• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    法夫酵母產(chǎn)新科斯糖的發(fā)酵條件

    2010-08-27 11:13:06寧亞維張靜娟蘇丁楊哪徐學明
    食品與生物技術學報 2010年3期
    關鍵詞:科斯果糖蔗糖

    寧亞維, 張靜娟, 蘇丁, 楊哪, 徐學明

    (1.食品科學與技術國家重點實驗室,江南大學,江蘇無錫 214122;2.江南大學食品學院,江蘇無錫 214122)

    法夫酵母產(chǎn)新科斯糖的發(fā)酵條件

    寧亞維1,2, 張靜娟2, 蘇丁2, 楊哪2, 徐學明1,2

    (1.食品科學與技術國家重點實驗室,江南大學,江蘇無錫 214122;2.江南大學食品學院,江蘇無錫 214122)

    通過單因素實驗及正交試驗對法夫酵母搖床發(fā)酵產(chǎn)新科斯糖的培養(yǎng)基組成和培養(yǎng)條件進行優(yōu)化,得出該菌株產(chǎn)新科斯糖的最佳發(fā)酵條件為:蔗糖110 g/L,玉米漿粉8 g/L,種齡48 h,接種體積分數(shù)10%,發(fā)酵周期24 h,初始p H 6.5,搖床轉(zhuǎn)速220 r/min,發(fā)酵溫度18℃。經(jīng)優(yōu)化后新科斯糖產(chǎn)量最高可達73.2 g/L,蔗糖利用率為66.5%,比優(yōu)化前發(fā)酵效率提高了87.1%。

    法夫酵母;新科斯糖;蔗糖;搖瓶發(fā)酵

    蔗果低聚糖(Fructooligosaccharides,FOS),又稱寡果糖或低聚果糖,廣泛存在于天然水果和蔬菜中,不僅口感良好,而且具有優(yōu)良的生理功能。它能促進腸道雙歧桿菌增殖,調(diào)節(jié)腸道菌群平衡,改善和調(diào)節(jié)腸道功能,防治便秘和腹瀉;另外,具有低能量或無能量、預防齲齒、降低血清膽固醇、降低血脂和血壓等功效[1]。由此,FOS是一種國際上公認的功能性養(yǎng)生食品和新型糖源,在食品、飼料、醫(yī)藥、保健品等行業(yè)應用廣泛[2]。目前工業(yè)上主要利用黑曲霉Aspergillus niger[3],青霉Penicillium citrinum[4],運動單胞菌Zymomonas mobilis[5],乳桿菌L actobacillus reutri[6]等來生產(chǎn)低聚果糖。由于大多數(shù)酵母所產(chǎn)的果糖苷酶具有很強的水解能力,最終又將合成的低聚果糖水解,導致低聚果糖產(chǎn)量甚少[7],因此目前對于酵母產(chǎn)低聚果糖的研究較少。

    新科斯糖(neokestose)是一種蔗果三糖族低聚糖,由果糖基C-2與蔗糖分子中的葡萄糖基C-6位相連所得。它可由法夫酵母(Xanthophyllomyces dendrorhous)發(fā)酵來生產(chǎn)。目前國內(nèi)外對法夫酵母的研究主要集中于蝦青素的發(fā)酵生產(chǎn)上,如高產(chǎn)蝦青素菌株選育[8]、發(fā)酵工藝研究[9]、色素提取[10]、色素穩(wěn)定性[11]及蝦青素的功能特性[12]等,且已能實現(xiàn)規(guī)模化生產(chǎn)。而以法夫酵母為出發(fā)菌株,蔗糖為碳源進行發(fā)酵產(chǎn)新科斯糖的研究則鮮為報道,Kilian等人[13]發(fā)現(xiàn)法夫酵母在以蔗糖為碳源的培養(yǎng)基上生長時能積累新科斯糖,國內(nèi)江南大學利用法夫酵母生產(chǎn)新科斯糖的方法已獲國家發(fā)明專利授權[14],蘇丁[15]對法夫酵母所產(chǎn)新科斯糖的結(jié)構進行了鑒定。作者主要就法夫酵母產(chǎn)新科斯糖的發(fā)酵條件進行了研究。

    1 材料與方法

    1.1 實驗材料

    菌株:法夫酵母269,作者所在實驗室選育[8]。

    培養(yǎng)基(g/L):種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基見文獻[14]。

    主要試劑:新科斯糖標準品為作者所在實驗室制備[15],蔗糖等其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

    1.2 實驗方法

    1.2.1 種子培養(yǎng) 從斜面上挑一環(huán)菌,接入裝有25 mL種子培養(yǎng)基的250 mL三角瓶中,22℃、220 r/min培養(yǎng)48 h作為種子液。

    1.2.2 搖瓶發(fā)酵 將種子培養(yǎng)液以體積分數(shù)5%接入發(fā)酵培養(yǎng)基,搖床轉(zhuǎn)速220 r/min,22℃發(fā)酵32 h。

    1.2.3 分析方法

    1)新科斯糖的測定:HPLC為島津LC-20A。色譜柱為Waters Sugarpak1,6.5 mmid×300 mm;流動相為超純水;流速為0.5 mL/min;檢測器為示差折光檢測器;進樣體積為10μL。

