銀耳菌種規(guī)范化生產(chǎn)工藝講座(一)——銀耳菌種繁育原理及試管培養(yǎng)基制作

丁湖廣

(福建省古田縣新元食用菌研究所,古田 352200)

銀耳生產(chǎn),菌種先行。銀耳菌種之所以排列在首位,是因?yàn)樗哂杏蓛煞N菌絲混合構(gòu)成的獨(dú)特特點(diǎn);制種技術(shù)性強(qiáng),且適用菌齡很短,稍有操作失誤或培養(yǎng)管理不善,就會(huì)影響菌質(zhì),造成種植失敗,使栽培者遭受經(jīng)濟(jì)損失。正因如此,銀耳制種責(zé)任重大,操作人員必須具備專業(yè)知識(shí)和技能,持證上崗;生產(chǎn)經(jīng)營中遵守職業(yè)道德規(guī)范,技術(shù)精益求精。

1 銀耳菌種特性

1.1 繁殖原理 銀耳繁殖分為有性繁殖和無性繁殖兩種。人工分離母種是根據(jù)銀耳子實(shí)體成熟時(shí),能夠彈射擔(dān)孢子的特性,使子實(shí)體上的許多擔(dān)孢子著落在培養(yǎng)基上,以出芽的方式萌發(fā)形成菌絲而成為菌種。這種自然繁殖方式,通過人為分離的方法,謂之有性分離或有性繁殖。銀耳子實(shí)體組織或耳木里面的菌絲,有很強(qiáng)的生命力,具有無性繁殖的性能。無性繁殖是從子實(shí)體或耳木中分離出菌絲體,移接在培養(yǎng)基上,使其恢復(fù)到菌絲發(fā)育階段,變成沒有組織化的菌絲來獲得母種。用這種分離方式獲得母種,既方便又較能保證其子實(shí)體和菌絲體都是近緣有性世代,遺傳基因比較穩(wěn)定,抗逆力強(qiáng),母系的優(yōu)良品質(zhì)基本上可以繼承下來。

1.2 菌種特性 銀耳需利用擔(dān)子菌 (銀耳菌絲或酵母狀分生孢子)和子囊菌 (香灰菌絲)兩種菌絲進(jìn)行混合培養(yǎng),才能作為生產(chǎn)用的菌種。這兩種菌絲在生產(chǎn)上稱為銀耳純菌絲和羽毛狀香灰菌絲 (俗稱耳友菌絲)。香灰菌的發(fā)現(xiàn),使人們進(jìn)一步認(rèn)識(shí)到銀耳雖然是一種木腐菌,但它分解纖維的能力很弱,必須伴同一種能分解纖維的香灰菌絲生活在一起,構(gòu)成密切的共生關(guān)系。因此,銀耳生長(zhǎng)必須有被稱為 “伴生菌”的香灰菌來作 “開路先鋒”。沒有這種 “開路先鋒”與之配合,銀耳既長(zhǎng)不進(jìn)木材,也無法生存,只有在與香灰菌共存的條件下,才能長(zhǎng)出朵大的銀耳子實(shí)體。這種巧妙的組合,是長(zhǎng)期自然進(jìn)化選擇的結(jié)果。不了解這一原理,就抓不住銀耳菌種生產(chǎn)的關(guān)鍵,也就無法生產(chǎn)優(yōu)良的銀耳菌種。

1.3 生活條件 菌種質(zhì)量的優(yōu)劣,除母系遺傳的原因之外,環(huán)境因素的影響也很重要。生態(tài)因子不能適應(yīng)菌種生活需要時(shí),菌種質(zhì)量就會(huì)受到影響,出現(xiàn)退化甚至死亡。

