不同治法對ALI/ARDS大鼠炎性相關因子作用的影響

蘇景深 孫增濤 劉恩順 劉 偉 關 鵬 天津中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院（300150）

不同治法對ALI/ARDS大鼠炎性相關因子作用的影響

蘇景深 孫增濤 劉恩順 劉 偉 關 鵬 天津中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院（300150）

目的 觀察瀉肺法、通腑法、通腑瀉肺法對實驗性大鼠ALI/ARDS炎性細胞因子干預作用。方法 采用油酸加內毒素方法復制大鼠ALI/ARDS模型，分別采用瀉肺方、通腑方、通腑瀉肺方灌胃。結果 第三天時，治肺組、治腸組及肺腸同治組大鼠血清TNF-α較模型組明顯降低（P＜0.01）；治腸組與肺腸同治組較模型組IL-1β明顯降低（P＜0.01）；治肺組和治腸組較模型組IL-6含量降低（P＜0.05）；第七天時，治肺組、治腸組及肺腸同治組大鼠血清TNF-α較模型組明顯降低（P＜0.01）；治腸組與肺腸同治組IL-1β明顯降低（P＜0.01）；治肺組IL-6含量降低（P＜0.05）。對腫瘤壞死因子三者都改善明顯，且三組之間無明顯差異；對IL-1β改善水平治腸組和肺腸同治組明顯優(yōu)于治肺組；對IL-6改善水平治肺組要優(yōu)于治腸組和肺腸同治組。結論 瀉肺法、通腑法和通腑瀉肺法均可以降低大鼠血清中炎性細胞因子水平，改善動物的生存狀態(tài)，通過降低血清細胞因子水平，減輕肺組織和全身的炎癥損傷。三組對血清炎性細胞因子水平均有改善效果，但他們作用靶點不同，存在不同的作用機制。

通腑瀉肺法；急性肺損傷；急性呼吸窘迫綜合征；炎性細胞因子

ALI/ARDS是一種常見危重癥，幾乎涉及各個臨床學科，發(fā)病率居高不下，最近的資料[1,2]顯示，ALI/ARDS的發(fā)病率為79/10萬和59/10萬人，病死率高達50%～60%[3]，嚴重威脅著患病人群的生命安全。中醫(yī)文獻中雖無ALI/ARDS的病名，但根據其臨床所表現的呼吸窘迫、發(fā)紺、便秘、腹?jié)M等特點，一般將之歸屬于“暴喘”、“結胸”、“腑實”等范疇。針對其臨床表現，中醫(yī)從“肺與大腸相表里”這一體現臟腑相關的整體觀的理論出發(fā)，將其病機特點概括為肺腸同病。現分別用瀉肺法、通腑法、通腑瀉肺法干預實驗性ALI/ARDS大鼠，觀察各組大鼠血氣水平、炎癥細胞因子變化，探討其干預機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 健康wistar大鼠100只，雄性、體重200± 20g，購自天津市山川紅實驗動物科技有限公司（許可證號：SCXk（津）2009—0001），購入后置天津中醫(yī)藥大學動物實驗中心常規(guī)飼養(yǎng)。

1.1.2 藥物及試劑 通腑瀉肺方（葶藶子20g，丹參30g，桑白皮20g，大黃30g，枳實10g，厚樸10g）、通腑方（大黃30g，枳實10g，厚樸10g）、瀉肺方（葶藶子20g，丹參30g，桑白皮20g）中藥顆粒劑，購自天津中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院藥房。生藥劑量，依照人體單位體重生藥量求得大鼠單位體重生藥量。用蒸餾水配置通腑瀉肺方（生藥濃度1.08g/ml），通腑方（生藥濃度0.45 g/ml）、瀉肺方（生藥濃度0.63 g/ml），4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

大腸桿菌內毒素脂多糖（LPS），SIGMA，美國（編號：L2880 血清型055:B5）。油酸（分析純），天津運盛化學品有限公司.。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物分組 按體重將大鼠隨機分為五組：正常對照組、模型組、治肺組、治腸組和肺腸同治組，每組20只。

1.2.2 模型建立 動物購入后適應性飼養(yǎng)一周，參照文獻[4]的造模方法并加以改進。正常對照組大鼠于左側尾靜脈注射生理鹽水0.12ml/kg，2h后于右側尾靜脈再次注射生理鹽水1ml/kg；其他各組于左側尾靜脈注射油酸0.12ml/kg，間隔2h后選右側尾靜脈注射內毒素1mg/kg復制ARDS模型。

1.2.3 實驗動物給藥 空白組與模型組在造模完成后即用生理鹽水灌服，每次0.01ml/g。治肺組、治腸組、肺腸同治組在造模完成后即用分別采用治肺方、治腸方、通腑瀉肺方灌胃，每次0.01ml/g。

1.2.4 采樣和制備 分別在造模第三天和第七天于各組隨機抽取10只大鼠，水合氯醛 350mg/kg腹腔麻醉，仰臥固定。打開胸腹腔，行支氣管肺泡灌洗、腹主動脈取血并取肺腸組織。

1.2.5 血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10含量的含量測定 ELISA法檢測，操作流程依照試劑盒說明書。

1.3 統(tǒng)計方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包，各項指標以均值±標準差()，計量資料進行ANOVA單因素方差分析，LSD法作兩兩比較；以P＜0.05表示差異顯著意義，P＜0.01表示差異有非常顯著意義。

