不同產(chǎn)地醋莪術(shù)飲片中β-欖香烯的含量比較Δ

姜國(guó)非，毛春芹，陸兔林，徐佳佳（南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，南京市 210046）

不同產(chǎn)地醋莪術(shù)飲片中β-欖香烯的含量比較Δ

姜國(guó)非＊，毛春芹#，陸兔林，徐佳佳（南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，南京市 210046）

目的：建立以氣相色譜法測(cè)定不同產(chǎn)地醋莪術(shù)飲片中β-欖香烯含量的方法。方法：以水楊酸甲酯為內(nèi)標(biāo)物，采用HP-5彈性石英毛細(xì)管色譜柱，程序升溫，氫火焰離子化檢測(cè)器，氣化室溫度為240℃，檢測(cè)室溫度為250℃，不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量為1 μL。結(jié)果：β-欖香烯進(jìn)樣量在0.015 07～0.150 70 μg范圍內(nèi)同其與水楊酸甲酯峰面積的比值呈良好線性關(guān)系（r＝0.999 6）；平均回收率為96.13%，RSD＝1.37%（n＝9）。溫郁金中的β-欖香烯含量相對(duì)較高。結(jié)論：本方法可作為不同產(chǎn)地醋莪術(shù)飲片中β-欖香烯的含量測(cè)定方法。

醋莪術(shù)飲片；β-欖香烯；氣相色譜法；含量測(cè)定

莪術(shù)是姜科姜黃屬植物蓬莪術(shù)Curcuma phaeocaulisVal、廣西莪術(shù)C.kwangsiensisS.G.Lee et C.F.Liang和溫郁金C.wenyujinY.H.Chen et C.Ling的干燥根莖，為常用傳統(tǒng)中藥，主產(chǎn)于廣西、四川、浙江等地。現(xiàn)代研究顯示，莪術(shù)中含有兩大類成分，即姜黃素類和揮發(fā)油（1%～2.5%）成分[1]。姜黃素類物質(zhì)有抗炎、抗腫瘤、降血脂、抗氧化等作用[2，3]。揮發(fā)油中的主要成分為莪術(shù)醇、β-欖香烯（β-elemene）、蓬莪術(shù)酮、姜黃醇酮等[4]。β-欖香烯作為一種新型非細(xì)胞毒性抗癌藥已被廣泛應(yīng)用于臨床，近年來研究發(fā)現(xiàn)β-欖香烯對(duì)腫瘤細(xì)胞起直接殺傷作用，且具有放化療協(xié)同作用[5]。醋莪術(shù)飲片因產(chǎn)地的不同，β-欖香烯的含量也存在明顯差異。筆者利用氣相色譜（GC）法對(duì)醋莪術(shù)飲片中β-欖香烯的含量進(jìn)行測(cè)定，旨在為制定醋莪術(shù)飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

HP4890D型GC儀（美國(guó)安捷倫公司）；WDL-95型工作站（中國(guó)科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所）；GH-500B型氫氣發(fā)生器、GA2000A型低噪音空氣泵（北京中興匯利科技發(fā)展有限公司）。

1.2 試藥

β-欖香烯對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100268-200401）；水楊酸甲酯（內(nèi)標(biāo)物，化學(xué)純，純度≥98.0%，上海凌峰化學(xué)試劑有限公司）；其余試劑均為分析純。樣品藥材購(gòu)自莪術(shù)主產(chǎn)地（四川、廣西、浙江，見表1），經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院巢建國(guó)教授鑒定為姜科植物蓬莪術(shù)C.phaeocaulisVal、廣西莪術(shù)C.kwangsiensisS.G.Lee et C.F.Liang及溫郁金C.wenyujinY.H.Chen et C.Ling的干燥根莖，分別取凈莪術(shù)片按醋炙法生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程制得各產(chǎn)地相應(yīng)的醋莪術(shù)飲片。

表1 樣品來源及批次Tab 1 Sources and batches of sample

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[6]