營養(yǎng)是銀耳菌種生命活動(dòng)的物質(zhì)基礎(chǔ),氫、氧、氮、碳、鈣、磷、鐵、鉀、鎂、硫等元素,以有機(jī)和無機(jī)化合物的形態(tài),構(gòu)成菌絲體生長(zhǎng)發(fā)育所需的能源和營養(yǎng)成分。這些元素以纖維素、半纖維素、木質(zhì)素和其他化合物的形式,存在于棉籽殼、木屑、麥麩、米糠等栽培原料中。經(jīng)過菌絲體分泌的酶的作用,降解為簡(jiǎn)單的碳水化合物和無機(jī)物,為菌絲體所吸收。據(jù)試驗(yàn),在瓊脂培養(yǎng)基中加入適量的磷酸二氫鉀或骨粉,能促使銀耳芽孢萌發(fā);在以玉米粉為碳源、麥麩為氮源的培養(yǎng)基上,菌絲生長(zhǎng)最旺盛。因此在人工分離培育菌種時(shí),要根據(jù)菌種不同發(fā)育階段的營養(yǎng)需求,加入適量的蔗糖、麥麩、淀粉、蛋白胨、磷酸鹽、硫酸鎂等營養(yǎng)成分,以滿足其生長(zhǎng)發(fā)育的需要。

菌種生活條件除了營養(yǎng)之外,還必須根據(jù)生理和生態(tài)特性,滿足其對(duì)溫度、濕度、空氣、光照、pH值等的要求。在菌種培養(yǎng)過程中要求恒溫,室內(nèi)溫度應(yīng)保持在22～23℃,不超過26℃;培養(yǎng)室要求干燥,空間相對(duì)濕度在70%以下;室內(nèi)適當(dāng)通風(fēng)換氣,更新空氣,防止二氧化碳沉積滲透,危害菌體。室內(nèi)需要微弱散射光線,不可陽光直射,否則會(huì)直接傷害菌種,或引起菌種瓶?jī)?nèi)水分蒸發(fā)而危及菌種。人為創(chuàng)造適合菌種生活的環(huán)境條件,有利于提高菌種的成品率和質(zhì)量。

2 銀耳菌種的分級(jí)與形成程序

2.1 菌種分級(jí) 銀耳菌種的分級(jí)與其他食用菌相類似,包括母種、原種、栽培種三級(jí)。

(1)母種。通常是從子實(shí)體或基內(nèi)分離選育出來的,又稱為一級(jí)菌種。它一般采用試管內(nèi)的瓊脂斜面培養(yǎng)基或玻璃瓶木屑培養(yǎng)基培養(yǎng)。母種數(shù)量很少,還不能用于大量接種和栽培,只能用于繁殖或保藏。

(2)原種。把母種移接到菌種瓶?jī)?nèi)的木屑、麥麩等培養(yǎng)基上所培育出來的菌絲體稱為原種。原種是母種經(jīng)過一次擴(kuò)繁所得,所以又稱二級(jí)菌種。原種雖然可以用來栽培產(chǎn)出子實(shí)體,但因?yàn)閿?shù)量少,用作栽培成本高,因此,還必須經(jīng)過再擴(kuò)大。銀耳試管母種,通常只有一個(gè)混合體的菌絲紐結(jié)團(tuán),所以只能移接為1瓶原種;而玻璃瓶的木屑培養(yǎng)基母種,一瓶可以移接為40～50瓶原種。

(3)栽培種。又叫生產(chǎn)種,即把原種再次擴(kuò)接到同樣的木屑培養(yǎng)基上,培育得到的作為銀耳栽培用的菌種。經(jīng)過這一次擴(kuò)大的菌種,稱之為三級(jí)菌種。每瓶原種可擴(kuò)接成栽培種50～60瓶。

2.2 菌種形成程序 銀耳菌種因其自身的特性,它的分級(jí)形成與其他菇類有別,詳見圖1。

3 母種培養(yǎng)基的配方與制作

3.1 培養(yǎng)基配方 銀耳母種培養(yǎng)基分為瓊脂培養(yǎng)基和木屑培養(yǎng)基。木屑培養(yǎng)基配方和制作方法與原種和栽培種相同。由于銀耳菌種是由兩種菌絲混合構(gòu)成,在培養(yǎng)基配方上分為通用的和專用的,下面分別介紹4種類型配方。

