乳腺癌組織中Survivin及C-erB-2的表達(dá)及臨床相關(guān)性

黃 勇, 王 靜, 倫增軍

(山東省棗莊市立醫(yī)院, 山東 棗莊 277001)

乳腺癌是我國女性最常見的惡性腫瘤之一,目前其發(fā)病率呈上升趨勢,其病因尚不清楚,治療為以手術(shù)為主的綜合治療[1]。影響乳腺癌預(yù)后的因素很多,如乳腺腫瘤的大小、腋窩淋巴結(jié)是否受累、組織學(xué)分類、癌細(xì)胞的分化程度、年齡、絕經(jīng)狀態(tài)及激素受體等,但組織形態(tài)學(xué)相同的乳腺癌,預(yù)后也有不同,說明其生物學(xué)特征不盡相同[2]。近年來從多種層面檢測乳腺癌細(xì)胞的生物學(xué)特征,了解腫瘤的惡性程度,指導(dǎo)術(shù)后合理治療及預(yù)后。Survivin及C-erB-2在多種腫瘤組織中的過度表達(dá),也是乳腺癌中常用的基因標(biāo)志物之一。我們檢測156例乳腺癌組織中Survivin及C-erB-2的表達(dá),探討與病理分型、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)的關(guān)系?？偨Y(jié)Survivin及C-erB-2的表達(dá)情況及相互的關(guān)系,分析與乳腺癌生物學(xué)行為和預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料:選擇2001年1月至2006年12月在我院普外科乳腺癌實(shí)施手術(shù)患者156例,均有完整的臨床病理學(xué)資料,術(shù)前均無化療或放療?；颊呔鶠榕?年齡34-78歲,平均年齡56.7歲。腫瘤標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定,石蠟包埋,厚4μ m連續(xù)切片。按免疫組織化學(xué)SP法操作。據(jù)WHO組織學(xué)分級(jí)進(jìn)行病理診斷和分級(jí),浸潤性導(dǎo)管癌(112例)、浸潤性小葉癌(22例)、單純癌(12例)、其它10例(其中髓樣癌4例、導(dǎo)管內(nèi)癌3例、腺癌2例、乳頭狀癌1例)。按Motting-Han分級(jí)法分級(jí):根據(jù)細(xì)胞異型性低、中、高分為1、2、3度,其中腺體形成＞75%,＜10%為1和3度,居兩者之間者為2度。每個(gè)高倍視野下核分裂象平均＜1、1-2和＞2個(gè)(計(jì)數(shù)10個(gè)高倍視野計(jì)算平均值)分為1、2、3度,計(jì)分三項(xiàng)總和8-9度為Ⅲ級(jí),6-7度為Ⅱ級(jí),3-5度為Ⅰ級(jí)。按國際標(biāo)準(zhǔn)TNM 分期,Ⅰ期29例,Ⅱ期104例,Ⅲ期23例。全部患者均行乳癌改良根治術(shù)。146例獲得術(shù)后隨訪,隨訪率93.6%,隨訪時(shí)間為6-40個(gè)月。術(shù)后2年死亡者2例,分別為臨床Ⅱ和Ⅲ期。

1.2 試劑與方法:應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP方法檢測Survivin及C-erB-2的表達(dá)。石蠟切片經(jīng)二甲苯脫蠟,梯度乙醇水化,檸檬酸緩沖液高溫高壓抗原修復(fù),滴加過氧化酶阻斷液室溫10min,磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗,滴加非免疫性動(dòng)物血清室溫10min,滴加一抗即抗Survivin抗體(蒸餾水1∶100稀釋)、抗C-erB-2或抗PCNA,4℃冰箱孵育過夜,PBS沖洗,滴加生物素偶聯(lián)的二抗,室溫10min PBS沖洗,滴加鏈霉素親和素-過氧化物酶溶液,室溫10min,PBS沖洗,滴加DAB顯色,沖洗,蘇木素復(fù)染,封片。已知的Survivin及C-erB-2染色陽性的乳腺癌組織為陽性對(duì)照,以PBS代替一抗為陰性對(duì)照。光鏡下觀察,每片隨機(jī)觀察5個(gè)高倍視野,計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞所占的百分?jǐn)?shù)。

1.3 結(jié)果判斷:①乳腺癌組織Survivin表達(dá)的判斷:Survivin陽性表達(dá)為細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜上呈棕黃色顆粒,著色細(xì)胞數(shù)＞10%為陽性;無著色細(xì)胞或著色細(xì)胞數(shù)≤10%為陰性。②乳腺癌組織C-erB-2表達(dá)的判斷:CerbB-2陽性表達(dá)為細(xì)胞漿和/或細(xì)胞膜著色呈棕黃色顆粒,著色細(xì)胞數(shù)＞10%為陽性;無著色細(xì)胞或著色細(xì)胞數(shù)≤10%為陰性。

1.4 復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移情況:計(jì)算Survivin和C-erB-2雙陽性患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析;數(shù)據(jù)比較采用X2檢驗(yàn),P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

