前S1抗原與丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶聯(lián)合檢測(cè)診斷乙型肝炎病毒復(fù)制

賈 莉，部小霞，李建華，林貴高，鄢盛愷

（中日友好醫(yī)院 檢驗(yàn)科，北京 100029）

前S1抗原與丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶聯(lián)合檢測(cè)診斷乙型肝炎病毒復(fù)制

賈 莉，部小霞，李建華，林貴高，鄢盛愷

（中日友好醫(yī)院 檢驗(yàn)科，北京 100029）

目的：探討前S1抗原與丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）在診斷乙型肝炎病毒復(fù)制中的臨床價(jià)值。方法：對(duì)150例乙型肝炎病毒s抗原（HBsAg）陽(yáng)性的樣本分別進(jìn)行血清前S1抗原、乙型肝炎病毒-脫氧核糖核酸（HBVDNA）和ALT的檢測(cè)，前S1抗原采用酶聯(lián)免疫吸附法，HBV-DNA采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)法，ALT采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)。結(jié)果：150例樣本HBV-DNA均為陽(yáng)性（≥103IU/ml），其中前S1抗原陽(yáng)性116例，兩者符合率為77.3%。前S1抗原陽(yáng)性的116例中95例（81.9%）表現(xiàn)為乙型肝炎病毒的高復(fù)制（HBV-DNA＞104IU/ml），同時(shí)51例ALT不升高的樣本中35例（68.6%）HBV-DNA＞104IU/ml。結(jié)論：前S1抗原是反映乙肝病毒復(fù)制及復(fù)制程度高低的指標(biāo)，與血清ALT同時(shí)檢測(cè)可以指導(dǎo)臨床慢性乙型肝炎患者的定期復(fù)檢及療效判定。

乙型肝炎病毒；前S1抗原；病毒復(fù)制；乙型肝炎病毒-脫氧核糖核酸

Author's addressDepartment of Clinical Laboratory，China-Japan Friendship Hospital，Beijing 100029，China

對(duì)乙肝患者定期進(jìn)行肝功能和乙肝病毒核酸（hepatitis B virus-deoxyribonucleic acid，HBVDNA）定量檢測(cè)對(duì)判斷患者治療效果及其預(yù)后有重要意義，尤其是HBV-DNA的定量檢測(cè)能直觀、準(zhǔn)確地反映出病毒在人體內(nèi)的復(fù)制情況。但由于HBV-DNA定量通常采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）的方法進(jìn)行，存在著檢查成本較高、耗時(shí)較長(zhǎng)、檢測(cè)過程容易受污染等缺點(diǎn)，在基層實(shí)驗(yàn)室的推廣應(yīng)用受到一定的限制。前S1抗原 （pre-S1 antigen，pre-S1 Ag）是乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）外膜蛋白的組成成分之一，由108或119個(gè)氨基酸殘基組成，其表面含有肝細(xì)胞受體，在HBV感染肝細(xì)胞和機(jī)體免疫應(yīng)答方面起著重要作用。已有研究[1～5]報(bào)道前S1抗原可以反映乙肝病毒復(fù)制和傳染性的強(qiáng)弱，我們綜合分析了HBsAg陽(yáng)性患者的血清前S1抗原、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotransferase，ALT）和 HBV-DNA 的變化，對(duì)前S1抗原與ALT聯(lián)合檢測(cè)的臨床應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行探討，以期能為慢性乙肝患者是否有必要開始治療、治療效果監(jiān)測(cè)及預(yù)后判斷方面提供一個(gè)更經(jīng)濟(jì)、快速、簡(jiǎn)便的檢測(cè)指標(biāo)。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

150份HBsAg陽(yáng)性的樣本，來(lái)源于2009年4月～8月本院門診及住院患者空腹12h后的血清樣本，其中男84例，女66例，年齡19～81歲。

1.2 檢測(cè)方法

ALT采用RANDOX試劑速率法測(cè)定，質(zhì)控品批號(hào)536UN，404UE，所用儀器為日立7600全自動(dòng)生化分析儀，測(cè)定當(dāng)日質(zhì)控均合格（在±2SD之間），＜40IU/ml為正常參考范圍。