    2)生物量的測定:干重法測定[16]。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化

    2.1.1 蔗糖質(zhì)量濃度對發(fā)酵生產(chǎn)新科斯糖的影響

    碳源是構成菌體和合成新科斯糖的底物來源。通常作為碳源的物質(zhì),主要是各種糖類,淀粉等。根據(jù)文獻[17]報道,碳源除了蔗糖外,葡萄糖、果糖、淀粉等均對果糖基轉(zhuǎn)移酶活性不利。蔗糖既是酶作用的底物又是一種誘導物,故選擇蔗糖作為發(fā)酵產(chǎn)糖的惟一碳源。

    以5.22 g/L酵母膏為氮源,蔗糖質(zhì)量濃度設置為70、90、110、130、150 g/L 5個水平進行比較,在22℃、220 r/min發(fā)酵32 h,結(jié)果見圖1。

    圖1 蔗糖質(zhì)量濃度對法夫酵母產(chǎn)糖的影響Fig.1 Effect of sucrose concentration on the neokestose production byXanthophyllomyces dendrorhous

    由圖1可以看出,隨著蔗糖質(zhì)量濃度增加,新科斯糖質(zhì)量濃度呈一定的上升趨勢,但糖利用率隨糖質(zhì)量濃度的增加而降低。綜合考慮所得新科斯糖產(chǎn)量和蔗糖轉(zhuǎn)化率,選取蔗糖質(zhì)量濃度為110 g/L進行搖瓶發(fā)酵。

    2.1.2 氮源對發(fā)酵生產(chǎn)新科斯糖的影響 以110 g/L蔗糖為碳源,分別用等摩爾量的不同氮源取代酵母膏,在22℃、220 r/min下發(fā)酵32 h,結(jié)果見圖2。

    由圖2可知,當利用玉米漿粉作為發(fā)酵氮源時,菌體生長較好且新科斯糖產(chǎn)量最高,這與徐學明[16]等的研究結(jié)果相一致。玉米漿粉(或玉米漿)能顯著促進法夫酵母生長。玉米漿粉除含有豐富的可溶蛋白質(zhì)、生長素等為菌體生長繁殖提供營養(yǎng)外,還可能含有果糖苷酶合成的前體物質(zhì)。同時若采用玉米漿粉做氮源不僅有利于產(chǎn)物合成,而且還可在一定程度上降低發(fā)酵成本。因此作者選取玉米漿粉作為發(fā)酵培養(yǎng)基氮源。

    圖2 氮源對法夫酵母產(chǎn)糖的影響Fig.2 Effect of nitrogen sources on the neokestose production byXanthophyllomyces dendrorhous

    2.1.3 玉米漿粉質(zhì)量濃度對發(fā)酵生產(chǎn)新科斯糖的影響 蔗糖110 g/L,配制玉米漿粉濃度分別為2、4、6、8、10 g/L的培養(yǎng)基,在22℃、220 r/min下發(fā)酵32 h后測定新科斯糖產(chǎn)量和生物量,結(jié)果見圖3。

    圖3 玉米漿粉質(zhì)量濃度對法夫酵母產(chǎn)糖的影響Fig.3 Effect of corn syrup powder concentration on the neokestoseproductionbyXanthophyllomyces dendrorhous

    圖3表明,適當提高玉米漿粉質(zhì)量濃度可提高新科斯糖產(chǎn)量,但玉米漿粉質(zhì)量濃度大于8 g/L時,由于氮源過多導致菌體生長過旺,使底物蔗糖過早耗盡,從而使得新科斯糖的合成受到抑制。

    2.2 發(fā)酵條件的優(yōu)化

    2.2.1 接種體積分數(shù)對法夫酵母產(chǎn)新科斯糖的影響 分別以體積分數(shù)2%、4%、6%、8%、10%、12%的接種量在25 mL/250 mL發(fā)酵培養(yǎng)基中接入種子液,32 h后測定其新科斯糖產(chǎn)量及生物量,結(jié)果見圖4。

    圖4 接種體積分數(shù)對法夫酵母產(chǎn)糖的影響Fig.4 Effect of inoculum concentration on the neokestose production byXanthophyllomyces dendrorhous

    由圖4可知,接種體積分數(shù)為10%時,新科斯糖產(chǎn)量最高。隨著接種體積分數(shù)的增加,新科斯糖產(chǎn)量也隨之增大,但當接種體積分數(shù)大于10%時,新科斯糖產(chǎn)量開始降低。這表明較大的接種體積分數(shù)可以縮短發(fā)酵周期,減少雜菌的生長機會;但接種體積分數(shù)過高則引起溶氧不足,最終導致新科斯糖產(chǎn)量降低。Chien[18]等在用固定化Aspergillus japonicus生產(chǎn)低聚果糖時也有類似的發(fā)現(xiàn)。

    2.2.2 初始p H值對法夫酵母產(chǎn)新科斯糖的影響

    蔗糖110 g/L,玉米漿粉為8 g/L,配制p H分別為3.0、4.0、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0的培養(yǎng)基,22℃、220 r/min下發(fā)酵32 h后測定其新科斯糖產(chǎn)量及生物量,結(jié)果見圖5。