2 結果

2.1 第三天 大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10結果 與正常組相比，模型組大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10含量均明顯升高（P＜0.01）治肺組、治腸組及肺腸同治組大鼠血清TNF-α較模型組明顯降低（P＜0.01）；治腸組與肺腸同治組較模型組IL-1β明顯降低（P＜0.01）；治肺組和治腸組較模型組IL-6含量降低（P＜0.05）；治腸組、治肺組及肺腸同治組IL-10含量較模型組無明顯降低（P＞0.05）。

2.2 第七天 大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10結果 與正常組相比，模型組大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10含量均明顯升高（P＜0.01）；治肺組、治腸組及肺腸同治組大鼠血清TNF-α明顯降低（P＜0.01）；治腸組與肺腸同治組IL-1β明顯降低（P＜0.01）；治肺組IL-6含量降低（P＜0.05）；治腸組、治肺組及肺腸同治組IL-10含量無明顯降低（P＞0.05）。

3 討論

目前認為，參與ALI/ARDS的炎癥介質超過40種，其中最重要的也是研究最多的包括促炎細胞因子和抗炎細胞因子，而又以TNF-、IL-6、IL-1和IL-10為最，它們與ALI的發(fā)病及死亡關系密切[5]。

多種炎性細胞因子與ALI/ARDS的發(fā)病有關，TNF-α、IL-1β具有進一步觸發(fā)炎癥反應的作用，被稱為“早期反應細胞因子”。TNF是細胞因子網絡的關鍵部分，TNF-α對肺有強烈的毒性，能誘導肺內皮細胞活化、白細胞遷移、粒細胞脫顆粒和毛細血管滲漏，積聚的水腫液進一步阻礙了肺泡細胞的灌流和氧氣交換，引起ARDS。TNF-α小量時作為旁分泌在局部發(fā)揮作用，大量時入血作用于全身。IL-1β主要活化巨噬細胞、血管內皮細胞，可導致白細胞和內皮細胞上的胞間黏附分子(ICAM)上調，并且導致動物模型的類休克狀態(tài)[6,7,8]。治肺組、治腸組和肺腸同治組在改善血清TNF-α水平均有明顯效果但三者之間無明顯差異。在改善IL-1β水平方面，治腸組與肺腸同治組均可改善血清中IL-1β水平，但二者之間無明顯差異；治肺組沒有出現統(tǒng)計學意義的改善。IL-6，主要由TNF-α、IL-1β刺激AM分泌，其在ALI/ARDS患者BAL中濃度很高并能促進急性期反應。對IL-6轉錄水平調節(jié)機制的研究發(fā)現，在機體對抗敗血癥的反應中IL-6 mRNA的產生與NF-κB、IL-6活化有關。在改善血清IL-6水平方面，治肺組有明顯效果；治腸組僅在第三天時有統(tǒng)計學意義改善；肺腸同治組無明顯效果。IL-10作為一種抗炎因子，能有效抑制AM釋放前炎性介質，但是由于其表達量極低，其抗炎效應常不明顯。三組對IL-10水平改善未出現統(tǒng)計學意義差異。

本實驗結果表明運用瀉肺法、通腑法和通腑瀉肺法均可以降低大鼠血清中炎性細胞因子水平，改善動物的生存狀態(tài)；通過降低血清和肺部炎癥細胞因子水平，減輕肺組織和全身的炎癥損傷。對腫瘤壞死因子都三組改善明顯，且三組之間無明顯差異；對IL-1β改善水平治腸組和肺腸同治組明顯優(yōu)于治肺組；對IL-6改善水平治肺組要優(yōu)于治腸組和肺腸同治組。對血清炎癥細胞因子的干預效果，治肺組、治腸組、肺腸同治組均有效果，但可以看出他們作用靶點不同，提示他們對炎性細胞因子的作用存在不同的機制。

中國傳統(tǒng)醫(yī)學理論體系對疾病的認識從整體出發(fā)，臟腑表里相合是其中重要內容，肺與大腸相表里是其代表。肺與大腸通過升降出入的氣化功能和津液的敷布，使兩者保持著正常的功能。正如唐宗海在《醫(yī)精經義》中所說：“肺合大腸，大腸者，傳導之腑……謂傳導肺氣，使不逆也”，“大腸之所以能傳導者，以其為肺之腑。肺氣下達，故能傳導”。肺氣肅降功能與大腸傳導功能生理上互為動力，病理上相互影響，治療上相互為用。瀉肺方用葶藶子，性大寒，味辛、苦，歸肺、膀胱經，功能瀉肺平喘，行水消腫；桑白皮，甘寒入肺，功能瀉肺平喘，利水消腫；丹參，味苦微寒，功能活血化瘀，改善肺微循環(huán)，增加肺血流量及增強肺泡通氣功能。通腑方用小承氣湯，方中大黃瀉熱通便，厚樸行氣散滿，枳實破氣消痞，諸藥合用，可以輕下熱結，除滿消痞。通腑瀉肺方二者合用，既可瀉肺平喘，又能通腑瀉熱，肺腸同治。

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[3] Song ZF, Guo XH, Wang SY, et al. Evaluation of glucocorticoid intreatment for patients with acute respiratory distress syndrome[J].Chinese Critical Care Medicine,2003,15(6):349-353.

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2010-07-30）