元胡提取液3種純化方法的對比研究

魏舒暢，馮曉莉，張英明，金輝（.甘肅中醫(yī)學(xué)院，蘭州市 730000；.蘭州佛慈制藥有限公司，蘭州市 730000）

元胡提取液3種純化方法的對比研究

魏舒暢1＊，馮曉莉1，張英明2，金輝1（1.甘肅中醫(yī)學(xué)院，蘭州市 730000；2.蘭州佛慈制藥有限公司，蘭州市 730000）

目的：對比研究找到純化元胡提取液的最佳方法。方法：以除雜率、延胡索乙素保留率為評價指標(biāo)，并比較純化后樣品的物理性質(zhì)，用于評價超濾法、天然澄清劑法與乙醇沉淀法在元胡提取液純化工藝中的可行性。結(jié)果：超濾法除雜率高，所得樣品品質(zhì)最好。結(jié)論：采用超濾法純化元胡提取液最具可行性。

元胡；乙醇沉淀法；天然澄清劑；超濾

元胡為罌粟科植物延胡索Corydalis yanhusuoW.T.Wang的干燥塊莖，具有活血化瘀、行氣止痛之功效。在許多止痛類中藥制劑中，元胡常作為主要藥物被應(yīng)用。為減小該類制劑服用劑量、提高產(chǎn)品質(zhì)量，有必要對其純化工藝進(jìn)行深入研究。超濾技術(shù)用于中藥提取液純化，可通過濾過方式將分子量不同的物質(zhì)分離開來，具有工藝周期短、成分保留率高、成本低等優(yōu)點。筆者以除雜率、延胡索乙素[1]保留率和純化后樣品物理性質(zhì)為評價指標(biāo)，對3種方法純化元胡提取液的可行性進(jìn)行比較研究，旨在為元胡及其復(fù)方制劑的純化工藝提供參考資料。

1 儀器與材料

1.1 儀器

超濾裝置（海寧豐源過濾設(shè)備有限公司）；中空纖維超濾膜（分子截流量：6 000，海寧豐源過濾設(shè)備有限公司）；電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；真空抽濾泵（鄭州杜甫儀器廠）；真空干燥箱（上海益恒實驗儀器有限公司）；Agilent1100型高效液相色譜（HPLC）系統(tǒng)，包括二元泵、柱溫箱、檢測器、化學(xué)工作站（安捷倫科技有限公司）。

1.2 試藥

元胡，購于蘭州黃河藥市，經(jīng)甘肅中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科楊錫倉主任藥師鑒定為C.yanhusuoW.T.Wang的干燥塊莖；延胡索乙素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110726-200409）；ZTC1+1天然澄清劑（Ⅲ型，含A、B組分，北京正天澄清技術(shù)有限公司，批號：200709）；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品制備

2.1.1 提取液的制備[1]稱取粉碎的元胡粗顆粒（過2號篩）6 kg，均分為3份，每份2 kg。用1%醋酸為溶劑冷浸提取，第1份藥材每次用6倍量溶劑，提取24 h，共3次。收集第1次提取液Ⅰ；用第1份藥材的第2次提取液浸漬第2份藥材，收集提取液Ⅱ；用第1份藥材的第3次提取液第2次冷浸第2份藥材，收集提取液Ⅲ；用提取液Ⅲ浸泡第3份藥材，收集提取液Ⅳ；用6倍量1%醋酸為溶劑第3次浸泡第2份藥材，收集提取液Ⅴ；用提取液Ⅴ第2次浸泡第3份藥材，收集提取液Ⅵ；最后用6倍量的1%醋酸為溶劑第3次浸泡第3份藥材，收集提取液Ⅶ。將提取液Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ合并，混勻，抽濾除去不溶性雜質(zhì)，得混勻提取液，備用。依法制備3個平行樣品，每個樣品得提取液約50 L。

2.1.2 未純化樣品的制備 取“2.1.1”項下混勻提取液300 mL，密封保存；另取混勻提取液5 000 mL，常壓濃縮至稠膏狀（相對密度1.35），80℃真空干燥得未純化樣品干浸膏，稱重，備用。按下式計算出膏率：出膏率＝干浸膏質(zhì)量/藥材投料質(zhì)量×100%。