    初始p H值對法夫酵母產(chǎn)糖影響較大。p H值在5~8范圍內(nèi)時新科斯糖產(chǎn)量均較高。這一結(jié)果表明,法夫酵母所產(chǎn)果糖基轉(zhuǎn)移酶的最適p H值接近中性,與kilian[19]的研究一致。

    圖5 初始pH值對法夫酵母產(chǎn)糖的影響Fig.5 Effect of initial pH on the neokestose production byXanthophyllomyces dendrorhous

    2.2.3 發(fā)酵溫度對法夫酵母產(chǎn)新科斯糖的影響蔗糖110 g/L,玉米漿粉8 g/L,p H 6.0,溫度分別設置為18、20、22、24、28、32℃,在220 r/min的轉(zhuǎn)速下發(fā)酵32 h后測定新科斯糖產(chǎn)量及生物量。

    圖6 發(fā)酵溫度對法夫酵母產(chǎn)糖的影響Fig.6 Effect of temperature on the neokestose production byXanthophyllomyces dendrorhous

    由圖6可知,法夫酵母發(fā)酵產(chǎn)新科斯糖在培養(yǎng)溫度為20℃時效果最好,新科斯糖產(chǎn)量最高,這與徐學明等[16]的研究結(jié)果一致,法夫酵母的發(fā)酵溫度較低,在16~22℃范圍內(nèi)生長較好。

    2.2.4 發(fā)酵時間對發(fā)酵生產(chǎn)新科斯糖的影響 以體積分數(shù)10%接種量將種子培養(yǎng)基接入上述已優(yōu)化的發(fā)酵培養(yǎng)基,發(fā)酵4、8、12、16、24、36、48、72 h后分別測定新科斯糖產(chǎn)量及生物量,結(jié)果見圖7。

    圖7 法夫酵母發(fā)酵進程曲線Fig.7 The time-course of the neokestose production byXanthophyllomyces dendrorhous

    圖7進程曲線表明,前12 h時酵母迅速利用蔗糖,新科斯糖迅速積累,到24 h時,新科斯糖產(chǎn)量達到最高,以后各糖質(zhì)量濃度基本保持不變,因此確定發(fā)酵時間為24 h。

    2.2.5 種齡對法夫酵母產(chǎn)新科斯糖的影響 適宜種齡菌體接種可以縮短發(fā)酵周期,同時種齡也是決定產(chǎn)酶的重要因素,因此利用最佳種子進行發(fā)酵可獲取較高新科斯糖產(chǎn)量。

    作者分別選取培養(yǎng)16、24、32、40、48、60、72、84 h后的種子培養(yǎng)基,均以體積分數(shù)10%接種量接入裝有25 mL發(fā)酵培養(yǎng)基的250 mL三角瓶中,初始p H為6.0,培養(yǎng)24 h后分別測定新科斯糖產(chǎn)量和生物量。由圖8可知,新科斯糖產(chǎn)量以48 h的種齡為最佳。種齡小于48 h時,由于質(zhì)量細胞處于幼嫩的指數(shù)期,接入發(fā)酵培養(yǎng)基時受高質(zhì)量濃度蔗糖抑制作用較明顯,生物量小,果糖苷酶較少,因此新科斯糖產(chǎn)量較低。

    圖8 種齡對法夫酵母產(chǎn)新科斯糖的影響Fig.8 Effect of inoculum age on the neokestose production byXanthophyllomyces dendrorhous

    2.3 正交試驗

    通過反復試驗得知,蔗糖質(zhì)量濃度、初始p H值、發(fā)酵溫度是影響新科斯糖產(chǎn)量的重要因素。實驗以新科斯糖產(chǎn)量和蔗糖轉(zhuǎn)化率為指標,采用正交試驗優(yōu)化法夫酵母產(chǎn)新科斯糖的發(fā)酵條件,結(jié)果見表1~3。

    表1 正交試驗因素及水平Tab.1 The factors and levels of experiment

    表2 L9(34)正交試驗方案及結(jié)果Tab.2 The design and results

    表3 新科斯糖產(chǎn)量、蔗糖轉(zhuǎn)化率極差分析結(jié)果Tab.3 The range analytic results of neokestose and sucrose yield

    由圖9正交試驗結(jié)果效應曲線圖可以看出:在對新科斯糖產(chǎn)量的影響中,影響因素為A>B>C;表4方差分析表明,蔗糖質(zhì)量濃度對新科斯糖產(chǎn)量影響極顯著,是主要影響因素。這是由于在產(chǎn)糖過程中,蔗糖作為果糖苷酶的誘導物以及新科斯糖合成的底物而發(fā)揮了主要作用。在對蔗糖利用率的影響中,影響因素為A>B>C,其中蔗糖質(zhì)量濃度和p H值影響顯著。這一方面證實了蔗糖的誘導作用,另一方面說明p H值直接影響果糖苷酶的活力,即p H值過高或過低都會使其水解能力下降。綜合兩個指標及極差分析,確定最佳發(fā)酵條件為:蔗糖110 g/L,玉米漿粉8 g/L,p H 6.5,接種體積分數(shù)10%,18℃,24 h。以此條件發(fā)酵培養(yǎng),結(jié)果所得新科斯糖產(chǎn)量為73.2 g/L,蔗糖利用率為66.5%,比優(yōu)化前發(fā)酵效率提高了87.1%。

