羊布魯氏菌病的診斷與防制

龐建慶,郭煥金,孫建新

（1.輝縣市冀屯鄉(xiāng)人民政府,河南新鄉(xiāng)453600；2.輝縣市畜牧局,河南新鄉(xiāng)453600）

布魯氏菌?。╞rucellosis）是由布魯氏菌引起的人、畜共患慢性傳染病.在牛、羊、豬中最常發(fā)生,且可由牛、羊、豬傳染于人和其他家畜.其特征是生殖器官和胎膜發(fā)炎,引起流產(chǎn)、不育和各種組織的局部病灶.人感染本病,又稱地中海弛張熱、馬爾他熱、波浪熱或波狀熱.它給畜牧業(yè)和人類的健康帶來嚴(yán)重危害,OIE將本病列為B類動物疫病,國家獸醫(yī)行政主管部門將其列為二類疫病,確定為重點病進(jìn)行防控.羊布魯氏種菌毒力最強(qiáng)（我國有3個布魯氏菌生物亞型）,豬種次之,牛種較弱,羊群感染病例較多,影響范圍也較大.本文簡述了羊布魯氏菌病流行特點診斷防治措施.

1 臨床病狀及流行特點

病原為羊種馬耳他布魯氏菌（生物型1～3）,綿羊型副睪種綿羊布魯氏菌只感染綿羊,羊種布魯氏菌較其他種致病力最強(qiáng).主要存在于病畜的生殖器官、內(nèi)臟、和血液.該菌對外界的抵抗力很強(qiáng),在干燥的土壤中可存活數(shù)月,在皮毛中可生存3-4個月,在乳制品中可生存數(shù)周至數(shù)月,在凍肉中可存活2～7周.在冷暗處和胎兒體內(nèi)可生存6個月.病菌在日光直射、消毒藥和干燥條件下,抵抗力較弱.在腐敗的動物體內(nèi)很快死亡；日光照射10～20min,60℃30 min,80～95℃5 min可將其殺死；對常用化學(xué)消毒劑均較敏感.傳播途徑一是經(jīng)皮膚黏膜感染,二是通過消化道感染,三是經(jīng)呼吸道感染.消化道是主要感染途徑,也可以通過配種感染.一年四季都有發(fā)生,但有明顯的季節(jié)性.羊種布魯氏菌病春季開始,夏季達(dá)到高峰,秋季下降.牧區(qū)發(fā)病率明顯高于農(nóng)區(qū),牧區(qū)存在自然疫源地,但流行強(qiáng)度受菌種、氣候、生產(chǎn)管理條件等條件的影響.造成本病的流行有社會因素和自然因素.社會因素包括防疫檢疫制度的貫徹落實,動物及其產(chǎn)品的貿(mào)易和流通等情況,都可能造成本病的傳播.自然因素包括風(fēng)雪、洪水、干旱等情況,造成動物大量流動,增加了本病的傳播幾率.動物是主要的帶菌者,除相互傳染外,動物及其產(chǎn)品還可以傳染人類,近幾年人感染的病例有增加的趨勢.

羊群一旦感染此病,首先表現(xiàn)孕羊流產(chǎn),開始僅為少數(shù),以后逐漸增多,嚴(yán)重時可達(dá)半數(shù)以上,多數(shù)病羊流產(chǎn)1次.羊布魯氏菌病多數(shù)病例為隱性感染,懷孕羊發(fā)生流產(chǎn)是羊布魯氏菌病的重要癥狀,流產(chǎn)多發(fā)生在懷孕后的3～4個月,流產(chǎn)胎兒多已死亡,成活者虛弱發(fā)育不良,產(chǎn)后陰道持續(xù)排出黏液或膿液,出現(xiàn)慢性子宮炎的表現(xiàn),致使病羊不孕.有時患病發(fā)生關(guān)節(jié)炎和滑液囊炎而致跛行,尤其是后肢多發(fā),公羊發(fā)生睪丸炎,少部分病羊發(fā)生角膜炎和支氣管炎.母羊較公羊易感性高,性成熟后對本病極為易感.

