花卉害螨的采集和玻片標(biāo)本的制作

張麗芳，瞿素萍，劉忠善，王繼華

（1.云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所，云南昆明650205；2.云南出入境檢驗檢疫局技術(shù)中心，云南昆明650228；3.云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院花卉研究所，云南昆明650205）

花卉害螨屬于節(jié)肢動物門，蛛形綱(Arachnida），蜱螨亞綱(Acari），具有個體小、繁殖快、適應(yīng)性強(qiáng)、易爆發(fā)成災(zāi)等特點(diǎn)。園林花卉上的害螨分布廣泛，種類很多，其中葉螨以危害葉片為主，成螨、若螨密集群居于受害葉片背面刺吸汁液，并吐絲結(jié)網(wǎng)，被害葉現(xiàn)白斑，輕的葉片枯黃，遠(yuǎn)看似火燒，危害重的全株枯死。害螨包括柑橘全爪螨PanonychuscitriMcGregor、 朱 砂 葉 螨 Tetranychus cinnabarinus Boisduva1、二斑葉螨Tetranychus urticae Koch等常見種類。癭螨危害嫩葉幼梢、花，造成畸形或葉面粗糙，變黑褐色或銹色，有的形成蟲癭或毛氈，還傳播植物病毒，造成更大損失。粉螨主要種類有羅賓根螨Rhizoglyphus robini Claparede和刺足根螨Rhizoglyphus echinopus(Fumouze et Robin）等，刺吸塊根球莖，造成腐爛干癟，影響地上部植株的生長[1-2]。我國危害園林花卉的螨類有100多種，其中危害較重的有40多種?，F(xiàn)代蜱螨學(xué)的發(fā)展在歐洲是從19世紀(jì)末20世紀(jì)初才開始的，Kramer，Megin等人的工作對蜱螨學(xué)研究提供了基礎(chǔ)，但是其分類現(xiàn)在還是處于開始發(fā)展時期[3]，有人認(rèn)為現(xiàn)在蜱螨分類的混亂程度恰如100年前昆蟲分類的情況。筆者介紹花卉害螨的采集和玻片標(biāo)本的制作方法，以供螨類工作者和相關(guān)人員參考。

1 標(biāo)本采集

采集葉片，葉芽和枝條上的螨類一般用拍打法，用毛筆或小木棒敲擊枝葉，使螨類墜落于鋪在下方的白紙或者白布上，或直接用毛筆輕刷受害部位，然后將其置入盛有75%酒精的小瓶中。該螨類一般很柔軟，必須細(xì)心處理，避免損壞螨體，而且常有多種不同螨類混雜，在鑒定時需雌雄個體，所以采集數(shù)量要盡量多。為確認(rèn)寄主植物，不混雜其他螨類，也可先將枝葉用塑料袋套入后再敲擊，塑料袋要有細(xì)小的通風(fēng)口，否則寄主植物容易產(chǎn)生水蒸氣，使螨粘滿塑料袋。

有些螨類隱藏在蟲癭、毛氈中，采集時應(yīng)特別注意褐化、畸形的部份和色澤淡的毛氈，需要注意的是，蟲癭里不僅有癭螨，而且還會有昆蟲，應(yīng)注意區(qū)分。危害輕的只需剪取葉片受害組織，發(fā)生重的可直接摘取被害葉，連螨和寄主一起放浸漬液（配方：95%酒精75 mL，蒸餾水20 mL，白糖添加至飽和，取澄清液備用）中保存。

塊根球莖上的螨類由于會混雜有栽培基質(zhì)，數(shù)量不多時，不易發(fā)現(xiàn)，可采用水浮法把土壤放在水或食鹽飽和溶液中使螨類上浮進(jìn)行收集。大量繁殖，數(shù)量較多時直接用肉眼就可看到有很多粉狀小白點(diǎn)，借助放大鏡，仔細(xì)觀察，就會發(fā)現(xiàn)小白點(diǎn)在移動，此時可用毛筆粘水，直接挑取，置入盛有75%酒精的小瓶中。

采集前應(yīng)準(zhǔn)備好采集瓶和保存液。采集到的樣本必須貼上正規(guī)的標(biāo)簽，寫明采集時間、地點(diǎn)、蟲體顏色、寄主植物及生長周期、周邊環(huán)境及采集人等情況。