    表4 正交試驗方差分析表Tab.4 The variance analysis of orthogonal results

    圖9 正交試驗效應曲線圖Fig.9 The effect curve of orthogonal experiment

    3 結(jié) 語

    法夫酵母269能有效地將蔗糖轉(zhuǎn)化為功能性低聚果糖——新科斯糖。該菌株產(chǎn)新科斯糖的能力受蔗糖質(zhì)量濃度、氮源種類與質(zhì)量濃度、培養(yǎng)基初始p H值、種齡、接種體積分數(shù)、發(fā)酵溫度和時間等因素影響,其中尤其以蔗糖質(zhì)量濃度與初始p H值影響最大。優(yōu)化條件下發(fā)酵可使新科斯糖產(chǎn)量達到73.2 g/L發(fā)酵液,比優(yōu)化前發(fā)酵效率提高87.1%。

    [1]鄭建仙.功能性低聚糖[M].北京:化學工業(yè)出版社,2004:1-6.

    [2]尤新.功能性低聚糖發(fā)展動向及前景[J].中國食品添加劑,2008,3:45-49.

    YOU Xin.Function and prospect on oligosaccharide[J].China Food Additives,2008,3:45-49.(in Chinese)

    [3]Nizhizawa K,Nakajima M,Nabetani H.Kinetic study on transfructosylation by(-fructofuranosidase fromAspergillus nigerATCC 20611 and availability of a membrane reactor for Fructooligosaccharide production[J].Food Science and Technology Research,2001,7:39-44.

    [4]Hayashi S,Yoshiyama T,Fuji N,et al.Production of a novel syrup containing neofructooligosaccharides by the cells ofPenicillium citrinum[J].Biotechnology Letters,2000,22:1465-1469.

    [5]Blecker C,Fouguies C,Van Herck J C,et al.Kinetic study of the acid hydrolysis of various oligofructose samples[J]. Journal of Agricultural Chemistry,2002,50:1602-1607.

    [6]Van Hijum S,Van Geel-Schutten G H,Rahouri H,et al.Characterization of a novel fructosyl transferase fromL actobacillus reutrithat synthesizes high molecular weight inulin and inulin oligosaccharides[J].Applied and Environmental Microbiology,2002,68:4390-4398.

    [7]鄭建仙.功能性食品生物技術[M].北京:中國輕工業(yè)出版社,2004.

    [8]徐學明,金征宇,呂玉華.蝦青素高產(chǎn)突變株的選育[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2000,26(5):22-27.

    XU Xue-ming,J IN Zheng-yu,LU Yu-hua.Studies on astaxanthin overproducing mutants ofPhaf f ia rhodozyma[J].Food and Fermentation Industries,2000,26(5):22-27.(in Chinese)

    [9]徐學明,金征宇,劉當慧.法夫酵母產(chǎn)蝦青素的補料發(fā)酵[J].食品與生物技術學報,2002,21(1):5-9.

    XU Xue-ming,J IN Zheng-yu,LIU Dang-hui.Fed-batch culture of astaxanthin producing strainPhaf f ia rhodozyma[J]. Journal of Food Science and Biotechnology,2002,21(1):5-9(in Chinese)

    [10]Johnson E A.Phaf f ia rhodozyma:colorful odyssey[J].Int Microbiol,2003,6:169-174.

    [11]徐學明,陳曉明,金征宇.法夫酵母中蝦青素的穩(wěn)定性研究[J].食品與生物技術學報,2006,25(4):29-36.

    XU Xue-ming,CHEN Xiao-ming,J IN Zheng-yu.Stability of astaxanthin fromXanthophyllomyces dendrorhousdurning storage[J].Journal of Food Science and Biotechnology,2006,25(4):29-36.

    [12]An G H,Choi E S.Preparation of the red yeast,Xanthophyllomyces dendrorhous,as feed additive with increased availability of astaxanthin[J].Biotechnol Lett,2003,25:767-771.

    [13]Kilian S G,Sutherland F C W.Transport-limited sucrose utilization and neokestose production byPhaf f ia rhodozyma[J].Biotechnol Lett,1996,18:975-980.

    [14]徐學明,張靜娟,金征宇.一種低聚糖-新科斯糖的發(fā)酵法生產(chǎn)方法[P].中國專利:CN100392091C,2008-06-04.

    [15]蘇丁,陳曉明,徐學明.法夫酵母低聚糖結(jié)構分析的研究[J].食品與生物技術學報,2009,28(2):197-200.

    SU Ding,CHEN Xiao-ming,XU Xue-ming.Identification of the structure of oligosaccharide produced fromXanthophyllomyces dendrorhous[J].Journal of Food Science and Biotechnology,2009,28(2):197-200.

    [16]徐學明,金征宇,劉當慧.法夫酵母產(chǎn)蝦青素的搖瓶工藝[J].無錫輕工大學學報,2000,19(3):230-235.

    XU Xue-ming,J IN Zheng-yu,LIU Dang-hui.Astaxanthin production byPhaff a rhodozyma[J].Journal of Wuxi University of Light Industry,2000,19(3):230-235.

    [17]Bonnin E,Thibault J F.Galactooligosaccharide production by transfer reaction of an exogalactanase[J].Enzyme Microb Technol,1996,19:99-106.

