MVD=cL/λ公式在細(xì)菌內(nèi)毒素檢查中的應(yīng)用

吳桂英 黃振華

MVD=cL/λ公式在細(xì)菌內(nèi)毒素檢查中的應(yīng)用

吳桂英 黃振華

通過MVD=cL/λ公式的靈活應(yīng)用，可做到鱟試劑品種之間的相互替代，擴(kuò)大每一種鱟試劑的使用范圍，避免鱟試劑的過期浪費(fèi)，是一種全新的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查工作思路。不管遇到何種檢品，都能方便、快捷的完成檢品任務(wù)。

細(xì)菌內(nèi)毒素鱟試劑MVD=cL/λ最大有效稀釋倍數(shù)

自從20世紀(jì)60年代發(fā)現(xiàn)鱟血總凝集機(jī)制以后，很快引起了世界各國藥學(xué)界的重視，并在很多實(shí)驗(yàn)室展開了廣泛的研究，我國的研究起步雖然較晚，但細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法作為更簡便有效的熱原檢查法仍被《中國藥典》95版收載應(yīng)用。在隨后的2000版、2005版、2010版藥典中所占熱原檢查的比重越來越大，在今后有望代替80%以上的家兔試驗(yàn)。因此細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法在全國藥檢機(jī)構(gòu)中已成為重要的檢驗(yàn)項(xiàng)目之一。

1 我國目前的現(xiàn)狀

為了適應(yīng)日益擴(kuò)大的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查工作，我國日前已有八家公司生產(chǎn)供應(yīng)鱟試劑，而且各公司生產(chǎn)的鱟試劑品種規(guī)格越來越全，在市面上一般均能購買所需的各種鱟試劑，開展細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)很方便。因此，一般基層的藥檢所大都將鱟試劑品種預(yù)備得很全，以滿足檢驗(yàn)工作的需要。有時(shí)，如果遇到缺失的品種，檢品就會(huì)被擱置，影響檢驗(yàn)工作的正常運(yùn)行。

2 檢驗(yàn)中存在的問題

由于生產(chǎn)鱟試劑的廠家較多，生產(chǎn)工藝存在差異，其內(nèi)在成分也不相同，因此，各廠家生產(chǎn)和鱟試劑的效期都很短，一般只有兩年，特別是在基層偏遠(yuǎn)的藥檢所，做不到現(xiàn)購使用，如果扣除購置運(yùn)輸?shù)臅r(shí)間，實(shí)際上藥檢所只有一年半左右的使用期限。鱟試劑購置太多太全，由于抽查檢驗(yàn)的藥品種類的不確定性，有很多鱟試劑還沒排上用場就已過期了，以此造成很大的經(jīng)濟(jì)浪費(fèi)是普遍存在的問題。

3 MVD=cL/λ公式的應(yīng)用

在各版藥典中均介紹了MVD=cL/λ公式及其說明，供檢驗(yàn)者參考使用。筆者從2000年片版藥典開始對(duì)公式MVD=cL/λ進(jìn)行了靈活的應(yīng)用，并對(duì)使用的鱟試劑品種也作了調(diào)整，盡量擴(kuò)大每一種鱟試劑的使用范圍。具體的做法是:購置幾種常見，有代表性的鱟試劑，如0.5Eu/ml、0.2Eu/ml、0.01Eu/ml來應(yīng)用絕大多數(shù)藥品的檢驗(yàn)工作，收到了良好的效果?；旧献龅搅瞬焕速M(fèi)，或者說過期的鱟試劑很少，一年中只有1～2盒左右，圓滿解決了上述過期浪費(fèi)的問題。

4 MVD=cL/λ的具體應(yīng)用實(shí)例

4.1 實(shí)例1 如果檢驗(yàn)的藥品是注射液，如維生素C注射液，規(guī)格為2 ml:0.5 ml。藥典規(guī)定每1 ml中含內(nèi)毒素量應(yīng)＜2.5Eu。本文用0.5Eu/ml的鱟試劑作為測定試劑，檢驗(yàn)操作如下:首先依據(jù) MVD=cL/λ進(jìn)行計(jì)算，c=1，L=2.5Eu，λ=0.5Eu代入公式，1×2.5/0.5=5倍。將維生素C注射液用鱟試劑溶解水稀釋5倍后可改用0.5Eu/ml的鱟試劑做試驗(yàn)，結(jié)果和2.5 Eu/ml的鱟試劑相同。同理0.5 Eu/ml的鱟試劑還可代替 0.75 Eu/ml、1.0 Eu/ml、1.25 Eu/ml、1.5 Eu/ml、2.0 Eu/ml規(guī)格的鱟試劑進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素測定。反過來說，一個(gè)內(nèi)毒素量限值為2.5 Eu的藥品，可以用2.0 Eu/ml、1.5 Eu/ml、1.0 Eu/ml、0.5 Eu/ml、0.2 Eu/ml規(guī)格中的任何一種鱟試劑代替。只是用到哪一種就將哪一種鱟試劑靈敏度示值代入公式計(jì)算，求出稀釋倍數(shù)即可。其他品種以此類推。就可做到用幾種鱟試劑來開展細(xì)菌內(nèi)毒素檢驗(yàn)工作了。

4.2 實(shí)例2 如果注射液是粉針劑，利用MVD=cL/λ也可象實(shí)例1一樣進(jìn)行計(jì)算。如注射用頭孢拉定，藥典規(guī)定每mg頭孢拉定中含內(nèi)毒素量應(yīng)＜0.2Eu，本文以0.1 Eu/ml作為測定試劑，操作如下:首先計(jì)算:c=1，L=0.2 Eu代入公式，1×0.2/0.1=2倍。即把頭孢拉定由粉末狀稀釋到1 mg/ml濃度后再稀釋2倍，達(dá)到0.5 mg/ml即可。如果改用的不是 0.1 Eu/ml而是 0.05 Eu/ml，計(jì)算為了 c=1，L=0.2 Eu，=0.05 Eu代入公式:1×0.2/0.05=4倍，將頭孢拉定稀釋到0.25 mg/mg即可，其他以此類推。

5 討論

5.1 根據(jù)藥液越稀釋對(duì)鱟試劑的干擾反應(yīng)就越小的原理以及筆者的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，一般用高靈敏度的鱟試劑來代替低靈敏度的鱟試劑是可行的，即以0.5 Eu/ml代替0.75 Eu/ml以上的鱟試劑，對(duì)于注射劑來說也只能由高濃度向低濃度稀釋。對(duì)于注射用粉針劑，藥典規(guī)定將其稀釋度看作1來操作，這樣就出現(xiàn)了由低靈敏度代替高靈敏度鱟試劑的問題。筆者以為是否可以以低靈敏度代替高靈敏度鱟試劑，即以0.75 Eu/ml代替0.5 Eu/ml以下的鱟試劑，要做大量的干擾性試驗(yàn)方能確定，因此，本文不作推薦。

5.2 用于稀釋藥品的注射用水一定要用內(nèi)毒素限量＜0.03 Eu的注射用水或者用鱟試劑溶解水。

［1］李波，蔡彤，張國來.細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的國內(nèi)外發(fā)展概況和存在的問題.中國藥學(xué)雜志，2002，37(12):954.

［2］譚德講，任捃，杜穎，等.熱原和熱原檢測方法的研究進(jìn)展.藥物分析雜志，2004，24(6):653.

［3］細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法//中國藥典，2005版，附錄85.

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