2.1.3 天然澄清劑樣品的制備 將ZTC1+1 A、B組分分別用水、1%醋酸配制成1%黏膠液。取“2.1.1”項下的混勻提取液10 L，加熱至80℃，分別按1.5B∶A（每100 mL藥液用1.5 mL B、1.0 mL A）的比例先加入組分B，邊加邊攪拌，使其均勻分散，保溫0.5 h后在60℃時加入組分A，邊加邊攪拌，保溫30 min，冷藏24 h，10 000 r·min-1離心10 min，分離沉淀物，取上清液300 mL密封保存，其余上清液常壓濃縮成稠膏后80℃真空干燥，備用。稱定干浸膏質(zhì)量，計算出膏率。

2.1.4 乙醇沉淀樣品的制備 取“2.1.1”項下混勻提取液10 L，濃縮至0.2 g（生藥）·mL-1，逐步加乙醇至60%，邊加邊攪拌，使其均勻分散，冷藏24 h，10 000 r·min-1離心10 min，分離沉淀物，上清液回收乙醇，取濃縮液180 mL，用1%醋酸稀釋至300 mL，密封保存，其余濃縮液繼續(xù)濃縮成稠膏后80℃真空干燥，備用。稱定干浸膏質(zhì)量，計算出膏率。

2.1.5 超濾樣品的制備[2]取“2.1.1”項下混勻提取液20 L，選用分子截流量為6 000的中空纖維超濾膜，在25℃、0.05～0.10 MPa壓力條件下超濾，收集超濾液，取出300 mL超濾液密封保存，其余超濾液濃縮至稠膏狀后80℃真空干燥，備用。稱定干浸膏質(zhì)量，計算出膏率。

2.2 樣品中延胡索乙素的含量測定[3]

2.2.1 色譜條件 色譜柱：BDS（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-0.1%磷酸溶液（三乙胺調(diào)pH 6.0）＝55∶45；檢測波長：280 nm；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：20 ℃。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取延胡索乙素對照品1.2 mg，置于25 mL容量瓶中，甲醇定容，搖勻，濾過，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 分別精密稱取“2.1.2”、“2.1.3”、“2.1.4”、“2.1.5”項下的干浸膏約0.5 g，分別置于100 mL容量瓶中，加甲醇-0.1%磷酸（55∶45）定容，搖勻，濾過，即得。

2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 取“2.2.2”項下對照品溶液適量，按上述色譜條件分別進(jìn)樣2.5、5.0、10.0、15.0、20.0 μL。以延胡索乙素進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y＝3.331×10-7X+1.473×10-4（r＝0.999 7）。結(jié)果表明，延胡索乙素進(jìn)樣量在0.12～0.96 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

2.2.5 精密度試驗 精密吸取濃度為48 μg·mL-1的對照品溶液10 μL，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，測定。結(jié)果，RSD＝2.24%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.2.6 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的樣品6份，每份約0.5 g，分別精密加入對照品1.2、1.2、1.5、1.5、1.8、1.8 mg，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定，計算加樣回收率。結(jié)果，平均回收率為98.83%，RSD＝1.78%（n＝6）。

2.2.7 樣品含量測定 精密吸取供試品溶液10 μL，分別按上述色譜條件測定延胡索乙素含量，并折算6 kg藥材中延胡索乙素的總量及保留率。

2.3 評價指標(biāo)的計算

以除雜率和延胡索乙素保留率為評價指標(biāo)，相關(guān)計算公式如下：延胡索乙素總量＝總藥材量（6 kg）×出膏率×樣品含量；延胡索乙索保留率＝未純化樣品的延胡索乙素總量/純化樣品的延胡索乙素總量×100%；除雜率＝（未純化樣品出膏率－純化樣品出膏率）/未純化樣品出膏率×100%。延胡索乙素保留率和除雜率測定結(jié)果見表1。

2.4 物理性質(zhì)比較

2.4.1 液體樣品澄明度比較 將元胡提取液未純化樣品、天然澄清劑樣品、乙醇沉淀樣品、超濾樣品各取300 mL封裝于輸液瓶中，于40℃曝光保存3個月，觀察各樣品的澄明度。