    [18]Chien C S,Lee W C,Lin T J.Immobilization ofAspergillus japonicusby entrapping cells in gluten for production of fructooligosaccharides[J].Enzyme Microb Technol,2001,29:257-525.

    [19]Kritzinger,Kilian.The effect of production parameters on the synthesis of the prebiotic trisaccharide,neokestose,byXanthophyllomyces dendrorhous(Phaff ia rhodozyma)[J].Enzyme Microb Technol,2003,32:728-737.

    (責任編輯:李春麗)

    Studies on Fermentation Conditions for Production of Neokestose byXanthophyllomyces dendrorhous

    NING Ya-wei1,2, ZHAN GJing-juan2, SU Ding2, YANG Na2, XU Xue-ming1,2
    (1.State Key Laboratory of Food Science and Technology,Wuxi 214122,China;2.School of Food Science and Technology,Jiangnan University,Wuxi 214122,China)

    In ordertofurtherimprovethetiterandyield ofneokestoseproductionby Xanthophyllomyces dendrorhous,the medium compositions and environmental conditions for neokestose production were optimum by the single factor experiment and the orthogonal experiments,and listed as follows:sucrose 110 g/L,dried corn steep liquor powder 9 g/L,p H 6.5,rotation speed of shaker 220 r/min and inoculation size10%in 25 mL of culture medium in the 250 mL flasks at 18℃for 24 h.The concentration of neokestose by Xanthophyllomyces dendrorhous 269 was achieved at 73.2 g/L,the yield of neokestose on sucrose reached at 66.5%, which was 1.87 times than that of the control.

    Xanthophyllomyces dendrorhous,neokestose,fructo-oligosaccharides,submerged fermentation