(1)通用培養(yǎng)基配方。通用指的是既適于銀耳芽孢萌發(fā),又利于與香灰菌絲混合發(fā)育生長(zhǎng)。常用的有以下3個(gè)配方。配方一:馬鈴薯 250克,葡萄糖25克,硫酸鎂0.5克,維生素B110毫克,瓊脂 20克,水1000毫升。通稱PDA培養(yǎng)基。配方二:馬鈴薯200克,蔗糖20克,磷酸二氫鉀3克,瓊脂20克,水1000毫升。稱為PSA培養(yǎng)基。配方三:玉米粉60克,葡萄糖10克,瓊脂20克,水1000亳升。稱為CMA培養(yǎng)基。

圖1 銀耳菌種分級(jí)形成示意圖

(2)適于芽孢的培養(yǎng)基配方。配方一:銀耳木屑菌種2瓶 (750毫升),過磷酸鈣1克或磷酸二氫鉀3克,瓊脂25克,水1000毫升。配方二:銀耳適生樹的木屑50克,磷酸二氫鉀3克,蔗糖30克,瓊脂20克,水1000毫升。

(3)適于純白菌絲培養(yǎng)基配方。配方一:馬鈴薯淀粉40克,葡萄糖10克,蛋白胨5克,氯化鈉5克,磷酸二氫鉀0.5克,瓊脂22克,水1000毫升。配方二:玉米粉50克,蛋白胨10克,瓊脂20克,水1000毫升。

(4)適于香灰菌絲培養(yǎng)基配方。配方一:麥麩200克,葡萄糖20克,瓊脂20克,水1000毫升。配方二:黃豆粉40克,葡萄糖20克,磷酸二氫鉀3克,瓊脂20克,水1000毫升。

3.2 試管斜面培養(yǎng)基制作 斜面試管是培養(yǎng)母種的營養(yǎng)物質(zhì),根據(jù)銀耳母種培養(yǎng)基的配方加工而成。各種培養(yǎng)基配方雖不同,但制作方法大同小異。

(1)溶化取汁。將馬鈴薯洗凈去皮 (已發(fā)芽的要挖掉芽眼),稱取200克切成薄片,置于鋁鍋加水煮沸30分鐘,撈起用4層紗布過濾取汁。然后稱取瓊脂20克,用剪刀剪碎后加入馬鈴薯汁液內(nèi),繼續(xù)加熱,并用竹筷不斷攪拌使瓊脂全部溶化,再加足水1000毫升。然后加入葡萄糖,煮幾分鐘后,用4層紗布過濾1次,取其液汁。

(2)分裝入管。裝量為試管長(zhǎng)度的1/5,迅即塞上棉塞,立放于試管架上。分裝時(shí)應(yīng)注意不要使培養(yǎng)基粘在試管口或試管壁上,以免發(fā)生雜菌感染。

(3)高壓滅菌。滅菌目的是把培養(yǎng)基內(nèi)所有的微生物殺死,使之處于無菌狀態(tài)。滅菌時(shí)將每10支試管扎成一捆,棉塞一端用牛皮紙包好,垂直放入高壓鍋內(nèi)進(jìn)行滅菌。以0.110兆帕 (1224.40℃)的壓力保持30分鐘左右;待壓力表自動(dòng)降到 “0”時(shí),再打開鍋蓋,取出試管。

(4)趁熱排斜。試管取出后趁熱斜靠在桌上的小木棒上,使管內(nèi)培養(yǎng)液斜面長(zhǎng)度達(dá)試管長(zhǎng)度的1/2至2/3,冷卻后即成固體斜面培養(yǎng)基。

(5)檢測(cè)純度。滅菌后的效果如何,需要進(jìn)行認(rèn)真檢測(cè)?？蓮拿颗嚬苤腥〕?～5支,移入恒溫箱中,調(diào)溫至28℃左右進(jìn)行培養(yǎng)。經(jīng)3～7天后,未見雜菌產(chǎn)生,證明無雜菌,可作為母種斜面培養(yǎng)基應(yīng)用。