前S1抗原采用上海阿爾法生物技術(shù)有限公司試劑盒 （批號(hào)20090318），酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)，用ANTHOS酶標(biāo)儀測(cè)定OD值；每一批次實(shí)驗(yàn)的陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照都必須滿足試劑盒要求，結(jié)果判斷嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。

HBV-DNA采用中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司試劑盒 （批號(hào) 2009004）、Roche公司Lightcycler熒光定量PCR儀用實(shí)時(shí)熒光PCR方法檢測(cè)。每批測(cè)試均設(shè)陰性對(duì)照和弱陽(yáng)性、陽(yáng)性質(zhì)控且質(zhì)控結(jié)果合格（在±2SD之間），由試劑盒提供的 4 個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作品（1×104、1×105、1×106、1×107IU/ml） 計(jì)算出各標(biāo)本的濃度值，＜1×103IU/ml為陰性參考范圍，≥1×103IU/ml為陽(yáng)性，每批測(cè)試的線性相關(guān)系數(shù)均在 0.99≤｜r｜≤1。

表1 150例HBV-DNA陽(yáng)性樣本中pre-S1 Ag和ALT的檢測(cè)結(jié)果

表3 116例pre-S1 Ag陽(yáng)性的樣本中ALT和HBV-DNA的檢測(cè)結(jié)果

2 結(jié)果

150例HBsAg陽(yáng)性的樣本HBV-DNA均為陽(yáng)性（≥103IU/ml），其中前S1抗原和ALT的檢測(cè)結(jié)果見表1。前S1抗原和ALT不同檢測(cè)結(jié)果下乙肝病毒的復(fù)制情況見表2。116例前S1抗原陽(yáng)性的樣本中ALT和HBV-DNA的檢測(cè)結(jié)果見表3。

3 討論

臨床對(duì)慢性乙肝患者經(jīng)常根據(jù)其轉(zhuǎn)氨酶的變化和乙肝核酸定量來(lái)判斷其療效及預(yù)后，因?yàn)锳LT可反映肝細(xì)胞的損傷，核酸定量可直接反映病毒的復(fù)制情況。但ALT的升高不單純出現(xiàn)在由于病毒侵害造成的肝細(xì)胞受損的情況，其很容易受到諸多因素的影響，必須結(jié)合其它指標(biāo)來(lái)判斷病毒的復(fù)制及患者的療效；基于PCR方法進(jìn)行的核酸定量一般都費(fèi)用較高，用時(shí)也較長(zhǎng)，對(duì)實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境和設(shè)備要求較高，對(duì)于一些基層檢驗(yàn)科室不太適合開展。血清前S1抗原測(cè)定方法簡(jiǎn)單、快速、成本較低，通常是加上“乙肝五項(xiàng)”組合為“乙肝六項(xiàng)”，使臨床檢測(cè)更為方便。

表1示，150例HBV-DNA陽(yáng)性（≥103IU/ml）的患者中，前S1抗原陽(yáng)性的有116例，兩者有77.3%的符合率；表現(xiàn)為ALT增高且前S1抗原陽(yáng)性的有65例，占43.3%，這些患者的病毒復(fù)制程度很高，其中92.3%的乙肝病毒載量＞104IU/ml（表2）。值得注意的是，在前S1抗原陽(yáng)性的116例患者中51例（44%）并不表現(xiàn)為ALT的升高，但其中病毒高水平復(fù)制 （＞104IU/ml）者有 35例，占68.6%（表3）。說(shuō)明有相當(dāng)數(shù)量的HBsAg陽(yáng)性的患者雖然其肝細(xì)胞受損尚不嚴(yán)重，ALT還表現(xiàn)為正常，但其體內(nèi)乙肝病毒的復(fù)制仍存在，甚至是高載量的復(fù)制。提醒臨床醫(yī)生在患者ALT正常的情況下雖然可以不考慮干預(yù)治療，但其體內(nèi)的高病毒復(fù)制要引起足夠重視。