    TQ 920.1

    :A

    1673-1689(2010)03-0458-06

    2009-07-08

    教育部優(yōu)秀人才計劃項目(NCET-07-0379)。

    *通信作者:徐學明(1968-),男,江蘇蘇州人,教授,工學博士,博士生導師,主要從事糧食油脂及植物蛋白工程方面的研究。Email:xmbest@126.com

    猜你喜歡
    科斯果糖蔗糖
    雪蓮果低聚果糖化學成分及其生物活性
    中成藥(2021年5期)2021-07-21 08:39:12
    2019年來賓市蔗糖業(yè)總產(chǎn)值近100億元
    果糖基轉(zhuǎn)移酶及低聚果糖生產(chǎn)研究進展
    食品界(2019年8期)2019-10-07 12:27:36
    摻HRA 對蔗糖超緩凝水泥基材料性能的影響
    瀾滄縣蔗糖產(chǎn)業(yè)發(fā)展的思考
    中國糖料(2016年1期)2016-12-01 06:49:06
    HPLC-ELSD法測定不同產(chǎn)地麥冬及山麥冬中的果糖
    中成藥(2016年4期)2016-05-17 06:07:50
    冷脅迫與非冷脅迫溫度條件下桃果實的蔗糖代謝差異
    真實世界的法律金融學——金融法研究的科斯方法
    金融法苑(2014年1期)2014-10-17 02:15:40
    中國決策者更應讀懂科斯
    煙草潛香類物質(zhì)果糖嗪的合成
    极品少妇高潮喷水抽搐| 国产精品蜜桃在线观看| 男人爽女人下面视频在线观看| 国内精品宾馆在线| 女性被躁到高潮视频| 精品卡一卡二卡四卡免费| 日本欧美国产在线视频| 精品人妻偷拍中文字幕| 亚洲人成77777在线视频| 大话2 男鬼变身卡| 精品一区二区免费观看| 一区二区三区乱码不卡18| 女的被弄到高潮叫床怎么办| av有码第一页| 日韩精品有码人妻一区| 精品国产国语对白av| 国产精品蜜桃在线观看| 看免费成人av毛片| 国产一区二区三区av在线| 成人影院久久| 人妻少妇偷人精品九色| 春色校园在线视频观看| 国产熟女欧美一区二区| 国产免费福利视频在线观看| 婷婷色麻豆天堂久久| 国产精品国产三级专区第一集| 日本色播在线视频| 亚洲国产av影院在线观看| 久久久久精品久久久久真实原创| 国产成人免费观看mmmm| 国产亚洲欧美精品永久| 国产高清国产精品国产三级| av国产精品久久久久影院| 春色校园在线视频观看| 亚洲人与动物交配视频| 久热久热在线精品观看| 在线观看人妻少妇| 亚洲人成网站在线观看播放| 99re6热这里在线精品视频| 老司机影院毛片| 中文天堂在线官网| 中文欧美无线码| 日韩制服骚丝袜av| 少妇的逼好多水| 午夜免费鲁丝| 9191精品国产免费久久| 国产 精品1| 国产精品蜜桃在线观看| 国产乱人偷精品视频| 午夜免费观看性视频| 欧美日本中文国产一区发布| 大陆偷拍与自拍| 精品人妻偷拍中文字幕| 国产极品粉嫩免费观看在线| 啦啦啦在线观看免费高清www| 青春草亚洲视频在线观看| 在线观看免费高清a一片| 美女国产高潮福利片在线看| 亚洲精品456在线播放app| 午夜影院在线不卡| 深夜精品福利| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| freevideosex欧美| www.色视频.com| 国产精品欧美亚洲77777| 亚洲,一卡二卡三卡| www日本在线高清视频| 97人妻天天添夜夜摸| 熟女人妻精品中文字幕| 国产成人欧美| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 中文字幕免费在线视频6| 亚洲欧美色中文字幕在线| 另类亚洲欧美激情| 亚洲国产日韩一区二区| 精品国产露脸久久av麻豆| 男的添女的下面高潮视频| 99香蕉大伊视频| 久久人人爽人人爽人人片va| 亚洲精品av麻豆狂野| 色婷婷久久久亚洲欧美| 婷婷成人精品国产| 免费少妇av软件| 国产免费现黄频在线看| 99视频精品全部免费 在线| 亚洲一区二区三区欧美精品| 亚洲av成人精品一二三区| 黑人猛操日本美女一级片| 卡戴珊不雅视频在线播放| 欧美日韩av久久| 亚洲美女搞黄在线观看| 亚洲人成网站在线观看播放| 免费高清在线观看日韩| 蜜臀久久99精品久久宅男| 国产亚洲欧美精品永久| 在线观看美女被高潮喷水网站| 午夜精品国产一区二区电影| 国产69精品久久久久777片| 在线观看人妻少妇| 国产伦理片在线播放av一区| 免费观看在线日韩| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕 | 亚洲国产精品一区三区| 欧美人与性动交α欧美软件 | 欧美+日韩+精品| 在线天堂中文资源库| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 女性生殖器流出的白浆| 婷婷色麻豆天堂久久| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 久久久久久久精品精品| 美女国产高潮福利片在线看| 高清毛片免费看| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 免费观看在线日韩| 日本av免费视频播放| 黑人高潮一二区| 国精品久久久久久国模美| 国产片特级美女逼逼视频| 久久久久久人人人人人| 久久这里有精品视频免费| 国产在线免费精品| 伊人亚洲综合成人网| 美女国产视频在线观看| 色视频在线一区二区三区| 亚洲国产色片| 久久人人97超碰香蕉20202| 亚洲,欧美精品.| 午夜福利网站1000一区二区三区| 亚洲美女视频黄频| 久久综合国产亚洲精品| 9热在线视频观看99| 男女午夜视频在线观看 | 校园人妻丝袜中文字幕| 国产片特级美女逼逼视频| 乱人伦中国视频| 99re6热这里在线精品视频| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 国产成人91sexporn| 成人漫画全彩无遮挡| 亚洲国产色片| 在线观看人妻少妇| videosex国产| 亚洲熟女精品中文字幕| www.熟女人妻精品国产 | 高清黄色对白视频在线免费看| 久久这里只有精品19| 黄片播放在线免费| 久久精品夜色国产| 欧美97在线视频| 黑丝袜美女国产一区| 婷婷色综合大香蕉| 国产高清国产精品国产三级| 成年人午夜在线观看视频| 亚洲图色成人| 日本黄色日本黄色录像| 亚洲一码二码三码区别大吗| 亚洲综合色惰| 国产免费视频播放在线视频| 成人二区视频| 亚洲欧美成人精品一区二区| 中文天堂在线官网| 五月玫瑰六月丁香| 久久午夜福利片| 亚洲精品国产av蜜桃| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 亚洲经典国产精华液单| 国产 一区精品| 综合色丁香网| 久久人人爽人人片av| 精品一品国产午夜福利视频| 满18在线观看网站| 七月丁香在线播放| 美女福利国产在线| 日韩一区二区三区影片| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 不卡视频在线观看欧美| 丝袜人妻中文字幕| 精品久久国产蜜桃| 又黄又粗又硬又大视频| 久久精品国产a三级三级三级| 不卡视频在线观看欧美| 成人毛片a级毛片在线播放| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 日日爽夜夜爽网站| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 看免费成人av毛片| 