2 發(fā)病機(jī)理

布魯氏菌自皮膚或粘膜進(jìn)入肌體后,即為吞噬細(xì)胞所吞噬,并循淋巴液到達(dá)局部淋巴結(jié).若機(jī)體抗菌能力強(qiáng),病菌即被消滅.反之,吞噬細(xì)胞未能將病菌殺滅,則在細(xì)胞內(nèi)生長繁殖,形成局部原發(fā)病灶.細(xì)菌在吞噬細(xì)胞內(nèi)大量繁殖導(dǎo)致吞噬細(xì)胞破裂,并隨之大量進(jìn)入淋巴液和血液形成菌血癥.細(xì)菌隨血液至全身,在肝、脾、淋巴結(jié)、骨髓等處的單核一吞噬細(xì)胞系統(tǒng)內(nèi)繁殖,形成多發(fā)性病灶.由于變態(tài)反應(yīng)及病原苗主要在細(xì)胞內(nèi)繁殖,抗體及抗菌藥物不易進(jìn)入,故難以根治.當(dāng)機(jī)體免疫功能正常時,細(xì)胞和體液免疫協(xié)同作用清除病菌而獲痊愈.如果免疫功能不健全,或感染菌量大、毒力強(qiáng),則部分細(xì)菌逃脫免疫,又可被吞噬細(xì)胞吞噬帶人各組織器官形成新感染灶.經(jīng)一定時期后感染灶的細(xì)菌生長繁殖再次入血,導(dǎo)致疾病復(fù)發(fā),發(fā)熱呈波狀型（又稱波狀熱）.布魯氏菌進(jìn)入絨毛膜上皮細(xì)胞內(nèi)增殖,產(chǎn)生胎盤炎,并在絨毛膜與子宮膜之間擴(kuò)散,產(chǎn)生子宮內(nèi)膜炎.在絨毛膜上皮細(xì)胞內(nèi)增殖時,使絨毛發(fā)生漸進(jìn)性壞死,同時產(chǎn)生一層纖維性膿性分泌物,逐漸使胎兒胎盤與母體胎盤松離.此菌還可進(jìn)入胎衣中,并隨羊水進(jìn)入胎兒引起病變.由于胎兒胎盤與母體胎盤之間松離,及由此引起胎兒營養(yǎng)障礙和胎兒病變,使母畜可發(fā)生流產(chǎn).此菌侵入乳腺、關(guān)節(jié)、睪丸等也可引起病變.妊娠子宮（胎盤、胎兒、胎衣）、睪丸、乳房、淋巴結(jié)、關(guān)節(jié)囊特別適宜布魯氏菌繁殖.本病的發(fā)病機(jī)理以型遲發(fā)變態(tài)反應(yīng)為主,變態(tài)反應(yīng)發(fā)生在骨、關(guān)節(jié)和神經(jīng)系統(tǒng),表現(xiàn)為關(guān)節(jié)炎、骨髓炎和神經(jīng)炎等.此外,尚可有睪丸炎.

3 剖檢病變

常見的病變是胎衣部分或全部呈黃色膠樣浸潤,其中有部分覆有纖維蛋白的膿液,胎衣增厚,并有出血點.流產(chǎn)胎兒主要為敗血癥病變,漿膜與黏膜有出血點與出血斑,皮下和肌肉間發(fā)生漿病性浸潤,脾臟和淋巴結(jié)腫大,肝臟中出現(xiàn)壞死灶.公羊發(fā)生該病時,可發(fā)生化膿壞死性睪丸炎和付睪炎,睪丸腫大,后期睪丸萎縮.

4 診斷

羊布魯氏菌病的診斷主要依據(jù)流行病學(xué)、臨床癥狀和實驗室檢驗.發(fā)現(xiàn)可疑羊只后,應(yīng)首先觀察有無布魯氏菌病的特點,如流產(chǎn)、胎盤滯留、關(guān)節(jié)炎或睪丸炎等,了解傳染源與患病動物接觸史,最后通過實驗室檢查進(jìn)行確診.

實驗室檢驗有很多,鑒別診斷：要與其它有流產(chǎn)癥狀的疫病進(jìn)行區(qū)別,鑒別診斷的主要方法是病原體的分離鑒定和特異抗體的檢出.