2 玻片標(biāo)本的制備

花卉害螨體軀特別細(xì)小，為了便于觀察和永久保存，制作清晰透明和形態(tài)完好的玻片標(biāo)本十分重要。

2.1 永久性玻片標(biāo)本的制作

2.1.1 軟化及除去體內(nèi)物質(zhì) 將害螨在5%的氫氧化鈉（NaOH）或氫氧化鉀（KOH）溶液中煮沸5～10 min，柔軟、色淡的只需在溶液中冷浸數(shù)5～7 h即可。在煮或浸之前，可在蟲體不重要的地方用細(xì)針刺1個小孔，以便溶去蟲體內(nèi)物質(zhì)。處理完畢后，倒去堿液，用清水充分清洗標(biāo)本。

2.1.2 染 色 用清水充分清洗后即可用洋紅溶液染色，染色可以深一些，因在下一步脫水過程中還要退去一些，變得淡一點(diǎn)。

2.1.3 脫 水 用不同濃度的酒精由低濃度到高濃度 30%，50%，70%，80%，85%，90%，95%，100%（無水酒精）逐步除去標(biāo)本中的水分，最后放入二甲苯中。每次在不同濃度的酒精中浸5～10 min，無水酒精浸2次，第二次浸的時間可短一些，約2 min即可。然后將標(biāo)本移入二甲苯液中進(jìn)行透明，如二甲苯呈現(xiàn)混濁現(xiàn)象，說明標(biāo)本脫水未凈，需再回到無水酒精中處理，至完全脫水為止。

2.1.4 封 片 將在二甲苯液中經(jīng)過透明的標(biāo)本移到洗凈的載玻片的中心處，滴上中性樹膠，滴膠的量依標(biāo)本及玻片的大小而定，然后慢慢的蓋上蓋玻片。玻片制好后放入45～50℃溫箱中烘干，待中性樹膠完全干固后，才可貼上正確標(biāo)簽，移出保存。

2.2 臨時玻片標(biāo)本的制作

制作臨時玻片標(biāo)本的目的，是為了較快地鏡檢，現(xiàn)做現(xiàn)用。通常是配制一種不必經(jīng)過脫水，標(biāo)本就能封片的膠，常用水溶性的封固液水含氯醛膠，其配方是：阿拉伯樹膠15 g，甘油10 mL，水含氯醛100 g，蒸餾水25 mL，此法具有螨體透明迅速，簡便易行的優(yōu)點(diǎn)。制備臨時玻片標(biāo)本時，先取一滴膠液置于潔凈的載玻片中央，用吸管吸取保存液中的標(biāo)本至濾紙上，用蘸有膠液的解剖針，從濾紙上粘取標(biāo)本至膠滴中，蓋上蓋玻片，然后放在酒精燈上加熱至沸騰，螨體即伸展透明。玻片制好后放入40～50℃烘箱中烘烤3～5周，貼上標(biāo)簽即可。

3 討論

花卉害螨采集最適宜的時間是高溫干旱的季節(jié)，此時發(fā)生危害重，繁殖快，種類多，很容易采到大量標(biāo)本，不過有時為了研究，也需要在不同季節(jié)或者是同一季節(jié)的不同時間，對同種植物觀察和采集若干次。隨著溫室大棚花卉周年種植的發(fā)展，任何季節(jié)都可采集到花卉害螨，更方便了花卉害螨的種類研究。標(biāo)本制作過程中將二甲苯液中經(jīng)過透明的標(biāo)本移到洗凈的載玻片的中心處時，可以先用吸管吸取二甲苯液中的標(biāo)本至濾紙上，用粘有膠液的解剖針從濾紙上迅速粘取標(biāo)本至膠滴中，操作起來相對要容易一些，也可以直接用挑針挑取至膠滴中。總之，螨類由于蟲體特別細(xì)小，制作標(biāo)本較困難，各個步驟都很關(guān)鍵，需要熟練的操作，不斷積累經(jīng)驗，才能制作出完美的玻片標(biāo)本。

[1] Diaz A,Okabe K,Eckenrode C J,et al.Biology,ecology,and management of the bulb mites of the genusRhizoglyphus(Acari:Acaridae）[J].Experimental and Applied Acarology,2000,(24）:85-113.

[2] Fan Q H,Zhang Z Q.Revision of Rhizoglyphus Claparède(Acari:Acaridae）of Australasia and Oceania[M].London:Systematic&Applied Acarology Society,2004.374.

[3] 忻介六.農(nóng)業(yè)螨類學(xué)[M].北京：農(nóng)業(yè)出版社，1988.2-5.

[4] 中國科學(xué)院中國動物志編輯委員會.中國經(jīng)濟(jì)昆蟲志 [M].北京：科學(xué)出版社，1995.13-16.