国产精品国产三级专区第一集| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 女性被躁到高潮视频| 国产成人午夜福利电影在线观看| av片东京热男人的天堂| 亚洲精品中文字幕在线视频| 母亲3免费完整高清在线观看 | 99久久精品国产国产毛片| 美女中出高潮动态图| 大话2 男鬼变身卡| 桃花免费在线播放| 丰满少妇做爰视频| 99久久人妻综合| 欧美人与善性xxx| 欧美日韩成人在线一区二区| 一级毛片电影观看| 国产黄色视频一区二区在线观看| 夜夜爽夜夜爽视频| 精品国产露脸久久av麻豆| 香蕉丝袜av| 久久久久久伊人网av| 美女福利国产在线| 久久人人97超碰香蕉20202| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 国产片特级美女逼逼视频| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 日本午夜av视频| 国产黄色免费在线视频| 青春草亚洲视频在线观看| 人成视频在线观看免费观看| 另类精品久久| 香蕉精品网在线| 国产精品久久久久久精品古装| 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲精品av麻豆狂野| 天美传媒精品一区二区| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 欧美日韩av久久| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 热99久久久久精品小说推荐| 亚洲第一av免费看| 国产色爽女视频免费观看| 少妇精品久久久久久久| 午夜日本视频在线| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 日本与韩国留学比较| av免费观看日本| 日韩精品有码人妻一区| av片东京热男人的天堂| 亚洲美女黄色视频免费看| 免费大片18禁| 黄色毛片三级朝国网站| av电影中文网址| 下体分泌物呈黄色| 久久99热6这里只有精品| 免费少妇av软件| 久久女婷五月综合色啪小说| 日本黄大片高清| 人成视频在线观看免费观看| 最黄视频免费看| 国产综合精华液| 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产乱人偷精品视频| 久久精品国产a三级三级三级| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| kizo精华| 永久网站在线| 亚洲av成人精品一二三区| 亚洲,一卡二卡三卡| 久久久久国产精品人妻一区二区| 成年av动漫网址| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 久久鲁丝午夜福利片| 永久免费av网站大全| 欧美日韩精品成人综合77777| 男女高潮啪啪啪动态图| 一区二区三区乱码不卡18| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 久久精品国产亚洲av涩爱| 2022亚洲国产成人精品| av一本久久久久| 在现免费观看毛片| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 夜夜爽夜夜爽视频| 久久精品人人爽人人爽视色| 18在线观看网站| 极品人妻少妇av视频| 91在线精品国自产拍蜜月| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 国产色爽女视频免费观看| 久久久久国产网址| 边亲边吃奶的免费视频| 色吧在线观看| 青青草视频在线视频观看| 热99国产精品久久久久久7| 高清在线视频一区二区三区| 久久久国产精品麻豆| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 日韩av免费高清视频| 婷婷色综合www| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 考比视频在线观看| 欧美精品一区二区大全| 欧美少妇被猛烈插入视频| av电影中文网址| 国产精品久久久久久久久免| 国产成人一区二区在线| 蜜臀久久99精品久久宅男| 黑人猛操日本美女一级片| 国产老妇伦熟女老妇高清| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 成人综合一区亚洲| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 妹子高潮喷水视频| 涩涩av久久男人的天堂| 考比视频在线观看| 深夜精品福利| 久久久久久久久久成人| 大香蕉久久网| 免费大片黄手机在线观看| 成人毛片60女人毛片免费| 看非洲黑人一级黄片| xxxhd国产人妻xxx| 少妇熟女欧美另类| 亚洲三级黄色毛片| 久久久久国产网址| 只有这里有精品99| 亚洲av福利一区| 99久久综合免费| 国产精品久久久久久精品古装| 考比视频在线观看| 国产免费一级a男人的天堂| www.色视频.com| 久久久久久久精品精品| 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产高清三级在线| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 国产精品无大码| 夫妻午夜视频| 狂野欧美激情性bbbbbb| 国产色婷婷99| 看十八女毛片水多多多| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 色视频在线一区二区三区| 欧美成人精品欧美一级黄| 九草在线视频观看| www.色视频.com| 色视频在线一区二区三区| 国产乱来视频区| av女优亚洲男人天堂| 蜜桃国产av成人99| 五月开心婷婷网| 99热网站在线观看| 亚洲四区av| av视频免费观看在线观看| 最新的欧美精品一区二区| 久久久久人妻精品一区果冻| 久久国内精品自在自线图片| 伊人久久国产一区二区| 欧美日韩综合久久久久久| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 国产精品偷伦视频观看了| 久久热在线av| 91成人精品电影| 国产精品久久久久久久电影| 久久这里只有精品19| 国产免费一区二区三区四区乱码| 精品视频人人做人人爽| 亚洲精品,欧美精品| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 这个男人来自地球电影免费观看 | 日本91视频免费播放| 黄色配什么色好看| 欧美精品一区二区免费开放| 男女国产视频网站| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 在线观看一区二区三区激情| 欧美日韩综合久久久久久| 亚洲国产av新网站| 一二三四中文在线观看免费高清| 亚洲成人一二三区av| 亚洲久久久国产精品| 91国产中文字幕| 欧美性感艳星| 国产乱来视频区| 国产在线视频一区二区| 亚洲熟女精品中文字幕| 天美传媒精品一区二区| 久久精品久久久久久久性| 夫妻性生交免费视频一级片| 各种免费的搞黄视频| 免费黄色在线免费观看| 午夜影院在线不卡| 男女下面插进去视频免费观看 | 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 国产av码专区亚洲av| 国产视频首页在线观看| 中文字幕制服av| 久久99一区二区三区| 免费大片18禁| 久久精品国产a三级三级三级| 精品熟女少妇av免费看| 久久久国产一区二区| 