蘆薈生肌膏對(duì)大鼠直腸損傷模型的治療機(jī)制

姜愛(ài)琴，高慶元，劉長(zhǎng)寶

蘆薈生肌膏對(duì)大鼠直腸損傷模型的治療機(jī)制

姜愛(ài)琴1，高慶元1，劉長(zhǎng)寶2

目的:探討蘆薈生肌膏對(duì)大鼠直腸損傷模型的治療機(jī)制。方法：健康Wistar大鼠30只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、蘆薈生肌膏治療組。連續(xù)治療7 d后，取各組大鼠直腸組織行蛋白質(zhì)含量（考馬斯亮藍(lán)法）、髓過(guò)氧化物酶、成纖維細(xì)胞數(shù)及病理組織學(xué)檢查。結(jié)果：蘆薈生肌膏治療組的直腸組織蛋白含量、成纖維細(xì)胞數(shù)明顯高于模型組，而髓過(guò)氧化物酶的含量顯著低于模型組(P＜0.01)。蘆薈生肌膏治療組的直腸病理組織學(xué)檢查上皮基本完整，漿膜層基本正常。結(jié)論:蘆薈生肌膏對(duì)大鼠直腸損傷模型有顯著的治療作用，其機(jī)制可能與減輕受損組織的炎性反應(yīng)、促進(jìn)成纖維細(xì)胞增生等有關(guān)。

蘆薈生肌膏；大鼠直腸損傷模型；作用機(jī)制

由于肛門部解剖學(xué)和生理學(xué)特征決定了該部位手術(shù)創(chuàng)面較大，術(shù)后愈合時(shí)間長(zhǎng)。目前，在臨床應(yīng)用表皮生長(zhǎng)因子以促進(jìn)傷口的愈合，但對(duì)肛門部創(chuàng)口的愈合效果不佳。以蘆薈為主的中藥制劑具有活血化瘀、清熱解毒、化腐生肌作用，能有效抑制創(chuàng)面細(xì)菌的生長(zhǎng)，促進(jìn)壞死組織的脫落及肉芽組織的生長(zhǎng)，改善創(chuàng)口的血液循環(huán)。蘆薈生肌膏能促進(jìn)成纖維細(xì)胞的增殖。為進(jìn)一步驗(yàn)證其作用，我們進(jìn)行了以下動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康Wistar大鼠，體重250～280 g，雌雄各半，由溫州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)SYXK[浙]2008-0061。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物與試劑蘆薈生肌膏由蘆薈、當(dāng)歸、白芷、紫草、大黃、黃連、冰片、甘草、沒(méi)藥、龍骨組成，由溫州醫(yī)學(xué)院附屬二院藥劑科提供，所有藥物均經(jīng)超微粉碎(400目)，用時(shí)以高分子PEG基質(zhì)調(diào)配成含生藥濃度為40%的膏劑。髓過(guò)氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.3 大腸桿菌菌液的制備大腸桿菌菌液(來(lái)源于溫州醫(yī)學(xué)院微生物室，菌株為大腸桿菌014)于普通肉湯培養(yǎng)基內(nèi)，置37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)6 h備用。

1.4 動(dòng)物模型制備于玻璃棒一側(cè)頭端包裹細(xì)砂紙并固定，包裹后的棒端直徑約1 cm，將該棒緩插入大鼠肛門內(nèi)約3 cm，反復(fù)旋轉(zhuǎn)磨擦，造成局部黏膜層損傷、出血。按付小兵等[1-2]方法，于組織損傷處取對(duì)稱兩點(diǎn)各注入培養(yǎng)基菌液0.25 mL(菌液濃度約為1×1012∕L)，使其創(chuàng)面感染。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法健康Wistar大鼠30只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、蘆薈生肌膏治療組。蘆薈生肌膏治療組在造模后8h，用1根適當(dāng)粗細(xì)的橡皮管涂上凡士林潤(rùn)滑，緩緩插入大鼠肛門內(nèi)3cm，再把吸有蘆薈生肌膏的注射器接在橡皮管上，把藥物注入直腸，每日注藥1次，連續(xù)7 d，處死動(dòng)物，留取直腸創(chuàng)面組織。