病原學(xué)診斷：進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)和鑒定.

血清學(xué)診斷：血清學(xué)試驗即可作出迅速診斷,包括：①試管凝集試驗,②虎紅平板凝集試驗,③含巰基化合物處理血清后的凝集試驗,④抗球蛋白試驗,⑤補(bǔ)體結(jié)合試驗,⑥酶聯(lián)免疫吸附試驗.

乳環(huán)狀試驗：乳汁中存在特異性抗體時,當(dāng)加入帶顏色的布魯氏菌抗原可出現(xiàn)凝集反應(yīng),但患有乳房炎動物的乳,不能用作試驗.

皮膚過敏反應(yīng)：當(dāng)機(jī)體受布魯氏菌抗原作用后,導(dǎo)致T細(xì)胞致敏,致敏的T細(xì)胞再遇到相同抗原,能釋放出各種淋巴因子,局部皮膚變態(tài)反應(yīng)就是各種淋巴因子作用的結(jié)果.檢查羊時,在尾部注射0.1 ml布魯氏菌素,在羊只尾部能觸摸到腫塊為陽性；

分子生物學(xué)診斷：包括：①DNA同源性研究,②DNA限制性內(nèi)切核酸酶圖譜分析,③PCR擴(kuò)增,④核酸探針檢測.

目前常用的鑒別診斷方法,主要依據(jù)農(nóng)業(yè)部的《布魯氏菌病防治技術(shù)規(guī)范》.

4.1 細(xì)菌學(xué)診斷

4.1.1 顯微鏡檢查 采取胎衣、絨毛膜水腫液、胎兒胃內(nèi)容物或有病變的肝、脾、淋巴結(jié)等組織,制成抹片,用柯茲羅夫斯基染色法染色,鏡檢,如果發(fā)現(xiàn)有紅色球桿狀小桿菌時,即可確診.

4.1.2 分離培養(yǎng) 新鮮病料可用血液瓊脂斜面、肝湯瓊脂斜面和3%甘油0.5%葡萄糖肝湯瓊脂斜面等培養(yǎng)基培養(yǎng)；若為陳舊病料時,可在培養(yǎng)基中加入1/20萬的龍膽紫培養(yǎng).培養(yǎng)時,一份在普通條件下,另一份放于含有5%～10%二氧化碳的環(huán)境中,37℃培養(yǎng)7～10 d.然后進(jìn)行菌落特征檢查和單價特異性抗血清凝集試驗可確診布魯氏菌.

4.1.3 動物試驗 如病料被污染或含菌極少時,可將病料用生理鹽水制成5～10倍乳劑,注射健康豚鼠腹腔內(nèi)0.1～0.3 mL.如果病料腐敗時,可接種于豚鼠的股內(nèi)側(cè)皮下.接種后4～8周,將豚鼠撲殺,從肝、脾分離培養(yǎng)布魯氏菌.

4.2 血清學(xué)試驗

4.2.1 初篩試驗 動物布病虎紅平板凝集試驗（RBPT）；動物布病全乳環(huán)狀試驗(MRT)）.可任選一種試驗方法.

4.2.2 正式試驗 動物布病試管凝集試驗(SAT)；動物布病補(bǔ)體結(jié)合試驗(CFT).可任選一種試驗方法.普通實驗室常用虎紅平板凝集試驗更簡便易行.其方法是,將被檢血清與布魯氏菌虎紅平板抗原各0.03 mL滴于玻璃板上,然后混勻,在室溫下,4～10 min內(nèi)判定結(jié)果,出現(xiàn)凝集現(xiàn)象的判為陽性反應(yīng),完全不凝集的判為陰性.大群檢疫,可用血清平板凝集試驗和變態(tài)反應(yīng)檢查.

5 防治

羊布魯氏菌病無治療價值,按照農(nóng)業(yè)部《布魯氏菌病防治技術(shù)規(guī)范》的要求,應(yīng)采取以凈化為主的綜合防控措施.任何單位和個人發(fā)現(xiàn)患有本病或者疑似本病的動物,都應(yīng)當(dāng)及時向當(dāng)?shù)貏游锓酪弑O(jiān)督機(jī)構(gòu)報告,依法采取確診、劃定疫區(qū)、封鎖、隔離、撲殺、無害化處理、緊急免疫、消毒等措施.

