組胺H3受體拮抗劑對(duì)嗎啡成癮大鼠復(fù)吸行為的影響

曲 偉 ，羅 雄 ，李學(xué)英 ，陳麗紅 ，王大忠

（1.德州學(xué)院 山東 德州253000；2.遵義醫(yī)學(xué)院 貴州 遵義563000；3.湘南學(xué)院 湖南 郴州423000）

藥品毒品成癮在許多國(guó)家流行成災(zāi)，危害身心健康，破壞家庭幸福，并且引發(fā)犯罪；而且吸毒人群已成為愛滋病及肝炎等傳染病的重要傳播源。成癮性物質(zhì)分為麻醉藥品、精神藥品及其他（煙草和酒精等）。其中麻醉藥品又可分為阿片類（鴉片、嗎啡、海洛因等）、大麻類和可卡因類（古可卡、可卡因）等。在我國(guó)，以吸食阿片類物質(zhì)最多見。實(shí)際戒毒工作中的兩個(gè)主要問題是患者在脫毒階段難以忍受的痛苦及脫毒后的高復(fù)吸率。因而，常出現(xiàn)以下兩種情況，一方面患者不愿堅(jiān)持戒毒，另一方面患者陷入吸毒→戒毒→脫毒→再吸毒（復(fù)吸）的惡性循環(huán)中。藥物成癮機(jī)制是一個(gè)涉及多層次、多通路、多因素的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)。自從發(fā)現(xiàn)組胺H3受體與藥物成癮有關(guān)以來，國(guó)內(nèi)外的研究組織投入了廣泛關(guān)注。對(duì)組胺H3受體與藥物依賴（成癮）之間的關(guān)系的初步探索研究，主要采用在動(dòng)物（大鼠或小鼠）的皮下或側(cè)腦室內(nèi)注射H3受體拮抗劑或激動(dòng)劑方法，觀察其對(duì)動(dòng)物的成癮行為的影響，發(fā)現(xiàn)H3受體與藥物成癮之間有著密切的關(guān)系。但是對(duì)其在復(fù)吸行為中的作用及其作用的機(jī)制，還未弄清楚。本文利用CPP法對(duì)組胺H3受體拮抗劑在嗎啡成癮大鼠復(fù)吸行為中的影響作出研究。

1 材料與方法

1.1 材料 清潔級(jí)SD雄性大鼠購(gòu)自第三軍醫(yī)大學(xué)野戰(zhàn)外科動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，鹽酸嗎啡購(gòu)自沈陽(yáng)第一制藥廠，生理鹽水購(gòu)自華美生物工程有限公司，組胺H3受體拮抗劑購(gòu)自Sigma公司，位置偏愛箱（黑白箱）自制，攝像頭聯(lián)想E360，電腦IBMR52-1840。

1.2 方法

1.2.1 嗎啡成癮大鼠復(fù)吸模型的建立和分組 采用嗎啡頸部皮下注射法建立嗎啡成癮大鼠復(fù)吸模型。大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，觀察無異常行為后開始進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。隨機(jī)分成4組：組胺H3受體拮抗劑低劑量組、中劑量組、高劑量組、生理鹽水對(duì)照組。遞增法皮下注射嗎啡：每天 2次（8：00AM，5：00PM）頸部皮下注射嗎啡；第1天劑量為10mg/kg，每天增加10mg/kg，至第5天為50mg/kg。并且于每次注射嗎啡后立即將其放于白箱中（通道已關(guān)閉）訓(xùn)練40min。然后，自然戒斷 48小時(shí)：每天 2次（8：00AM，5：00PM）于大鼠頸部皮下注射生理鹽水1mL后，立即將其于黑白箱（通道已開通）中訓(xùn)練40min，共2d（48h）。末次注射生理鹽水后，立即放入位置偏愛箱中，觀察記錄15min內(nèi)大鼠在黑/白箱中分別停留的累積時(shí)間。于戒斷后第20天，末次注射生理鹽水后，觀察記錄15min內(nèi)在黑/白箱中分別停留的累積時(shí)間。