2.4.2 固體樣品復(fù)溶性比較 將元胡提取液未純化樣品、天然澄清劑樣品、乙醇沉淀樣品、超濾樣品加去離子水，在室溫下重新溶解為濃度為0.12 g（生藥）·mL-1的溶液，考察其復(fù)溶性。

表1 延胡索乙素保留率及除雜率測定結(jié)果Tab 1 Retention rate of corydalis B and the rate of removed impurity

2.4.3 固體樣品吸潮性比較 將元胡提取液未純化樣品、天然澄清劑樣品、乙醇沉淀樣品、超濾樣品各取5.0 g，裝入開口的容器，置于恒溫恒濕箱中，25℃下逐步提高相對濕度，測定4種浸膏的臨界相對濕度（CRH）。

各樣品物理性質(zhì)比較結(jié)果見表2。

表2 各樣品物理性質(zhì)比較結(jié)果Tab 2 Comparison of physical character of every sample

由表1、表2可知，應(yīng)用超濾法純化元胡提取液與乙醇沉淀法、天然澄清劑法相比，有效成分損失基本相當(dāng)，但雜質(zhì)去除效果最好，除雜率達(dá)到30%以上；超濾樣品經(jīng)留樣觀察90 d后發(fā)現(xiàn)，其澄明度遠(yuǎn)高于乙醇沉淀樣品；超濾樣品的復(fù)溶性在3種樣品中最好，吸潮性最弱，所得樣品品質(zhì)最好，適用于制備固體及液體各類制劑。故采用超濾法純化元胡提取液最具可行性。

3 討論

天然澄清劑法的除雜率及所得樣品的復(fù)溶性、吸潮性雖不及超濾樣品，但液體樣品的澄明度很好，而且純化成本最低，適用于服用劑量較小的液體制劑。

乙醇沉淀法的生產(chǎn)周期長、成本高，經(jīng)預(yù)算純化費用約為超濾法的6倍以上，在延胡索乙素保留率基本相同的情況下，乙醇沉淀法不值得提倡使用。

由于中藥的化學(xué)成分復(fù)雜，造成的膜污染問題使膜的通量下降太快。筆者采用表面活性劑對超濾膜進(jìn)行動態(tài)改性，較好地解決了這一問題，相關(guān)內(nèi)容將另文發(fā)表。

[1]楊 云，馮衛(wèi)生.中草藥化學(xué)成分提取分離手冊[M].北京：中國中醫(yī)藥出版社，1998：149.

[2]華耀祖.超濾技術(shù)與應(yīng)用[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2004：184.

[3]陳德利，馬 霖，曹 玉，等.HPLC法測定蒲元胃康膠囊中延胡索乙素的含量[J].中國藥房，2009，20（9）：690.

Comparative Study on the 3 Kinds of Purification Processes for the Extract ofCorydalis yanhusuo

WEI Shu-chang，F(xiàn)ENG Xiao-li，JIN Hui（Gansu College of Traditional Chinese Medicine，Lanzhou 730000，China）
ZHANG Ying-ming（Lanzhou Foci Pharmaceutical Co.，Ltd.，Lanzhou 730000，China）

OBJECTIVE：To optimize the purification process for the extract ofCorydalis yanhusuoby comparative study.METHODS：The feasibility of 3 kinds of purification processes（ultrafiltration，ethanol precipitation and natural clarifier）was evaluated by comparing the physical character of purified samples with using the retention rate of corydalis B and the rate of removed impurity as index.RESULTS：The rate of removed impurity was the highest and the quality of samples was the best by ultrafiltration method among 3 kinds of methods.CONCLUSION：Ultrafiltration is the best purification process for the extract ofC.yanhusuo.

Corydalis yanhusuo；Ethanol precipitation；Natural clarifier；Ultrafiltration

R284.2；R283

A

1001-0408（2010）39-3691-02

＊副教授，碩士。研究方向：中藥制劑新技術(shù)、新劑型。電話：0931-8765391。E-mail：wshch006@sina.com

2009-10-30

2010-02-22）