5.1 建立健全檢疫制度

凡調(diào)撥采購的綿羊或山羊,都必須進(jìn)行檢疫.在產(chǎn)地作過檢疫的,還須做好復(fù)檢工作,防止帶入病羊.對于檢疫為陽性或可疑反應(yīng)的,應(yīng)進(jìn)行無害化處理,嚴(yán)禁引入羊群.

5.2 積極做好傳染源的處理

（1）在發(fā)病地區(qū)或農(nóng)牧場,必須把病羊和可疑羊隔離開來,另成一群.其余羊可認(rèn)為是暫時安全的,半年之后再做進(jìn)一步檢查.

（2）病羊隔離后,應(yīng)固定用具、草場及水源,指定專人喂養(yǎng),加強(qiáng)飼養(yǎng)管理,促進(jìn)康復(fù)自愈.對病羊污染的牧場、水源、圈舍及飼料等,用10%漂白粉、3%來蘇兒、5%石炭酸或20%生石灰乳劑進(jìn)行消毒.

（3）病羊的糞便,應(yīng)堆在特定的糞池內(nèi),經(jīng)過兩個月以上的泥封發(fā)酵（生物學(xué)消毒）后,才可利用.

（4）為了培育健康羊群,應(yīng)設(shè)立產(chǎn)房,把病羊所產(chǎn)羔羊徹底消毒后,送到另一個地方,進(jìn)行人工哺乳.經(jīng)過8～9個月之后,進(jìn)行兩次血清學(xué)檢查,如為陰性,才可送到健康羊群.

（5）對病羊的胎衣和流產(chǎn)胎兒應(yīng)燒毀或深埋,對病畜的體表及污染地面進(jìn)行徹底消毒.

5.3 認(rèn)真做好預(yù)防接種

5.3.1 19號豬型（S19）菌苗 對綿羊具有一定預(yù)防效果,不適用于山羊.應(yīng)用時,給頸部或尾根皮下注射2.5 mL（250億菌體）.免疫期為6～12個月.在接種不當(dāng)時,會引起大量流產(chǎn),給生產(chǎn)上造成嚴(yán)重?fù)p失,因此使用時必須嚴(yán)格遵守相關(guān)規(guī)程.

5.3.2 干燥布魯氏菌豬型二號（S2）菌苗 綿羊和山羊均可使用.免疫效果好,易推廣使用.

5.3.3 羊型五號（M5）菌苗 羊型五號疫苗是我國研制的疫苗,安全有效,用后4個月血清凝集素即可消失,免疫期在1 a以上.可以在牧區(qū)全面開展預(yù)防,有效地控制本病的流行.

6 小結(jié)

在羊布魯氏菌病的防治工作中,要始終堅持“預(yù)防為主”的防疫原則,預(yù)防為主始終是主方向,同時要做好疫病的診斷檢測工作,搞好疫情監(jiān)測診斷是布病防制乃至整個獸醫(yī)衛(wèi)生事業(yè)的重要內(nèi)容.本文對羊布魯氏菌病流行特點診斷和防治措施的扼要,具有十分重大的意義.

[1]李金嶺.布魯氏菌病的流行情況及檢測手段.獸醫(yī)導(dǎo)刊[J].2008,（1）：18.

[2]鐘映梅,孫剛,張俊峰,等.應(yīng)用間接酶聯(lián)免疫吸附試驗方法與常規(guī)方法診斷牛、羊布魯氏菌病的比較試驗[J].中國地方病防治雜志.2009,24（1）：36-37.

[3]段增芳,馮永平.試論羊布魯氏菌病的綜合防制[J].山西農(nóng)業(yè)（畜牧獸醫(yī)）,2008,（7）：11-12.

[4]項智多杰,嚴(yán)壽,周本太,等.牛羊布魯氏菌病防治效果調(diào)查及工作對策[J].草業(yè)與畜牧,2008,151（6）：36-39.

[5]閆若潛,李桂喜，孫清蓮.動物疫病防控工作指南[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社,2008：172-176.