1.6 觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法直腸組織蛋白質(zhì)含量采用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定。直腸組織髓過(guò)氧化物酶測(cè)定采用MPO檢測(cè)試劑盒，按說(shuō)明書(shū)檢測(cè)。直腸組織病理組織學(xué)檢查采用HE染色，觀察一般情況和每視野成纖維細(xì)胞數(shù)。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以SPSS 11.0軟件進(jìn)行分析。計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示；組間區(qū)別以單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，組間兩兩比較采用LSD，以P＜0.05視為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠直腸組織蛋白質(zhì)含量蘆薈生肌膏可顯著增加受損直腸組織中蛋白含量，提示其可促進(jìn)創(chuàng)面修復(fù)（見(jiàn)表1）。

2.2 大鼠直腸組織MPO髓過(guò)氧化物酶可以提示組織炎癥嚴(yán)重程度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明蘆薈生肌膏可顯著降低受損組織中MPO水平（見(jiàn)表1）。

2.3 大鼠直腸組織成纖維細(xì)胞數(shù)蘆薈生肌膏可顯著增加大鼠直腸組織成纖維細(xì)胞數(shù)，提示其可促進(jìn)創(chuàng)面修復(fù)（見(jiàn)表1）。

表1 大鼠直腸組織蛋白質(zhì)含量、髓過(guò)氧化物酶、成纖維細(xì)胞數(shù)檢測(cè)結(jié)果±s)

表1 大鼠直腸組織蛋白質(zhì)含量、髓過(guò)氧化物酶、成纖維細(xì)胞數(shù)檢測(cè)結(jié)果±s)

注：與正常對(duì)照組比，*P＜0.001；與模型組比，#P＜0.01。

組別正常對(duì)照組模型組蘆薈生肌膏治療組n 10 10 10蛋白含量(μg∕mg) 8.04±1.75 11.75±4.25*20.23±6.45*#MPO(u∕g) 0.25±0.05 2.01±0.33*0.98±0.22*#成纖維細(xì)胞數(shù)（個(gè)∕視野）15.5±4.5 25.6±8.5*48.9±9.2*#

2.4 病理組織學(xué)觀察正常對(duì)照組腸微絨毛基本正常，上皮完整，漿膜基本正常（圖1）;模型組黏膜變性、漿膜明顯增厚，炎細(xì)胞大量浸潤(rùn)，間皮細(xì)胞層脫落、缺失（圖2）；生肌膏治療組上皮基本完整，漿膜層基本正常（圖3）。

3 討論

創(chuàng)面愈合是一個(gè)復(fù)雜的生物學(xué)過(guò)程，涉及到創(chuàng)面局部的生理環(huán)境和自身組織修復(fù)。既往臨床研究表明,糞污染所致腸道桿菌的細(xì)菌感染和細(xì)菌內(nèi)毒素釋放是肛門部創(chuàng)面延遲愈合的主要因素之一,當(dāng)創(chuàng)面感染時(shí)，會(huì)阻礙創(chuàng)面愈合。

蘆薈生肌膏由蘆薈、當(dāng)歸、白芷、紫草、大黃、黃連、冰片、甘草、沒(méi)藥、龍骨組成。祖國(guó)醫(yī)學(xué)認(rèn)為，蘆薈，味苦，性寒，歸肝、胃、大腸經(jīng)，有瀉下、清肝、殺蟲(chóng)、止血、療傷等功效。研究表明，蘆薈具有明顯的抗菌、抗炎、抗內(nèi)毒素、促進(jìn)創(chuàng)面愈合等功能[3],蘆薈多糖、氨基酸、微量元素等能促進(jìn)成纖維細(xì)胞生可以顯著降低受損組織的MPO水平，抑制炎癥細(xì)胞在受損組織的過(guò)多浸潤(rùn)，從而調(diào)控炎癥反應(yīng)，保護(hù)創(chuàng)面，進(jìn)而加速創(chuàng)面愈合。長(zhǎng)[4]。當(dāng)歸、白芷、紫草、大黃、黃連、冰片、甘草、沒(méi)藥、龍骨等藥具有活血化瘀、清熱解毒、止痛消腫、生肌等功效。

