益腎疏肝湯對MS小鼠糖脂代謝影響的實(shí)驗(yàn)研究

唐新征，張煒寧，張會霞

（廣東省深圳市福田區(qū)中醫(yī)院，廣東深圳 518034）

代謝綜合征又稱胰島素抵抗代謝綜合征（insulin resistance metabolic syndrome，IRMs），1988 年 Reaven 提出時稱為 X 綜合征，后亦稱Reaven綜合征。1999世界衛(wèi)生組織正式認(rèn)同這一命名并予以全面論述，目前一般認(rèn)為MS是以中心性肥胖、胰島素抵抗（IR）、高血壓、高三酰甘油血癥、低高密度脂蛋白膽固醇、糖耐量下降或2型糖尿病為主要臨床表現(xiàn)的一種綜合征，其主要病因有肥胖、遺傳及環(huán)境因素和精神因素等，該病的病理生理基礎(chǔ)是胰島素抵抗。近年來MS的發(fā)病率逐年升高，其危害性大，涉及多個學(xué)科領(lǐng)域，引起國內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注[1-3]。本研究在建立MS動物模型（小鼠）基礎(chǔ)上，研究運(yùn)用益腎疏肝中藥干預(yù)對MS小鼠脂代謝、脂肪酸代謝、糖代謝的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物 采用6～8周齡的健康SPF級雄性C57BL/6J小鼠50只，體重（20±2）g，由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動物有限公司提供，分籠喂養(yǎng)，每籠5只，自由攝食及飲水，自然晝夜采光，室溫23～26℃，濕度50%左右，定期換墊料，消毒籠具。一般觀察記錄各組動物的精神狀態(tài)、體重、飲水量、尿量和毛發(fā)光亮度等情況。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后開始正式實(shí)驗(yàn)。

1.1.2 主要試劑和藥物 胰島素試劑盒（北京北方生物技術(shù)研究所）；TG試劑盒（上海申索佑福醫(yī)學(xué)診斷用品有限公司）；TC試劑盒（浙江夸克生物科技有限公司）；HDL試劑盒（上海滬峰化工有限公司）。益腎中藥（金匱腎氣丸，同仁堂制藥公司）；疏肝中藥（逍遙丸，九芝堂制藥公司）；益腎疏肝湯（熟地30 g、黃精 30 g、柴胡 10 g、天花粉 30 g、玄參 10 g、蒼術(shù) 10 g、肉桂 5 g、澤瀉 10 g、當(dāng)歸 10 g、檳榔 10 g、厚樸 10 g，冷水浸泡20 min，武火煮沸后，改用文火維持15 min，藥汁倒入燒杯中，邊加熱邊用玻璃棒攪拌，濃縮至100 ml后封瓶放冰箱備用）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)分組給藥 將50只C57BL/6J小鼠隨機(jī)分成對照組、模型組、益腎組、疏肝組、益腎疏肝組，每組10只，造模成功后，模型組給予等體積生理鹽水灌胃4周，益腎組給予益腎中藥（金匱腎氣丸）以等體積生理鹽水溶解后灌胃4周，疏肝組給予疏肝中藥（逍遙丸）以等體積生理鹽水溶解后灌胃4周，益腎疏肝組予益腎疏肝湯灌胃4周。用藥劑量按人常規(guī)劑量并以體表面積-劑量換算法計(jì)算給藥劑量灌胃，即1 g小鼠每天的給藥量為：70 kg人一天的用藥量×0.0026/20[4]。于實(shí)驗(yàn)第4周末空腹?fàn)顟B(tài)（禁食12 h）下，測定各組小鼠空腹血糖（FBG）、空腹胰島素（FINS）。計(jì)算各自胰島素敏感指數(shù)ISI=ln[1/（FBG×FINS）][5]，根據(jù)體重增加、空腹血糖升高、胰島素敏感指數(shù)降低，確定MS造模成功[6]。

1.2.2 動物處理 于實(shí)驗(yàn)第4周末空腹?fàn)顟B(tài)下，雙手心夾住小鼠尾巴來回滾搓，使小鼠尾靜脈充分充血后，用剪刀剪去尾尖0.5 cm，尾靜脈血即可流出，使用快速全血葡萄糖測試儀測定FBG；靜注水合氯醛（4 ml/kg體重）麻醉動物，采用特制的硬玻璃吸管，管長15 cm，前端拉成毛細(xì)管，取血時，用手從背部捉住動物，同時用示指和拇指握住頸部，利用對頸部所加的輕壓力，使頭部靜脈淤血，將消毒的吸管用抗凝劑濕潤其內(nèi)壁，從內(nèi)側(cè)眼角將吸管轉(zhuǎn)向前，并輕壓刺入，深4～5 mm達(dá)到后眼眶靜脈叢，血液自然進(jìn)入吸管內(nèi)，取0.2 ml血液，除去加于頸部的壓力，同時抽出吸管，3000 r/min離心5 min，抽取血清，嚴(yán)格按放免試劑盒說明書操作，測定INS。