1.2.2 藥物干預(yù) 組胺H3受體拮抗劑低劑量組于自然戒斷的第21天，皮下注射組胺受體拮抗劑（5mg/kg），30min注射嗎啡，然后放入黑白箱中。觀察記錄15min內(nèi)在黑/白箱中分別停留的累積時(shí)間。組胺H3受體拮抗劑中劑量組于自然戒斷的第21天，皮下注射組胺受體拮抗劑（10mg/kg），30分鐘注射嗎啡，然后放入黑白箱中。觀察記錄15min內(nèi)在黑/白箱中分別停留的累積時(shí)間。組胺H3受體拮抗劑高劑量組于自然戒斷的第21天，皮下注射組胺受體拮抗劑（20mg/kg），30min注射嗎啡，然后放入黑白箱中。觀察記錄15min內(nèi)在黑/白箱中分別停留的累積時(shí)間。生理鹽水對(duì)照組于自然戒斷的第21天，皮下注射生理鹽水1mL，30min注射嗎啡，然后放入黑白箱中。觀察記錄15min內(nèi)在黑/白箱中分別停留的累積時(shí)間。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS12.0軟件，計(jì)量資料以均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，將處于組胺H3受體拮抗劑低、中、高劑量組與生理鹽水對(duì)照組的大鼠在白箱和黑箱中停留的時(shí)間進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同時(shí)相的組胺H3受體拮抗劑低劑量組大鼠在黑箱和白箱中的停留時(shí)間 見表1：

表1 不同時(shí)相的組胺H3受體拮抗劑低劑量組大鼠在白箱和黑箱中停留的時(shí)間（±s）

表1 不同時(shí)相的組胺H3受體拮抗劑低劑量組大鼠在白箱和黑箱中停留的時(shí)間（±s）

說明：*P＜0.01 vs黑箱時(shí)間

?

根據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果,可以認(rèn)為：①組胺H3受體拮抗劑低劑量組大鼠均無自然偏愛，（P＞0.05）；②大鼠在戒斷嗎啡48小時(shí)后，表現(xiàn)出明顯偏愛于白箱，(P＜0.01)，說明已對(duì)嗎啡形成依賴。③大鼠在經(jīng)過15天的戒斷后，無位置偏愛表現(xiàn)（P＞0.05），說明已脫毒；④在注射拮抗劑（5mg/kg）后經(jīng)嗎啡點(diǎn)燃，又表現(xiàn)出明顯偏愛于白箱（P＜0.01），已復(fù)吸。說明低劑量拮抗劑對(duì)大鼠復(fù)吸無明顯影響。

2.2 不同時(shí)相的組胺H3受體拮抗劑中劑量組大鼠在黑箱和白箱中的停留時(shí)間 見表2：

根據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果,可以認(rèn)為：①組胺H3受體拮抗劑中劑量組大鼠均無自然偏愛（P＞0.05）；②大鼠在戒斷嗎啡48小時(shí)后，均表現(xiàn)出明顯偏愛于白箱（P＜0.01），說明已對(duì)嗎啡形成依賴；③大鼠在經(jīng)過15天的戒斷后，無位置偏愛（P＞0.05），說明已脫毒；④大鼠在注射拮抗劑（10mg/kg）后經(jīng)嗎啡點(diǎn)燃，又表現(xiàn)出明顯偏愛于白箱（P＜0.01），已復(fù)吸。說明中劑量拮抗劑對(duì)大鼠復(fù)吸無明顯影響。

表2 不同時(shí)相的組胺H3受體拮抗劑中劑量大鼠在黑箱和白箱中的停留時(shí)間（±s）

表2 不同時(shí)相的組胺H3受體拮抗劑中劑量大鼠在黑箱和白箱中的停留時(shí)間（±s）

說明：*P＜0.01 vs黑箱時(shí)間

?

2.3 不同時(shí)相的組胺H3受體拮抗劑高劑量組大鼠在黑箱和白箱中的停留時(shí)間 見表3：

表3 不同時(shí)相的組胺H3受體拮抗劑高劑量組大鼠在白箱和黑箱中停留的時(shí)間（±s）

表3 不同時(shí)相的組胺H3受體拮抗劑高劑量組大鼠在白箱和黑箱中停留的時(shí)間（±s）

說明：*P＜0.01，vs黑箱時(shí)間

?

根據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果,可以認(rèn)為:①組胺H3受體拮抗劑高劑量組大鼠均無自然偏愛（P＞0.05）；②大鼠在戒斷嗎啡48小時(shí)后，均表現(xiàn)出明顯偏愛于白箱（P＜0.01），說明其已對(duì)嗎啡形成依賴；③大鼠在經(jīng)過15天的戒斷后，無位置偏愛表現(xiàn)（P＞0.05），說明已脫毒；④大鼠在注射拮抗劑（20mg/kg）后經(jīng)嗎啡點(diǎn)燃后，無明顯偏愛表現(xiàn)（P＞0.05），說明高劑量的拮抗劑影響大鼠的復(fù)吸。

2.4 不同時(shí)相的生理鹽水對(duì)照組大鼠在黑箱和白箱中的停留時(shí)間 見表4：

表4 不同時(shí)相生理鹽水組大鼠的黑箱和白箱時(shí)間（±s）

表4 不同時(shí)相生理鹽水組大鼠的黑箱和白箱時(shí)間（±s）

說明：*P＜0.01 vs黑箱時(shí)間

?

