淺談尿沉渣檢查

賈凌筱

伴隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的迅速發(fā)展，檢驗(yàn)技術(shù)的日異更新，各種各樣的尿液分析儀越來越受到各醫(yī)院的普遍應(yīng)用?，F(xiàn)綜述如下。

1 尿液檢查方法

隨著尿液檢查方法的規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化，尿有形成分定量法測(cè)定已被推廣，目前最常用的方法主要有兩種，一種是以顯微鏡為基礎(chǔ)的形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)法，另一種是以流式細(xì)胞術(shù)為原理的流式細(xì)胞計(jì)數(shù)法。DiaSys尿沉渣分析儀按照經(jīng)典的顯微鏡鏡檢方法的流程來設(shè)計(jì)，工作時(shí)通過低倍鏡以多于人工鏡檢檢查量進(jìn)行采樣，然后以低倍鏡抓取目標(biāo)定位后轉(zhuǎn)高倍鏡進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)算機(jī)對(duì)其結(jié)果進(jìn)行處理和換算。

2 尿沉渣手工制片鏡檢

2.1 直接鏡檢法 將尿液充分混勻，取其中1滴尿直接涂于載玻片上，依據(jù)各種有形成分的形態(tài)特點(diǎn)，用顯微鏡觀察作出報(bào)告。

2.2 玻片畫框法 用標(biāo)定好的滴管加混勻尿2滴涂滿蠟筆畫好的25.2 mm×25.2 mm框內(nèi)，靜止3 min后累計(jì)20個(gè)高倍視野細(xì)胞數(shù)，結(jié)果以每微升細(xì)胞數(shù)報(bào)告。細(xì)胞數(shù)/μl=T×1/20×A/B×1/V。式中T=細(xì)胞累計(jì)數(shù)，20=所觀察的視野數(shù)，A=標(biāo)本分布面積，B=高倍視野面積=(高倍視野直徑/2)2.π，V=標(biāo)本用量(μl)，高倍視野直徑=目鏡中光欄直徑/目鏡放大倍數(shù)，光欄直徑可用千分尺測(cè)出。

2.3 自然沉降法 將尿液在室溫下放置一定時(shí)間(15～30 min)后，移去上層的尿液，保留底層大約0.2 ml左右，然后混勻，取其中1滴沉淀于載玻片上，鏡檢同直接鏡檢法。

2.4 離心沉淀法 尿液10 ml離心5 min，相對(duì)離心力(RCF)為400，棄上清留沉渣尿量0.2 ml混勻，吸取20 μl，滴在玻片上用18 mm×18 mm蓋片覆蓋，先用10×10低倍鏡觀察全片，再用10×40高倍鏡仔細(xì)觀察，檢查細(xì)胞至少10個(gè)視野，檢查管型至少20個(gè)低倍視野，報(bào)告以高倍視野所見最低至最高數(shù)字表示。建議國(guó)內(nèi)逐步以每微升細(xì)胞數(shù)報(bào)告。

2.5 染色法 包括濕潤(rùn)染色法及特定成分染色法。

2.6 特殊顯微鏡檢查

2.6.1 相差顯微鏡法 相差顯微鏡又稱相襯顯微鏡，是以光的衍射和干涉現(xiàn)象照射標(biāo)本，產(chǎn)生明暗不同的反差識(shí)別，有助于增強(qiáng)透明與半透明的有形成分的輪廓，尤其是透明管型、不典型紅細(xì)胞、血小板的辨別。

2.6.2 干涉顯微鏡法 在不同位相時(shí)，當(dāng)兩種相同顏色的光波相遇時(shí)，其亮度發(fā)生增強(qiáng)或減弱的變化，從而提高物體的清晰度，可觀察到細(xì)胞或管型的三維空間結(jié)構(gòu)。

2.6.3 偏振光顯微鏡法 利用光的偏振特性對(duì)光有雙折射性的物體進(jìn)行鑒別，可觀察活細(xì)胞的內(nèi)含物、神經(jīng)纖維、植物纖維的結(jié)構(gòu)細(xì)節(jié)和動(dòng)物肌肉纖維等。可分析變性過程，觀察到細(xì)胞的死活:正常細(xì)胞對(duì)光偏振呈左旋，腫瘤細(xì)胞多數(shù)呈右旋，可顯示鹽類結(jié)晶在自然光下見不到的精細(xì)結(jié)構(gòu)。

2.6.4 透射電鏡法 利用電子束作為“照明波源”可明顯提高分辨率，將尿沉渣標(biāo)本切成超薄片在電子顯微鏡下觀察，可準(zhǔn)確分辨出細(xì)菌管型、白色念珠菌管型、血小板管型、粗顆粒管型和細(xì)顆粒管型等。