于實(shí)驗(yàn)第8周末空腹?fàn)顟B(tài)下，測定FBG（方法同上）；靜注水合氯醛（4 ml/kg體重）麻醉動物，將小鼠固定，胸部備皮，常規(guī)消毒，在胸骨左側(cè)3～4肋間摸到心尖搏動，右手持注射器，在胸骨左緣1 cm處將針頭插入肋間隙，在左手觸摸到心跳的配合下，垂直刺入心臟，當(dāng)持針手感到心臟搏動時，再稍刺入即到達(dá)心腔，最大量抽血，測定血清三酰甘油（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）。右上腹部備皮，于肋緣中點(diǎn)處縱向剪開腹部皮膚及肌肉層，充分顯露腹內(nèi)臟器，取出肝臟，放入4%甲醛溶液中固定。

1.3 觀察指標(biāo)及方法

1.3.1 小鼠行為和體態(tài)變化 觀察記錄各組小鼠的精神狀態(tài)、體態(tài)、體重和毛發(fā)光亮度等情況。

1.3.2 測定TC、TG、HDL及FBG 禁食12 h后，尾部取血，使用快速全血葡萄糖測試儀測定FBG；靜注水合氯醛（4 ml/kg體重）麻醉動物，體外心臟取血，送湖南中醫(yī)藥大學(xué)生化試驗(yàn)室，3000 r/min離心5 min，抽取血清，嚴(yán)格按照試劑盒說明書測定 TC、TG、HDL。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 16.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)資料的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中的資料均先經(jīng)方差齊性檢驗(yàn)，在方差齊的情況下，多組比較采用單因素方差分析，組間比較采用t檢驗(yàn)，方差不齊時采用非參數(shù)統(tǒng)計(jì)方法和秩和檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠行為和體態(tài)變化

造模前各組小鼠均活動靈活，反應(yīng)敏捷，體態(tài)勻稱，飲食、飲水、尿量正常，皮毛光亮柔順。造模后模型組、益腎組、疏肝組、益腎疏肝組小鼠較對照組體態(tài)肥胖，精神較差，活動少，反應(yīng)稍遲鈍，飲食、飲水、尿量偏多，皮毛光亮柔順度稍差，個別出現(xiàn)體毛枯黃、脫毛現(xiàn)象。益腎組、疏肝組、益腎疏肝組小鼠在給藥后精神逐漸好轉(zhuǎn)，活動漸漸增多，飲食、飲水、尿量逐漸接近正常，皮毛逐漸光亮。

2.2 造模評估

模型組、益腎組、疏肝組、益腎疏肝組小鼠造模后體重及體重增值均顯著高于對照組（P＜0.01），說明高糖、高脂飲食可導(dǎo)致小鼠體重明顯增加，是引起肥胖的主要原因。見表1。

表1 造模前后小鼠體重變化比較（，g）Tab.1 Comparison of body weight changes in mice before and after modeling(,g)

表1 造模前后小鼠體重變化比較（，g）Tab.1 Comparison of body weight changes in mice before and after modeling(,g)

與對照組比較，*P＜0.01Compared with control group,*P＜0.01

組別 n造模前 造模后 體重增值對照組1019.88±0.4121.48±1.031.59±1.09模型組1019.83±0.1123.79±1.23*3.96±1.19*益腎組1019.84±0.1123.68±1.50*3.84±1.45*疏肝組1019.85±0.1223.80±1.40*3.95±1.32*益腎疏肝組1019.82±0.1523.83±1.15*4.01±1.18*

模型組、益腎組、疏肝組、益腎疏肝組FBG、INS均顯著高于對照組（P＜0.01），ISI均顯著低于對照組（P＜0.01），說明MS小鼠造模成功。見表2。

表2 造模后 FBG、INS、ISI比較（）Tab.2 Comparison of FBG,INS,ISI after modeling()

表2 造模后 FBG、INS、ISI比較（）Tab.2 Comparison of FBG,INS,ISI after modeling()

與對照組比較，*P＜0.01Compared with control group,*P＜0.01

組別 nFBG（mmol/L）INS（mU/L）ISI對照組105.59±0.0311.85±0.08-4.19±0.01模型組107.20±0.13*13.88±0.06*-4.60±0.02*益腎組107.22±0.11*13.90±0.06*-4.61±0.01*疏肝組107.22±0.10*13.89±0.06*-4.61±0.01*益腎疏肝組107.21±0.10*13.91±0.05*-4.61±0.01*