色譜柱：HP-5彈性石英毛細(xì)管柱（30 m×0.53 mm×1.0 μm）；程序升溫：初始溫度105℃，以每分鐘5℃的速率升溫至145℃，保持7 min，再以每分鐘10℃的速率升溫至240℃，保持4 min；進(jìn)樣口溫度：240℃；氫火焰離子化檢測(cè)器，檢測(cè)器溫度：250℃；不分流進(jìn)樣。在此色譜條件下，各對(duì)照品均達(dá)到完全分離。理論板數(shù)按β-欖香烯峰計(jì)算應(yīng)不低于5 000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液 精密稱取β-欖香烯對(duì)照品適量，加丙酮溶解并稀釋成1.507 mg·mL-1的溶液，即得。

2.2.2 內(nèi)標(biāo)溶液 精密稱取水楊酸甲酯適量，加丙酮制成1.515 mg·mL-1的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液 取批號(hào)為080716的醋莪術(shù)飲片碾碎成粉末，過4號(hào)篩，稱取粉末約2 g，精密稱定，置索氏提取器中，加乙醚50 mL，加熱回流提取至無色，提取液置于通風(fēng)櫥中揮干溶劑，殘?jiān)颖芙獠⑥D(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液0.5 mL，用丙酮定容，搖勻，即得。

2.2.4 混標(biāo)溶液 精密吸取1.507 mg·mL-1的對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1 mL，置于10 mL容量瓶中，再精密吸取1.515 mg·mL-1的內(nèi)標(biāo)溶液0.5 mL至上述各容量瓶中，加丙酮定容，搖勻，使β-欖香烯濃度分別為0.015 07、0.030 14、0.060 28、0.090 42、0.120 56、0.150 70 mg·mL-1，水楊酸甲酯濃度均為0.075 75 mg·mL-1。

2.3 校正因子的測(cè)定

分別吸取對(duì)照品溶液和內(nèi)標(biāo)溶液1 mL，置于10 mL容量瓶中，加丙酮定容，搖勻，取1 μL注入GC儀，計(jì)算，得校正因子為0.453 3（n＝5）。

2.4 專屬性試驗(yàn)

分別取空白溶劑、內(nèi)標(biāo)溶液、內(nèi)標(biāo)加對(duì)照品的混合溶液及內(nèi)標(biāo)加供試品的混合溶液，注入GC儀中，按上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果表明在對(duì)照品峰處無干擾。色譜見圖1。

圖1 氣相色譜圖A.空白溶劑；B.內(nèi)標(biāo)；C.對(duì)照品+內(nèi)標(biāo)；D.供試品+內(nèi)標(biāo)；1.水楊酸甲酯；2.β-欖香烯Fig 1 GC chromatogramsA.blank solvent；B.internal standard；C.reference substance+internal standard；D.test sample+internal standard；1.methyl salicylate；2.β-elemene

2.5 線性關(guān)系考察

分別精密吸取混標(biāo)溶液1 μL，按上述色譜條件進(jìn)樣，重復(fù)2次，測(cè)定峰面積。以β-欖香烯進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，β-欖香烯與水楊酸甲酯峰面積比值（Y）為縱坐標(biāo)，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y＝29.275X+0.050 2（r＝0.999 6）。結(jié)果表明，β-欖香烯進(jìn)樣量在0.015 07～0.150 70 μg范圍內(nèi)同其與水楊酸甲酯的峰面積比值呈良好線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗(yàn)

取濃度為0.060 28 mg·mL-1的混標(biāo)溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣1 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，以β-欖香烯與水楊酸甲酯峰面積比值計(jì)算精密度。結(jié)果，RSD＝1.46%，表明本方法精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，按上述色譜條件，在0、6、10、14、18、24 h各進(jìn)樣1 μL，計(jì)算β-欖香烯與水楊酸甲酯峰面積比值。結(jié)果，RSD＝0.96%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取本品同一批粉末2 g，精密稱定，平行6份，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，分別精密吸取1 μL注入GC儀，計(jì)算含量。結(jié)果，樣品中β-欖香烯的平均含量為0.040 12%，RSD＝1.51%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

取本品粉末1 g，精密稱定，平行9份，分別加入濃度為0.286 33 mg·mL-1的對(duì)照品溶液 0.8、1.0、1.2 mL，加乙醚50 mL，索氏回流提取至無色，提取液置通風(fēng)櫥中揮干溶劑，加適量丙酮溶解并轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，移入濃度為1.515 mg·mL-1的內(nèi)標(biāo)溶液0.5 mL，用丙酮定容，即得供試品溶液。按照校正因子法測(cè)定樣品含量，并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表2。