表2 pre-S1 Ag和ALT不同檢測(cè)結(jié)果下乙肝病毒的復(fù)制情況

有學(xué)者報(bào)道[6]在用核苷類似物干預(yù)后的慢性乙肝患者中，其前S1抗原與HBV-DNA呈現(xiàn)出不一致的變化，本研究未對(duì)患者樣本進(jìn)行詳細(xì)的病種及病程分組，相關(guān)的研究還有待進(jìn)一步進(jìn)行，但從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中也看到在150例HBV-DNA陽(yáng)性的患者中有34例（22.7%）是前S1抗原陰性的患者，所以若單獨(dú)從前S1抗原的結(jié)果判定病毒復(fù)制情況的話，顯然會(huì)有將近1/4的患者漏診；不過我們發(fā)現(xiàn)這部分患者中有15例（44.1%）表現(xiàn)出ALT 的升高（表 1），且高病毒復(fù)制（＞104IU/ml）的患者占66.7%（表2），分析可能是由于肝細(xì)胞早期損傷時(shí)ALT出現(xiàn)變化較早，前S1抗原的反應(yīng)出現(xiàn)較晚，或是前S1抗原檢測(cè)方法的靈敏度所限造成，所以有必要同時(shí)進(jìn)行ALT的檢測(cè)，同時(shí)檢測(cè)血清前S1抗原和ALT水平能幫助我們更好地分析患者體內(nèi)病毒的復(fù)制情況。

HBV的 e抗原（HBeAg）與病毒 Dane顆粒、HBV-DNA具有伴隨關(guān)系。但是，當(dāng)HBV的前核心區(qū)發(fā)生突變時(shí)，HBeAg無(wú)法表達(dá)，表現(xiàn)為血清HBeAg或抗HBe測(cè)定陰性，而前 S1抗原作為病毒復(fù)制指標(biāo)，能彌補(bǔ)HBeAg變異造成的誤診，是較 HBeAg 更為敏感的病毒復(fù)制指標(biāo)[3，7，8]。 本研究結(jié)果前S1抗原與HBV-DNA的陽(yáng)性符合率為77.3%，這與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[8～10]，且其陽(yáng)性者病毒復(fù)制程度大都較高，表明前S1抗原可以作為乙肝病毒感染和復(fù)制的一個(gè)很好的輔助指標(biāo)；而且其檢測(cè)方法相對(duì)簡(jiǎn)單、快速、經(jīng)濟(jì)，比HBV-DNA更易在臨床尤其是在不具備定量PCR實(shí)驗(yàn)室的醫(yī)院進(jìn)行推廣，再結(jié)合血清ALT的檢測(cè)可在很大程度上為臨床提供患者體內(nèi)病毒復(fù)制的基本情況，幫助判斷患者療效及預(yù)后，亦為長(zhǎng)期治療的慢性乙肝患者節(jié)約了醫(yī)藥費(fèi)，應(yīng)得到臨床的足夠重視與應(yīng)用。

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Clinical value of detection of pre-S1 antigen and alanine aminotransferase in patients with hepatitis Bvirus and the virus replication

JIA Li，BU Xiao-xia，LI Jian-hua，et al//Journal of China-Japan Friendship Hospital，2010 Feb，24（1）：15-17

Objective：To investigate the clinical significance of pre-S1 antigen （pre-S1 Ag）of hepatitis B virus（HBV）and alanine aminotransferase （ALT）detection on the diagnosis of virus replication.Methods：Pre-S1 Ag，HBV-DNA and ALT of 150 serum samples，which HBsAg were positive，were detected by ELISA，real-time fluorescence polymerase chain reaction assay and auto-biochemical analysis respectively.Results：One hundred and sixteen samples were pre-S1 Ag positive in all samples and were HBV-DNA positive（≥103IU/ml），the coincident rate of pre-S1 Ag and HBV-DNA was 77.3%.Among the 116 pre-S1 Ag positive samples，95 of them （81.9%）had the higher level of HBV virus replication （HBV-DNA＞104IU/ml）.Fifty one samples had the common level of serum ALT，among them 35 samples were HBV-DNA＞104IU/ml.Conclusion：Pre-S1 Ag is a good indicator of HBV virus replication and the results which combined with serum ALT will guide the following up of chronic hepatitis B patients who need retest virus replication in a long time.

hepatitis B virus；pre-S1 antigen；virus replication；hepatitis B virus-deoxyribonucleic acid

R512.6+2；R446.61

A

1001-0025（2010）01-0015-03

10.3969/j.issn.1001-0025.2010.01.004

賈 莉（1969-），女，主管技師。

2009-12-14

2010-01-06