表皮生長因子、雌二醇及其受體與肝癌分期的關(guān)系及意義

陳進國 孔先一 吳洪文

原發(fā)性肝癌(primary liver cancer, PLC)(以下簡稱肝癌)是常見的惡性腫瘤，嚴(yán)重危害人類的健康。肝癌的發(fā)生機制目前尚未完全闡明，研究發(fā)現(xiàn)，表皮生長因子(epidermal growth factor,EGF)及其受體(epidermal growth factor receptor, EGFR)在肝癌有過表達現(xiàn)象，與肝癌的形成、發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)系[1]。近年雌二醇(estradiol,E2)及其受體(estrogen receptor, ER)與肝癌的關(guān)系受到關(guān)注。本研究對40例不同分期肝癌組織進行EGF、EGFR、E2和ER檢測，旨在進一步探討其與肝癌分期的關(guān)系和意義。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選擇我院2007年1月～2007年12月行肝癌切除術(shù)的40例男性患者為研究對象，乙肝血清標(biāo)志物至少一項陽性，除外轉(zhuǎn)移性肝癌、術(shù)前化療或放療的患者。年齡17～66歲，平均年齡(50.2±9.0)歲。采用2001年中國抗癌協(xié)會肝癌專業(yè)委員會制定的原發(fā)性肝癌診斷及分期標(biāo)準(zhǔn)[2]，其中I期15例，II期17例，III期8例。

1.2 檢測試劑 兔抗人EGF抗體購自武漢博士德生物工程公司，即用型鼠抗人EGFR單克隆抗體、鼠兔通用型S-P試劑盒和聯(lián)苯二氨(DAB)顯色試劑均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。即用型兔抗人E2多克隆抗體及鼠抗人ER單克隆抗體均為美國SIGNET公司產(chǎn)品。

1.3 檢測方法 取檢測標(biāo)本組織制作石蠟切片，用免疫組織化學(xué)鏈親和素-過氧化物酶(S-P)法檢測EGF、EGFR，用已知的陽性片作陽性對照，用PBS代替一抗染色做空白對照。用免疫組織化學(xué)鏈親和素-過氧化物酶(S-P)法檢測E2、ER，以乳腺癌陽性片作為陽性對照，用PBS代替一抗染色做空白對照。以細胞漿和細胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒作為陽性細胞，任意選擇5個高倍鏡視野(×400倍)，每個視野計數(shù)100個細胞，根據(jù)陽性細胞的百分比判斷：無陽性著色或陽性著色＜10%為陰性，陽性著色≥10%為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS12.0軟件對結(jié)果進行統(tǒng)計處理。計數(shù)資料采用x2檢驗，取P＜0.05為顯著性差異。

2 結(jié)果

見表1。

從表1中可見，I期、II期、III期肝癌EGF和EGFR陽性率逐漸增高。I期陽性率明顯低于II期和III期(P＜0.05)；II期陽性率低于III期但無統(tǒng)計學(xué)差異(P 0.05)。從表2中可見，I期、II期、III期肝癌E2、ER陽性率隨肝癌進展逐漸降低；除I期E2陽性率顯著高于III期(Fisher精確概率P=0.017)外，其于各組無顯著性差異(P＞0.05)。

表1 EGF、EGFR表達與肝癌分期的關(guān)系

表2 E2、ER表達與肝癌分期的關(guān)系

3 討論

本研究發(fā)現(xiàn)，隨肝癌進展EGF和EGFR陽性率逐漸升高，Ⅱ期、Ⅲ期明顯高于Ⅰ期(P＜0.05)。EGF、EGFR與肝癌發(fā)展、轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系。EGF是一種強有力的細胞分裂促進因子，存在于人體組織和細胞外液，具有廣泛的生理作用，與胚胎發(fā)生與生長、組織修復(fù)和再生以及腫瘤發(fā)生等均有密切關(guān)系。EGFR是原癌基因c-erbB-1(HER-1)的表達產(chǎn)物，是一種跨膜糖蛋白，定位于細胞膜上，由膜外區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)三部分組成，其細胞內(nèi)段有酪氨酸激酶活性。EGFR可以促進腫瘤細胞的增殖、血管生成、粘附、侵襲和轉(zhuǎn)移，抑制腫瘤細胞凋亡[3]。EGF通過與EGFR結(jié)合發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。EGF與EGFR結(jié)合后，可通過離子通道、信號傳導(dǎo)及基因表達等機制促進肝癌細胞DNA合成、促進肝癌發(fā)生與發(fā)展[1]。

許多因素與肝癌發(fā)展、轉(zhuǎn)移有關(guān)，EGF和EGFR促進腫瘤細胞生長、腫瘤血管及間質(zhì)生成，促進肝癌發(fā)展、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)。血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)作為最關(guān)鍵的血管生成促進因子，在肝癌發(fā)展、轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用[4-5]。Huang等[6]發(fā)現(xiàn)EGF和低氧是刺激VEGF表達的基本因素，二者可以促進VEGF表達。血小板凝血酶敏感蛋白-1(thrombospondin,TSP-1)在腫瘤血管及間質(zhì)的生成中發(fā)揮重要的作用，Okamoto等[7]在人肝癌細胞HuH-7中加入EGF可以顯著上調(diào)細胞中TSP-1的水平。Zhang等[8]在肝癌細胞株HepG2中加入外源性的EGF，發(fā)現(xiàn)肝癌細胞表達骨橋蛋白(osteopontin,OPN)明顯增加，OPN在腫瘤轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用，并且發(fā)現(xiàn)EGF可以通過EGF/PI3K旁路信號表達，引起OPN過表達，促進肝癌轉(zhuǎn)移。EGF可促進肝癌尿激酶型纖溶酶原激活物受體(urokinase type plasminogen activator receptor,uPAR)表達，在腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。Guerrero等[9]發(fā)現(xiàn)，EGFR在uPAR刺激后起轉(zhuǎn)導(dǎo)作用，介導(dǎo)高度惡性腫瘤細胞中尿激酶型纖溶酶原激活物(urokinase type plasminogen activator,uPA)引起的增殖作用。EGF和EGFR對肝癌的作用機制復(fù)雜，有待進一步研究。

雌激素及其受體與肝癌關(guān)系密切，大量資料證實外源性的雌激素長期刺激可導(dǎo)致肝細胞腫瘤發(fā)病率的升高，HCC是一種雌激素依賴性腫瘤[10-11]。此前我們研究發(fā)現(xiàn)[12]肝硬化、肝癌有E2、ER表達增高，肝硬化期就已經(jīng)存在E2、ER含量的增多，在肝硬化向HCC轉(zhuǎn)變的過程中，E2發(fā)揮重要的促進作用。

本研究發(fā)現(xiàn)，I、II、III期肝癌E2和ER陽性率隨肝癌進展逐漸降低；在研究中亦發(fā)現(xiàn)隨腫瘤直徑增大，E2和ER的陽性率呈下降趨勢。從不同肝癌分期的研究結(jié)果可以推測在肝癌的早期發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程中，E2、ER發(fā)揮著重要作用，而在晚期肝癌中，E2、ER不再發(fā)揮重要作用。

從本研究可以得出以下結(jié)論：隨肝癌分期發(fā)展EGF、EGFR和E2、ER表達呈不同變化趨勢，在肝癌發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的具有不同作用。

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