乳腺癌組織中Survivin及C-erB-2陽性表達(dá)率分別為71.8%(112例)及64.7%(101例)。

2.1 Survivin及C-erB-2陽性表達(dá)與乳腺癌病理分型、腫瘤大小無關(guān)(P＞0.05),與組織學(xué)分級(jí)、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目相關(guān),差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。Survivin及C-erB-2陽性表達(dá)隨著乳腺癌組織分化程度降低,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目增加,TNM分期增高而增強(qiáng)。

表1 Survivin、C-erB-2及PCNA表達(dá)與腫瘤大小、病理分型、組織學(xué)分級(jí)、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系(n)

2.2 乳腺癌中Survivin和C-erB-2的表達(dá)呈正相關(guān)(P＜0.05,r=0.63),見表2。

表2 Survivin和C-erB-2的表達(dá)的關(guān)系(n)

2.3 Survivin和C-erB-2雙陽性患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率高于雙陰性患者(P＜0.05),見表3。

表3 Survivin和C-erB-2的雙陽性表達(dá)與患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系(n)

3 討 論

細(xì)胞凋亡是機(jī)體重要的病理生理過程,諸多因素參與,凋亡的異常抑制與惡性腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展以及耐藥性的產(chǎn)生密切相關(guān)[3,4]。IAP(inhibitor of apoptosis proteins,凋亡抑制蛋白)在凋亡的負(fù)性調(diào)控中起重要作用[5]。Survivin是IAP家族新成員,其正常情況下僅表達(dá)于胚胎組織,可再表達(dá)于多種惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞株和惡性腫瘤組織[6]。Survivin不僅抑制細(xì)胞凋亡,還參與有絲分裂的調(diào)節(jié)。Survivin可直接抑制Caspase-3和Caspase-7的活性,阻止細(xì)胞凋亡,與細(xì)胞增殖、分裂和細(xì)胞周期控制密切相關(guān),Survivin可作為某些癌的預(yù)后和復(fù)發(fā)的標(biāo)志,與癌的發(fā)生、轉(zhuǎn)移有一定的關(guān)系[7]。本研究表明乳腺癌組織中Survivin陽性表達(dá)率為71.8%,其表達(dá)隨癌組織分化程度降低,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目增加,TNM分期增高而增強(qiáng)。提示Survivin在乳腺癌早期即起作用并持續(xù)于浸潤轉(zhuǎn)移過程中,其表達(dá)可作為乳腺癌組織分化及預(yù)后的重要指標(biāo)。

C-erB-2癌基因又稱neu或HER-2在胎盤、胚胎上皮組織及許多腫瘤細(xì)胞中呈高表達(dá),而在正常組織中為陰性或微量表達(dá)。其過度表達(dá)在致瘤轉(zhuǎn)化和腫瘤發(fā)生中起關(guān)鍵作用。研究表明HER-2陽性可作為乳腺癌的一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后指標(biāo)。其過表達(dá)的乳腺癌表現(xiàn)為病情進(jìn)展迅速、局部復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)性高、化療緩解期短,無病生存期和總生存期縮短[8]。本研究顯示乳腺癌組織中C-erbB-2陽性表達(dá)率為64.7%,其表達(dá)隨著癌組織分化程度降低,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目增加,TNM分期增高而增強(qiáng)。研究還發(fā)現(xiàn)Survivin和C-erB-2的表達(dá)呈正相關(guān),提示乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移過程中兩基因具有協(xié)同作用。Survivin和C-erB-2的表達(dá)既有不同的生物學(xué)意義,又有相關(guān)性,Survivin陽性組中C-erB-2陽性率明顯高于Survivin陰性組。凋亡抑制基因Survivin和原癌基因C-erbB-2可能在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起重要作用,Survivin可阻止腫瘤細(xì)胞的凋亡,而C-erB-2過度表達(dá)可刺激腫瘤細(xì)胞惡性生長 ,乳腺癌組織中兩者異常表達(dá)具有協(xié)同作用。聯(lián)合檢測乳腺癌組織中Survivin和C-erB-2表達(dá)有重要的意義。Survivin和C-erB-2高表達(dá)者應(yīng)加強(qiáng)術(shù)后的鞏固性治療和隨訪。

乳腺癌治療是以手術(shù)為主的綜合治療,術(shù)式有多種,總的趨勢不外保守和擴(kuò)大兩方面。保守手術(shù)的代表術(shù)式是乳房局部切除術(shù)和全乳切除術(shù),術(shù)后需輔助放化療。如何選擇合適的早期癌患者行保守手術(shù)以獲得較好的治療效果,還未得出結(jié)論。本研究提示活檢證實(shí)乳腺癌,若Survivin和C-erB-2表達(dá)均呈陽性,宜行根治手術(shù),加強(qiáng)術(shù)后的鞏固性治療和隨訪。擬行保乳患者,建議穿刺行Survivin和C-erB-2檢測,若均陽性表達(dá)不宜行保乳手術(shù)。

[1]吳在德,主編.外科學(xué)[M].第5版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2001.350-362.

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