HPLC法測定丹參中原兒茶醛的含量

魏桂芳 王漢平 楊志靈 西安市紅十字會醫(yī)院藥劑科(西安 71000)

丹參為唇形科 (Labiatae)植物丹參 (Salvia miltiorrhiza Bge)的干燥根及根莖。丹參的水溶性部分有丹參素、丹酚酸 A、丹酚酸 B、原兒茶醛、原兒茶酸、咖啡酸等。其中原兒茶醛易溶于水、乙醇、甲醇、乙酸乙酯等,是丹參中起活血化瘀作用的有效成分之一,具有增加冠脈流量,降低心肌興奮性和傳導性,對急性心肌缺血缺氧所致的心肌損傷具有明顯保護作用,具有抑制血小板聚集作用和廣譜抗菌抗炎作用[1]。為有效控制藥材質(zhì)量,本實驗建立了 HPLC法測定丹參中原兒茶醛含量的方法[2]。該方法操作簡便,快速,準確,重現(xiàn)性好,可用于中藥丹參的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥 1.1 儀器美國 waters 515高效液相色譜儀,waters 2487雙波長紫外檢測器,浙大智達色譜處理工作站;賽多利斯 BP-211D萬分之一電子天平;KQ-250DB超聲處理儀。

1.2 試劑甲醇為色譜純,水為樂百氏 550mm瓶裝純凈水,其它試劑均為分析純;對照品原兒茶醛(批號:110810-200506)購自中國藥品生物制品檢定所;藥材丹參采自漢中南鄭,漢王藥業(yè)化驗室陳菲鑒定。

2 實驗方法與結果 2.1 色譜條件色譜柱:Ultimate XB-C18,5 μ m,4.6× 250mm 柱 ,流動相為甲醇 -水-甲酸 (13:86.5:0.5),流速為 1.0 mL/min,檢測波長為 280nm;柱溫:30℃;理論塔板數(shù)按原兒茶醛峰計算應不低于 3000。

2.2 對照品溶液的制備精密稱取原兒茶對照品適量,加甲醇制成每 1mL含 30μ g的溶液,即得。

2.3 供試品溶液的制備 取丹參藥材,60℃干燥5h,粉碎成細粉,精密稱取約 0.7g,置 100mL具塞錐形瓶中,精密加入甲醇 50mL,稱定重量,回流 60min,放冷,再精密稱定,用水補足減失的重量。離心沉淀10min,精密量取上清液 20m L,用鹽酸調(diào)至 pH為 2.0,用乙酸乙酯提取 3次,每次 20mL,合并乙酸乙酯液,在水浴上蒸干,殘渣用甲醇溶解,并轉(zhuǎn)移至 10mL量瓶中,稀釋至刻度,搖勻,微孔濾膜 (0.45μ m)過濾,即得。

2.4 線性關系考察分別精密吸取對照品溶液 1、2、4、6、 8、10μL進樣 ,以進樣量為橫坐標 ,峰面積為縱坐標作圖,得回歸方程 y=114000x+21.8,r=0.9991。原兒茶醛在 0.03～0.30 μL的進樣范圍內(nèi)具有良好的線性關系。

2.5 進樣精密度試驗精密吸取對照品溶液 10 μL,連續(xù)進樣 6次,測定峰面積,求得 RSD值為 1.06%。

2.6 樣品測定精密吸取樣品溶液 10μL,連續(xù)進樣 3次,用外標法計算,測定原兒茶醛含量,計算平均含量和 RSD值。5批樣品的測定結果見表 1。色譜圖見圖2。

2.7 重復性試驗取樣品溶液 10μL,連續(xù)進樣 6次,測定峰面積,求得 RSD值為 1.24%。

2.8 穩(wěn)定性試驗精密吸取樣品溶液 10μL,在2、4、6、 8、10h測定 ,峰面積的 RSD=1.46%。

2.9 回收率試驗精密稱取已測知含量的丹參細粉適量,加入定量的原兒茶醛對照品,按 2.2項下操作,測定原兒茶醛含量,計算回收率,平均回收率為99.05%,RSD=0.4%(n=6),表明本品具有良好的回收率[3],結果見表 2。

表1 丹參中原兒茶醛含量測定試驗結果

表2 原兒茶醛回收率試驗結果

3 討 論 3.1 經(jīng)不同品牌的 C18色譜柱對多批樣品進行反復測試,證明本法的重現(xiàn)性較好,故可用于丹參的含量測定。

3.2 曾嘗試過用甲醇、乙醇、稀鹽酸進行提取,回收率均較低。

3.3 溫度對出峰時間及分離效果影響不大,故可在室溫下進行測定。

3.4 試驗所測 5批樣品的原兒茶醛含量在 0.05%～0.10%之間,由于樣品來源有限,對不同產(chǎn)地藥材含量的系統(tǒng)研究尚待以后進行。

[1]陰 健,郭力弓.中藥現(xiàn)代研究與臨床應用 [M].北京:學苑出版社,1993:171-185.

[3]韓艷萍,劉永忠.寧心安神膠囊中原兒茶醛的含量測定 [J].陜西中醫(yī),2004,31(7):646.