2.3 用藥后各組TC、TG、HDL的變化

2.3.1 用藥后各組血清TC比較 益腎疏肝組與模型組相比血清TC偏低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；益腎疏肝組與益腎組、疏肝組相比血清TC均偏低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；益腎疏肝組與對照組相比血清TC偏高，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；益腎組、疏肝組與模型組相比血清TC偏低，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；益腎組血清TC與疏肝組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說明益腎疏肝湯可顯著降低MS小鼠血清TC，療效優(yōu)于金匱腎氣丸、逍遙丸。見表3。

2.3.2 用藥后各組血清TG比較 益腎疏肝組與模型組相比血清TG偏低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；益腎疏肝組與益腎組、疏肝組相比血清TG均偏低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）；益腎疏肝組與對照組相比血清TG偏高，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；益腎組、疏肝組與模型組相比血清TG偏低，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；益腎組與疏肝組相比血清TG差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說明益腎疏肝湯可顯著降低MS小鼠血清TG，益腎疏肝湯優(yōu)于金匱腎氣丸、逍遙丸。見表3。

2.3.3 用藥后各組血清HDL比較 益腎疏肝組與模型組相比血清HDL偏高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；益腎疏肝組與益腎組、疏肝組相比血清HDL均偏高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；益腎疏肝組與對照組相比血清HDL偏低，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；益腎組、疏肝組與模型組相比血清HDL偏高，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；益腎組與疏肝組相比血清HDL差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說明益腎疏肝湯可顯著升高M(jìn)S小鼠血清HDL，益腎疏肝湯優(yōu)于金匱腎氣丸、逍遙丸。見表3。

表3 用藥后各組TC、TG、HDL的比較（）Tab.3 Comparison of TC,TG and HDL in each group after treatment()

表3 用藥后各組TC、TG、HDL的比較（）Tab.3 Comparison of TC,TG and HDL in each group after treatment()

與對照組比較，*P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05；與益腎疏肝組比較，▲P＜0.05Compared with control group,*P＜0.01;compared with model group,△P＜0.05;compared with benefits of kidney and liver group,▲P＜0.05

組別 nTC（mmol/L）TG（mmol/L）HDL（mmol/L）對照組102.19±0.050.59±0.040.96±0.05模型組102.59±0.04*0.69±0.04*0.75±0.04*益腎組102.59±0.03*▲0.69±0.04*▲0.75±0.04*▲疏肝組102.59±0.04*▲0.68±0.03*▲0.75±0.05*▲益腎疏肝組102.55±0.03*△0.65±0.04*△0.79±0.03*△

2.4 用藥前后各組FBG的變化

2.4.1 用藥后各組FBG比較與分析 益腎疏肝組與模型組相比FBG偏低，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；益腎疏肝組與益腎組、疏肝組相比FBG均偏低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；益腎疏肝組與對照組相比FBG偏高，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；益腎組、疏肝組與模型組相比FBG偏低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；益腎組與疏肝組相比FBG差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說明金匱腎氣丸、逍遙丸、益腎疏肝湯均可降低MS小鼠FBG，益腎疏肝湯療效優(yōu)于金匱腎氣丸、逍遙丸。見表4。

2.4.2 用藥前后各組FBG差值的比較與分析 益腎疏肝組與模型組相比FBG差值偏高，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；益腎疏肝組與益腎組、疏肝組相比FBG差值均偏高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；益腎疏肝組與對照組相比FBG差值偏高，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；益腎組、疏肝組與模型組相比FBG差值偏高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；益腎組與疏肝組相比FBG差值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說明腎氣丸、逍遙丸、益腎疏肝湯均可降低MS小鼠FBG，益腎疏肝湯療效優(yōu)于腎氣丸、逍遙丸。見表4。

表4 用藥前后各組FBG比較（，mmol/L）Tab.4 Comparison of FBG in each group before and after treatment(,mmol/L)

表4 用藥前后各組FBG比較（，mmol/L）Tab.4 Comparison of FBG in each group before and after treatment(,mmol/L)

與對照組比較，*P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與益腎疏肝組比較，▲P＜0.05Compared with control group,*P＜0.01;compared with model group,△P＜0.05,△△P＜0.01;compared with benefits of kidney and liver group,▲P＜0.05

組別 n用藥前 用藥后FBG差值對照組105.59±0.035.57±0.150.02±0.14模型組107.20±0.137.07±0.09*0.13±0.11益腎組107.22±0.116.93±0.08*△▲0.29±0.12*△▲疏肝組107.22±0.096.93±0.13*△▲0.29±0.14*△▲益腎疏肝組107.21±0.106.79±0.13*△△0.42±0.16*△△