表2 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 2Results of recovery test（n＝9）

2.10 樣品含量測(cè)定

取15批醋莪術(shù)飲片粉末各2 g，精密稱定，平行3份，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述方法測(cè)定樣品中β-欖香烯的含量，結(jié)果見表3。

3 討論

筆者比較了HP-50毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.53 mm×1.0 μm）、HP-5毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.53 mm×1.0 μm）、HP-INNOWAX毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.53 mm×1.0 μm）3種色譜柱，分別采用同一色譜條件進(jìn)行分離。結(jié)果表明，用HP-5毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.53 mm×1.0 μm）分離效果較佳。

筆者對(duì)提取溶劑、提取方式及提取時(shí)間進(jìn)行了考察，發(fā)現(xiàn)采用乙醚索氏提取，提取效果較好，且色譜峰峰形較好；而采用無水乙醇提取的樣品，內(nèi)標(biāo)物水楊酸甲酯峰峰形前延，對(duì)稱度稍差，故確定采用乙醚索氏提取。且當(dāng)樣品提取至無色以后，延長(zhǎng)提取時(shí)間對(duì)β-欖香烯提取量影響較小?？梢?，樣品使用乙醚作溶劑，以索氏提取器提取至無色為宜。

表3 醋莪術(shù)飲片中β-欖香烯含量測(cè)定結(jié)果Tab 3 Content determination of β-elemene in Rhizoma Curcumae decoction pieces

本試驗(yàn)結(jié)果表明，3種不同來源的醋莪術(shù)飲片中，溫郁金中β-欖香烯的含量高于其它兩個(gè)產(chǎn)地樣品的含量。本方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，可為制定醋莪術(shù)飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)，同時(shí)對(duì)含莪術(shù)的中成藥制劑的質(zhì)量控制也有參考價(jià)值。

[1]謝永忠，夏 泉.高效液相色譜法測(cè)定莪術(shù)中吉馬酮的含量[J].中國(guó)藥房，2005，16（6）：461.

[2]王 琰，王慕鄒.姜黃屬常用中藥的研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2001，36（2）：80.

[3]戚愛棣.HPLC法測(cè)定姜黃、郁金、廣西莪術(shù)中姜黃素的含量[J].中草藥，2002，33（6）：510.

[4]國(guó)家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì).中華本草（第8卷）[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999：626.

[5]Liu MZ，He LR.Effect of hypoxic radiosensitizer sodium glycididazole on long-term result of radiotherapy for nasopharyngeal carcinoma[J].Zhonghua Zhong Liu Za Zhi，2006，28（12）：932.

[6]馮海紅，陸兔林，熊汝菊，等.氣相色譜法測(cè)定不同品種莪術(shù)中β-欖香烯的含量[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2008，27（2）：37.

Comparison of the Content ofβ-elemene in Rhizoma Curcumae Decoction Pieces from Different Habitats

JIANG Guo-fei，MAO Chun-qin，LU Tu-lin，XU Jia-jia（College of Pharmacy，Nanjing University of TCM，Nanjing 210046，China）

OBJECTIVE：To establish GC method for the content determination ofβ-elemene in Rhizoma Curcumae decoction pieces from different habitats.METHODS：The determination condition were as follows：HP-5 capillary column（30 m×0.53 mm×1.0 μm），methyl salicylate as the internal standard，itemperature programmng，F(xiàn)ID，splitless and injection volume of 1 μL.The temperature of gasification room was set at 240℃；the temperature of detecting room was set at 250℃.RESULTS：The linear range forβ-elemene was 0.015 07～0.150 70 μg（r＝0.999 6）with an average recovery of 96.13%（RSD＝1.37%，n＝9）.β-elemene took up relative high proprotion inCurcuma wenyujin.CONCLUSION：The method can be used for the content determination ofβ-elemene Rhizoma Curcumae in decoction pieces.

Rhizoma Curcumae decoction pieces；β-elemene；GC；Content determination

R284.1；R927.2

A

1001-0408（2010）39-3697-03

2009-10-08

2009-12-10）