3 尿沉渣定量計(jì)數(shù)板法

取一定量(10 ml)尿液置特制的離心管內(nèi)，在規(guī)定離心時(shí)間和轉(zhuǎn)速的條件下離心沉淀，移去上清尿液，保留一定量的尿沉淀物，取1滴滴入計(jì)數(shù)板內(nèi)，在顯微鏡下計(jì)數(shù)，然后換算成一定體積(1/μl)內(nèi)尿有形成分的含量。

3.1 Li-Ucc型尿沉渣計(jì)數(shù)板 計(jì)算室為正方形邊長(zhǎng)9 mm，池深0.125 mm，混勻尿滴入池內(nèi)計(jì)數(shù)規(guī)定區(qū)結(jié)果除以5，細(xì)胞少時(shí)計(jì)數(shù)全室結(jié)果除以10，即為每微升細(xì)胞數(shù)。

3.2 牛鮑計(jì)數(shù)板法 將混勻尿充池，計(jì)數(shù)9大格細(xì)胞數(shù)×10÷9，即為每微升細(xì)胞數(shù)。

3.3 FR定量板法 混勻尿10 ml于Biostd離心管內(nèi)，經(jīng)1 500 r/min離心5 min，傾去上清余0.25 ml沉渣即留在管底縮小區(qū)內(nèi)，將沉渣混勻滴入FR板內(nèi)，計(jì)數(shù)10大格即得每微升細(xì)胞數(shù)。每板10人份一次性使用，保濕，細(xì)胞形態(tài)及分布穩(wěn)定。

4 干化學(xué)法

將試劑包含在纖維素中作為反應(yīng)部分黏附在塑料支持片上干燥而成試紙帶，以鏡檢為標(biāo)準(zhǔn)半定量檢測(cè)尿中成分。1996年的推薦方法中確定，干化學(xué)檢驗(yàn)只有符合下列四項(xiàng)要求才可以不作鏡檢:尿白細(xì)胞結(jié)果為陰性;紅細(xì)胞結(jié)果陰性;尿蛋白為陰性;亞硝酸鹽為陰性。來源于腎科標(biāo)本不適合干化學(xué)篩選，應(yīng)一律顯微鏡檢查。

5 尿沉渣自動(dòng)化分析

尿沉渣分析自動(dòng)化的研究由來己久，但難度較大。直到1986年才由美國(guó)國(guó)際遙控?cái)z像系統(tǒng)有限公司研制生產(chǎn)了世界上第一臺(tái)高速攝像機(jī)式的尿沉渣自動(dòng)分析儀。目前，尿沉渣分析儀主要有兩大類:基于尿沉渣鏡檢影像分析原理;基于尿沉渣流式細(xì)胞術(shù)和電阻抗檢測(cè)原理。影像式尿沉渣(或稱“工作站”)其檢測(cè)原理與人工顯微鏡檢查原理基本相似，都是直觀地觀察有形成分的形態(tài)，但須經(jīng)過嚴(yán)格的定時(shí)、定速離心，而后留取定量的尿沉渣，由配套動(dòng)力裝置將其轉(zhuǎn)移至顯微鏡載物臺(tái)上刻有標(biāo)尺的流動(dòng)樣品池內(nèi)，通過頻閃光源燈、相聚光鏡、彩色攝像機(jī)等，在電腦顯示屏上得到清晰的尿沉渣畫面，再由操作者在屏幕上統(tǒng)計(jì)出各種有形成分的數(shù)目，由計(jì)算機(jī)自動(dòng)換算成每微升單位的數(shù)據(jù)。同普通光學(xué)顯微鏡方法相比，其分析標(biāo)準(zhǔn)定量、視野清晰、速度快捷、準(zhǔn)確度高。在全自動(dòng)尿沉渣分析檢測(cè)分析中，應(yīng)用流式細(xì)胞和電阻抗分析的原理:尿液中細(xì)胞等經(jīng)熒光色素染色后，在鞘流液的作用下，形成單個(gè)、縱列細(xì)胞流，通過氬激光檢測(cè)區(qū)，儀器檢測(cè)熒光、散射光和電阻抗的變化;當(dāng)儀器在捕獲了熒光強(qiáng)度Fl、前向熒光脈沖寬度Flw、前向散射光強(qiáng)度Fsc、前向散射光脈沖寬度Fscw、電阻抗信號(hào)后，綜合識(shí)別和計(jì)算得到了相應(yīng)細(xì)胞的大小、長(zhǎng)度、體積和染色質(zhì)長(zhǎng)度等資料，并做出紅細(xì)胞、白細(xì)胞、細(xì)菌、管型等的散射圖及定量報(bào)告。

［1］叢玉?。簩W(xué)體液學(xué)檢驗(yàn)與臨床釋疑．北京:人民軍醫(yī)出版社，2004，58:66-68．

［2］溫潔新，顧可梁，陳巧林，等．尿液有形成分三種檢測(cè)方法的對(duì)比分析．江西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)，2005，23(2):125-126．