計(jì)算病情指數(shù)。每份試材3次重復(fù)，每重復(fù)10株，每株3片小葉。

1.2.4 離體莖接種 將六葉期的番茄植株剪掉葉片和生長點(diǎn)，從莖基部5cm處開始，將莖部切成長4cm的小段，每株苗切3段，然后垂直插在裝有已消毒的草炭和蛭石（1 V∶1 V）的培養(yǎng)器內(nèi)。接種前，在切好的莖段上均勻噴灑無菌水，每斷面接種5 μL孢子懸浮液。接種后將培養(yǎng)器封好，置于20℃、相對(duì)濕度100 %的黑暗條件下保存。接種后4、5、6d調(diào)查莖侵染率和莖腐擴(kuò)展速率，然后計(jì)算相對(duì)莖侵染率和相對(duì)莖腐擴(kuò)展速率。每份試材3次重復(fù)，每重復(fù)5個(gè)莖段。

1.2.5 離體果實(shí)接種 摘取青果，在果實(shí)的側(cè)面用消毒針尖扎眼，接種3 μL孢子懸浮液，然后將傷口處保濕，再將果實(shí)放入20℃黑暗條件下保存，接種4、5、6d后測(cè)量病斑面積，計(jì)算病斑擴(kuò)展速率和相對(duì)病斑擴(kuò)展速率。每份試材3次重復(fù)，每重復(fù)5個(gè)果，每果扎2個(gè)孔。

2 結(jié)果與分析

2.1 苗期整株接種

不同齡期接種，抗病材料LYC4均未發(fā)?。欢胁〔牧蟃2-01四葉期、六葉期、八葉期接種后的病情指數(shù)分別為61.3、84.3、100，抗感差異明顯。

2.2 離體葉接種

離體葉片接種后，抗病材料LYC4的病情指數(shù)為0，未發(fā)病；感病材料 T2-01的病情指數(shù)為100，發(fā)病嚴(yán)重，抗性存在明顯的差異（圖1）。

2.3 離體莖接種

莖部接種后，抗病材料LYC4的相對(duì)莖侵染率和相對(duì)莖腐擴(kuò)展速率均為0，抗性表現(xiàn)突出；而感病材料T2-01發(fā)病程度較高，相對(duì)莖侵染率和相對(duì)莖腐擴(kuò)展速率均為100 %。

2.4 離體果實(shí)接種

果實(shí)接種后，抗病材料LYC4一定程度發(fā)病，病斑擴(kuò)展速率為10.3mm2·d-1，相對(duì)病斑擴(kuò)展速率為5.7 %；而感病材料T2-01病斑擴(kuò)展速率為337.1mm2·d-1，相對(duì)病斑擴(kuò)展速率為100.0 %。

圖1 離體葉接種4d后癥狀

3 討論

番茄病毒病、葉霉病、晚疫病、灰霉病是北方設(shè)施番茄的重要病害，生產(chǎn)上的主栽品種對(duì)病毒病、葉霉病均有一定的抗性或耐性。晚疫病的抗病育種工作也取得較大的進(jìn)展，已篩選到優(yōu)秀的抗源材料，并開展轉(zhuǎn)育研究（邱夷鵬 等，2009）。相對(duì)其他病害，番茄灰霉病的抗病育種研究相對(duì)較弱。近年來，由于灰霉病的發(fā)生與為害越來越嚴(yán)重，引起了國內(nèi)外研究者的重視，陸續(xù)開展了抗性資源篩選并取得了一定的進(jìn)展（徐明 等，2009）。從目前的研究進(jìn)展看，篩選到的抗源材料多屬野生番茄，經(jīng)濟(jì)性狀較差，抗病基因的轉(zhuǎn)育需要較長的周期，難以在短時(shí)間內(nèi)選育出抗病品種。因此，加速番茄抗灰霉病資源材料的篩選與鑒定工作，對(duì)于灰霉病的抗病育種有重要的作用。