一边摸一边做爽爽视频免费| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 最新的欧美精品一区二区| xxxhd国产人妻xxx| av在线老鸭窝| 18在线观看网站| 大片免费播放器 马上看| 美女中出高潮动态图| 精品国产一区二区久久| 熟女人妻精品中文字幕| 熟女av电影| 91aial.com中文字幕在线观看| 国产1区2区3区精品| 精品一区二区三卡| 亚洲天堂av无毛| 美女福利国产在线| av在线老鸭窝| 免费人妻精品一区二区三区视频| 91精品伊人久久大香线蕉| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 国产成人一区二区在线| 日本wwww免费看| 日韩免费高清中文字幕av| 青春草视频在线免费观看| 美女大奶头黄色视频| 成人漫画全彩无遮挡| 欧美日韩亚洲高清精品| 老司机影院毛片| 各种免费的搞黄视频| 国产精品99久久99久久久不卡 | 国产激情久久老熟女| 韩国av在线不卡| 黄色配什么色好看| 十分钟在线观看高清视频www| 久久国内精品自在自线图片| 久久婷婷青草| 成人手机av| 大片免费播放器 马上看| 天天影视国产精品| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 观看美女的网站| 97在线人人人人妻| 欧美精品一区二区大全| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 午夜激情av网站| 免费人成在线观看视频色| 制服诱惑二区| 一本久久精品| 久久av网站| 精品久久蜜臀av无| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 国产精品久久久久久久电影| 国产片内射在线| 18禁观看日本| 在线看a的网站| www.熟女人妻精品国产 | 街头女战士在线观看网站| 亚洲国产色片| 亚洲中文av在线| 两个人看的免费小视频| 在线观看一区二区三区激情| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 在线精品无人区一区二区三| 桃花免费在线播放| 国产乱来视频区| 香蕉丝袜av| 久久影院123| 成人综合一区亚洲| 日韩制服骚丝袜av| 韩国高清视频一区二区三区| 人妻系列 视频| 国产成人精品福利久久| 97在线视频观看| 欧美 日韩 精品 国产| 亚洲人成77777在线视频| 人人澡人人妻人| 欧美97在线视频| 国产一区二区在线观看av| 在线天堂中文资源库| 午夜av观看不卡| 熟女人妻精品中文字幕| 亚洲国产日韩一区二区| 日韩三级伦理在线观看| 欧美亚洲日本最大视频资源| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 久久久久久久精品精品| 国产午夜精品一二区理论片| 成人国语在线视频| 婷婷色av中文字幕| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 欧美精品av麻豆av| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 亚洲精品视频女| av国产久精品久网站免费入址| 国产不卡av网站在线观看| 日韩中文字幕视频在线看片| 伊人久久国产一区二区| 中文字幕人妻熟女乱码| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 精品少妇久久久久久888优播| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 国产视频首页在线观看| 亚洲精品一区蜜桃| 制服诱惑二区| 欧美日韩av久久| 亚洲成色77777| 国产精品女同一区二区软件| 午夜福利乱码中文字幕| 五月玫瑰六月丁香| 99久久人妻综合| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 女性被躁到高潮视频| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 成人漫画全彩无遮挡| 夜夜爽夜夜爽视频| 搡女人真爽免费视频火全软件| 99热6这里只有精品| 国产福利在线免费观看视频| 性色avwww在线观看| 不卡视频在线观看欧美| 男女边吃奶边做爰视频| 日本91视频免费播放| 亚洲国产av影院在线观看| 中文字幕亚洲精品专区| 18在线观看网站| 精品少妇内射三级| 日韩成人伦理影院| 久久久精品94久久精品| 久久狼人影院| av又黄又爽大尺度在线免费看| 男人舔女人的私密视频| 婷婷色麻豆天堂久久| 国产 精品1| 男女免费视频国产| 亚洲国产色片| 国产福利在线免费观看视频| 99久久精品国产国产毛片| www.av在线官网国产| 国国产精品蜜臀av免费| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 十分钟在线观看高清视频www| 亚洲av在线观看美女高潮| 欧美日韩视频精品一区| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 久久免费观看电影| 97人妻天天添夜夜摸| 日韩一本色道免费dvd| 国产精品99久久99久久久不卡 | 在线 av 中文字幕| 全区人妻精品视频| 性色avwww在线观看| 色网站视频免费| 精品国产国语对白av| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产精品三级大全| 久久婷婷青草| 色哟哟·www| 成年动漫av网址| 大片电影免费在线观看免费| 一个人免费看片子| 成人国产麻豆网| 欧美 日韩 精品 国产| 精品久久久久久电影网| 午夜影院在线不卡| 国产男人的电影天堂91| 在线观看一区二区三区激情| 精品午夜福利在线看| 丝袜喷水一区| 日日撸夜夜添| 九九爱精品视频在线观看| 亚洲av成人精品一二三区| 亚洲图色成人| 国产成人免费观看mmmm| 免费黄频网站在线观看国产| 美女国产视频在线观看| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 国产乱来视频区| 免费人妻精品一区二区三区视频| 久久精品夜色国产| 这个男人来自地球电影免费观看 | 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 美女福利国产在线| 国产av码专区亚洲av| 欧美人与性动交α欧美软件 | 国产1区2区3区精品| 看免费成人av毛片| 天美传媒精品一区二区| 久久久久精品人妻al黑| 国产免费视频播放在线视频| 亚洲成色77777| av国产久精品久网站免费入址| 国产免费现黄频在线看| 卡戴珊不雅视频在线播放| 免费av不卡在线播放| 美女内射精品一级片tv| 久久国产精品大桥未久av| 99久国产av精品国产电影| 天堂中文最新版在线下载| 老司机亚洲免费影院| 国产免费一级a男人的天堂| 曰老女人黄片| 国产黄色免费在线视频| 另类精品久久| 中文字幕人妻熟女乱码| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 99热国产这里只有精品6| 国产在线一区二区三区精| 我的女老师完整版在线观看| 免费少妇av软件| 国产男女内射视频| 考比视频在线观看| 久久影院123| 岛国毛片在线播放| 午夜91福利影院| 日本-黄色视频高清免费观看| 国产成人aa在线观看| 丝袜人妻中文字幕| 韩国高清视频一区二区三区| 一区在线观看完整版| 精品熟女少妇av免费看| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 久久久久久久久久久久大奶|