3 討論

MS是多基因和多種環(huán)境因素綜合作用所致的疾病，脂代謝、糖代謝紊亂、胰島素抵抗、慢性炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激等多種因素參與了MS的發(fā)病過程，尋找這一系列病理生理過程的核心因素，是從根本上解釋MS發(fā)病機(jī)制和治療MS的關(guān)鍵。

中醫(yī)學(xué)無MS這一病名，現(xiàn)代學(xué)者多將其歸屬于 “消渴”、“血濁”、“肥胖”、“聚證”等范疇，郎寧等[7]認(rèn)為 MS 是多種綜合征的總和，個體表現(xiàn)不同，所以其病機(jī)側(cè)重點(diǎn)亦不一樣，肥胖者當(dāng)以脾為中心，與肝密切相關(guān)；高血壓者當(dāng)以肝為中心；血脂異常者當(dāng)從痰瘀論治；糖代謝紊亂者當(dāng)以脾、腎為中心兼及他臟。筆者認(rèn)為，腎虛肝郁是MS的基本病機(jī)。人體的各種氣化功能活動的源動力是命門相火，朱丹溪說相火“具于人者，寄于肝腎兩部”。肝有此火司氣機(jī)之升，盡疏泄之職，任將軍之管；腎有此火，輸布一身之火，使水火得濟(jì)，以奉生身之本[8]。腎精肝血充沛，則相火得以制約，靜而守位，氣化功能正常，不斷將物質(zhì)化為功能，同時通過功能的作用，完成物質(zhì)的代謝，即所謂“氣歸形，形歸氣”。《靈樞·五變》云“五臟皆柔弱者，善病消癉”，指出五臟虛弱是發(fā)生消渴的重要因素[9]?！督饏T要略》中的腎氣丸治“消渴病之小便多，飲一溲一”，是中醫(yī)治療消渴的先驅(qū)。其后，宋·嚴(yán)用和則謂“補(bǔ)脾不如補(bǔ)腎，腎氣若壯，丹田火經(jīng)上蒸脾土，脾土溫和，中焦自治”。明·張景岳認(rèn)為腎陰、腎陽總領(lǐng)全身之陰陽，即“五臟之陽非此不能發(fā)，五臟之陰非此不能滋”。因此，益腎以固本之源，精氣充則臟腑功能得以增強(qiáng)，精血得以資生，百谷精微得脾氣以運(yùn)化，運(yùn)化正常則病無所生。

此外，MS發(fā)病與肝的關(guān)系頗為密切?！端貑枴れ`蘭秘典論》曰“肝者，將軍之官，謀慮出焉”[10]，說明其能疏導(dǎo)和協(xié)調(diào)全身各臟腑組織的生理功能；反之，肝氣郁逆，氣血違和，臟腑功能紊亂，邪氣自內(nèi)而生；衛(wèi)外不固，邪易由外而襲，內(nèi)傷外感，諸病叢生?！堆C論·臟腑病機(jī)論》指出飲食物的消化完全依賴肝的疏泄：“木之性主乎疏泄，食氣入胃，全賴肝木之氣以疏泄之，而水谷乃化。設(shè)肝之清陽不升，則不能疏泄水谷，滲泄中滿之癥在所難免[11]?！笨梢姼蔚氖栊构δ芘c飲食物的消化、吸收和氣血的生化有著密切的關(guān)系?！杜R證指南醫(yī)案·厥》則說：“蓋肝者，將軍之官，善干他臟者也……若震及心脾而為悸為消[12]?！庇捎诟鞣N不良因素，比如嗜酒肥甘、勞累過度、長期焦慮、久臥少動、年老體弱等均可導(dǎo)致肝失疏泄，以致體內(nèi)氣血及津液輸布、運(yùn)化失常，物不歸正化，反而形成痰濁、瘀血等一系列病理產(chǎn)物，困阻于體內(nèi)，致使血糖、血壓、血脂增高，形體日漸肥胖，最終損傷臟腑、經(jīng)絡(luò)而產(chǎn)生多種疾病?？傊I虛不固是本病發(fā)生的基礎(chǔ)，肝失疏泄是本病發(fā)生及發(fā)展的核心環(huán)節(jié)。

因此，本研究采用益腎疏肝中藥治療MS收到良好療效，近年臨床研究表明其有效率達(dá)86%，與單用西藥治療組比較有較大優(yōu)勢。前期研究也表明該法能上調(diào)患者血清脂聯(lián)素、瘦素水平，從單一層面解釋了該法的部分機(jī)制。通過本研究發(fā)現(xiàn)，益腎疏肝中藥能有效改善MS小鼠糖脂代謝，療效優(yōu)于單純的益腎中藥或疏肝中藥，從益腎疏肝的角度出發(fā)，可能是中醫(yī)藥治療MS的突破口之一。

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