多毛番茄LYC4是1份優(yōu)秀的抗灰霉病材料。Ten Have等（2007）接種鑒定表明，該份材料表現(xiàn)出良好的莖部抗病性，與本研究結(jié)果基本一致，但本研究中多毛番茄LYC4對(duì)灰霉病的抗性表現(xiàn)明顯好于Ten Have等（2007）的研究結(jié)果，可能有兩方面原因：一是孢子懸浮液的配制成分有差異，導(dǎo)致孢子萌發(fā)率的差異，Ten Have等（2007）制備的孢子懸浮液中含有葡萄糖及磷酸鹽緩沖液，比本研究的孢子懸浮液配方復(fù)雜；二是菌株的致病性有差異。今后在人工接種技術(shù)方面還需要更深入的研究。

本研究對(duì)多毛番茄LYC4葉部抗性及果實(shí)抗性進(jìn)行了鑒定，均表現(xiàn)較高的抗性。由于番茄灰霉病在北方設(shè)施栽培條件下為害嚴(yán)重，病菌對(duì)莖、葉、果實(shí)、花均可侵染，因此篩選到1份對(duì)不同部位的侵染均表現(xiàn)良好抗性的材料顯得尤為重要，但各部位抗性是否由相同的基因控制尚需進(jìn)一步研究。加強(qiáng)多毛番茄LYC4的抗性遺傳規(guī)律及抗病QTL的精密圖譜定位研究是今后抗病育種研究的重點(diǎn)。

陳立芹.2000.番茄灰霉病生態(tài)防治機(jī)理研究〔碩士論文〕.沈陽：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué).

李寶聚，朱國仁，趙奎華.1999.番茄灰霉病在果實(shí)上的侵染部位及防治新技術(shù).植物病理學(xué)報(bào)，29（1）：63-67.

李君明.2005.番茄抗灰霉病和晚疫病基因定位及分子標(biāo)記多基因輔助選育技術(shù)研究〔博士論文〕.北京：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院.

邱夷鵬，張子君，李海濤，鄒慶道.2009.番茄晚疫病抗病育種及分子生物學(xué)研究進(jìn)展.中國蔬菜，（10）：1-5.

徐明，李海濤，鄒慶道，張子君.2009.番茄灰霉病抗病資源的初步篩選.中國蔬菜，（1）：38-41.

張智，李君明，宋燕.2005.番茄灰霉病及其防治研究進(jìn)展.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，26（2）：125-128.

鄒慶道，徐明，張子君，李海濤.2008.番茄灰霉病抗性鑒定技術(shù)和抗病QTL的研究現(xiàn)狀.中國蔬菜，（7）：42-44.

Ten Have A，van Berloo R，Lindhout P，van Kan J A L.2007.Partical stem and leaf resistance against the fungal pathogen Botrytis cinerea in wild relatives of tomato.Eur J Plant Pathol，117：153-166.

Evaluation of Lycopersicon hirdutum LYC4 for Resistance to Tomatograymold

ZOU Qing-dao，ZHANG Zi-jun，LI Hai-tao*，ZHU Hua，LV Shu-wen，YANGguo-dong，XUming
（Vegetable Research Institute，Liaoning Academy of Agricultural Sciences，Shenyang110161，Liaoning，China）

The resistance of Lycopersicon hidutum LYC4 to Botrytis cinerea was evaluated by inoculating spore suspension to seedlings，and leaf，stem，fruit segments.The results showed that thedisease index was0 in both seedlings anddetached-leaves，the relative stem infection rate and fruit rot expansion rate were0 and5.7 %，respectively.For this reason，the L. hirdutum LYC4 is considered to be highly resistant to tomatograymold.

Lycopersicon hidutum LYC4；Botrytis cinerea；Disease resistance

S641.2

A

1000-6346（2010）08-0053-03

2009-12-07；接受日期：2010-01-31

國家科技支撐計(jì)劃（2006BAD01A7-3-05）

鄒慶道，研究員，從事番茄抗病育種研究，E-mail：qingdaozou@hotmail.com

* 通訊作者（Corresponding author）：李海濤，研究員，從事番茄抗病育種研究，E-mail：haitao57@sohu.com