圖1 正常組直腸壁鏡下改變HE 40×

圖2 模型組直腸壁鏡下改變HE 40×

炎癥反應(yīng)是組織修復(fù)的基礎(chǔ)，其核心又是微循環(huán)的結(jié)構(gòu)和功能的紊亂，炎癥反應(yīng)過(guò)程中激活和釋放的炎癥介質(zhì)也可造成組織損傷。因此，以適當(dāng)手段、調(diào)控炎癥反應(yīng)過(guò)程[5]，對(duì)促進(jìn)創(chuàng)面愈合具有積極的意義。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)測(cè)定直腸組織髓過(guò)氧化物酶和觀察受傷直腸的病理組織學(xué)表現(xiàn)，提示蘆薈生肌膏

圖3 生肌膏治療組直腸壁鏡下改變HE 40×

成纖維細(xì)胞是創(chuàng)傷愈合中主要的修復(fù)細(xì)胞之一,在細(xì)胞因子等因素的調(diào)控下,成纖維細(xì)胞發(fā)生增殖、遷移,并合成、分泌膠原和細(xì)胞外基質(zhì)成分以及膠原酶等,參與肉芽組織形成、創(chuàng)口收縮、瘢痕形成及組織重建的全過(guò)程,在創(chuàng)傷愈合過(guò)程中起到重要作用。在細(xì)胞增殖和修復(fù)期,最關(guān)鍵的步驟之一是肉芽組織的形成,肉芽組織的本質(zhì)是大量的成纖維細(xì)胞和毛細(xì)血管形成。創(chuàng)傷形成后,成纖維細(xì)胞數(shù)量變化會(huì)對(duì)創(chuàng)傷愈合產(chǎn)生巨大影響[5-6]。本研究結(jié)果提示，蘆薈生肌膏能顯著提高創(chuàng)面肉芽組織成纖維細(xì)胞數(shù)和蛋白質(zhì)含量,從而促進(jìn)傷口愈合。

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[5]陸樹(shù)良,廖鎮(zhèn)江，陳志龍.燒傷創(chuàng)面愈合機(jī)制與新技術(shù)[M].北京:人民軍醫(yī)出版社，2003：12-55.

[6]李玉林，文繼舫，唐建武.病理學(xué)[M].第7版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2008：22，30-33.

（收稿：2010-01-10修回：2010-05-26）

（責(zé)任編輯劉洪斌田在善）

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Therapeutical Effect and Mechanism of Luhui Shengji(蘆薈生?。㎡intment on Healing of Rats

Anorectal Wound in Rats

Jiang Aiqin,Gao Qingyuan,Liu Changbao，Department of Coloproctology,The

Second Affiliated Hospital of Wenzhou Medical College,Wenzhou（325027），China

ObjectiveTo explore the therapeutical effect and mechanism of Luhui Shengji（蘆薈生?。﹐intment on the healing of anorectal wound in rats.MethodsThirty Wistar rats were randomly divided into 3 groups,group 1(normal control group),group 2(model group),group 3(Luhui Shengji ointment treatment group).After 7 days,all Wistar rats were sacrificed,and the therapeutic effects were evaluated by the protein contents（Coomassie brilliant blue）,Myeloperoxidase(MPO),the cell number of fibroblasts,and the index of histopathology in anorectal tissue.ResultsCompared with the other two groups,the protein contents and the cell number of fibroblasts in group 3 were increasing more obviously than those in the other groups(P＜0.01);on the contrary, there was less MPO in group3，Histopathology showed epithelium was almost completed and the serosa layer was nearly perfect.ConclusionLuhui Shengji ointment shows excellent therapeutical effect on the healing of anorectal wound in rats,it may reduce inflammatory reaction,or promote the proliferation of fibroblasts.

Luhui Shengji ointment，anorectal wound modle，therapeutical mechanism

R285.5；R657.1

A

1007-6948(2010)04-0442-03

10.3969∕j.issn.1007-6948.2010.04.016

溫州市龍灣區(qū)科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2008S2)

1.溫州市龍灣區(qū)第一人民醫(yī)院肛腸科（溫州325024）

2.溫州醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院肛腸科

劉長(zhǎng)寶，Tel:0577-88086251，E-mail：lcb@wzhealth.com