根據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果,可以認(rèn)為：①生理鹽水對(duì)照組大鼠均無自然偏愛（P＞0.05）；②大鼠在戒斷嗎啡48小時(shí)后，均表現(xiàn)出明顯偏愛于白箱（P＜0.01），說明已對(duì)嗎啡形成依賴；③大鼠在經(jīng)過15天的自然戒斷后，無位置偏愛表現(xiàn)（P＞0.05），說明其已脫毒；④大鼠在注射生理鹽水后經(jīng)嗎啡點(diǎn)燃后，又表現(xiàn)出明顯偏愛于白箱（P＜0.01），說明其已復(fù)吸。

3 討論

目前，評(píng)價(jià)大鼠藥物依賴的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，主要有：身體依賴評(píng)價(jià)模型和精神依賴評(píng)價(jià)模型，后者又分為：大鼠條件性位置偏愛實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?、大鼠自身給藥實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ秃痛笫笏幬锉鎰e實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?/p>

本實(shí)驗(yàn)采用大鼠條件性位置偏愛實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停搶?shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷膶?shí)施，受多種因素的影響。如：①環(huán)境因素，包括噪音、燈光、特殊氣味等，②動(dòng)物的種屬、生理狀態(tài)等。因而，采用該模型時(shí)，必須保持實(shí)驗(yàn)條件的一致性[1]。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為購(gòu)自第三軍醫(yī)大學(xué)野戰(zhàn)外科動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心的清潔級(jí)雄性SD大鼠，實(shí)驗(yàn)開始時(shí)每組準(zhǔn)備了12只大鼠，共60只，體重150~200mg/只，環(huán)境溫度相對(duì)穩(wěn)定，自然光照與通風(fēng)，自由飲水、進(jìn)食等條件下喂養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)過程中，出現(xiàn)死亡和生理狀況異常的大鼠均予剔除，不進(jìn)入統(tǒng)計(jì)范疇。實(shí)驗(yàn)時(shí)大鼠都置于無明顯噪音，光線柔和穩(wěn)定，無特殊氣味的黑/白箱中，因而認(rèn)為，所得實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠。結(jié)合統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果可以認(rèn)為：各時(shí)相模型建立成功。

組胺H3受體主要分布于腦組織。在前額葉皮質(zhì)、伏核、海馬、紋狀體等處組胺H3受體都有分布[2]。組胺H3受體是一種膜受體，通過G蛋白作用于Ca2+通道，減少Ca2+內(nèi)流，并負(fù)性調(diào)節(jié)AC的活性，降低細(xì)胞內(nèi)cAMP水平，抑制神經(jīng)遞質(zhì)的合成與釋放[3~5]。組胺H3受體可位于突觸前，也可位于突觸后。它既是一種自身受體，位于組胺能神經(jīng)元末梢，抑制組胺的合成與釋放；又是一種異源性受體，位于其他神經(jīng)元上，抑制包括乙酰膽堿（Ach）、5-羥色胺（5-HT）、多巴胺（DA）、γ-氨基丁酸（GABA）及谷氨酸（Glu）等在內(nèi)的多種神經(jīng)遞質(zhì)的合成與釋放[6]。

國(guó)外一些科學(xué)家發(fā)現(xiàn)組胺H3受體激動(dòng)劑可以增強(qiáng)酒精依賴大鼠對(duì)酒精的偏愛，而拮抗劑可以減弱酒精依賴大鼠對(duì)酒精的偏愛[7]；Steven R Goldberg等[8]發(fā)現(xiàn)組胺H3受體拮抗劑增加MAP誘導(dǎo)的伏核的DA的釋放；Carmen P,Cano MV等[9]報(bào)道大劑量組胺H3受體拮抗劑THIO減弱大鼠對(duì)嗎啡的偏愛，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相似。

本實(shí)驗(yàn)通過CPP法發(fā)現(xiàn)高劑量的組胺H3受體拮抗劑（20mg/kg）在嗎啡成癮大鼠復(fù)吸時(shí)減弱了大鼠對(duì)伴藥箱（白箱）的偏愛。

目前藥物成癮的生物學(xué)機(jī)制尚未闡明，成癮者的臨床療效不佳，復(fù)吸率一直居高不下，嚴(yán)重阻礙成癮者回歸社會(huì),走向正常生活。如能對(duì)藥物戒斷后的厭惡以及相應(yīng)的負(fù)性強(qiáng)化過程的生物學(xué)機(jī)制進(jìn)行深入的研究，必將進(jìn)一步豐富藥物成癮的理論。

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