超聲波萃取液相色譜儀測定果單皮中的合成色素胭脂紅

郭俊俊

0 引言

人工合成色素作為食品添加劑的一類，主要來源于煤化工及其附屬產(chǎn)品，其相對(duì)于天然色素具有資源豐富，價(jià)格低廉，著色穩(wěn)定的優(yōu)勢，在食品工業(yè)中被廣泛應(yīng)用，但其一般具有毒性，甚至可能致癌。為此，國家出臺(tái)了相關(guān)法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)來規(guī)范合成色素等食品添加劑的使用。胭脂紅作為合成色素的一種被許多生產(chǎn)果單皮的食品企業(yè)使用，國標(biāo)GB/T 5009.35-2003《食品中合成著色劑的測定》規(guī)定了其檢測方法，但因其在樣品前處理的描述上籠統(tǒng)，故針對(duì)性、操作性不強(qiáng)。本文就果單皮樣品的前處理，提出了用超聲波萃取，高速離心機(jī)分離來代替聚酰胺分吸脫附的提取方法，該方法的相關(guān)指標(biāo)可以滿足《食品中合成著色劑的測定》中對(duì)檢測技術(shù)指標(biāo)的要求。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Waters1525高效液相色譜儀（美國Waters公司）；Waters2487紫外檢測器；T25B組織勻漿機(jī)（德國Ika公司）；MSIMinishaker旋渦混合器；KQ-500E型超聲波儀（昆山市超聲波儀器有限公司）；TGL16M型臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（長沙湘智離心機(jī)儀器有限公司）；BS224S型電子天平（塞多利斯科學(xué)儀器有限公司）。

胭脂紅標(biāo)樣（國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心）；甲醇、乙酸銨為色譜純；氨水為分析純度；水為高純水。

1.2 實(shí)驗(yàn)步驟

（1）把樣品用組織勻漿機(jī)搗碎混勻，稱取10.000g置于50mL具塞試管中，加入50mL水，置于旋渦混合器上5min混勻。

（2）將裝有樣品的試管置于KQ-500E型超聲波儀內(nèi)超聲萃取25min。

（3）待樣品超聲萃取完成后將裝有樣品的試管置于TGL16M型臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)上，以10000轉(zhuǎn)/min的速度，常溫離心分離20min。

（4）取出試管，用取樣器吸取上清液，過0.45μm膜，準(zhǔn)備進(jìn)液相色譜儀進(jìn)行檢測。

（5）用標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液體，加水稀釋20倍，經(jīng)0.45μm膜過濾，配制成50.0μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)使用液。

1.3 Waters1525高效液相色譜儀的實(shí)驗(yàn)條件

柱：Waters-C1810μm不銹鋼柱4.6mm×250mm。流動(dòng)相：甲醇：乙酸銨（pH=4，0.02mol/L）。梯度洗脫：甲醇：20%～35%，3%/min；35%～98%，9%/min；98%繼續(xù) 6min。柱溫：35℃。流速：1mL/min。紫外檢測器：254nm波長。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品的前處理

國標(biāo)《食品中合成著色劑的測定》中規(guī)定的前處理方法是，樣品粉碎，用水溶取樣品中的色素，溶取液在酸性條件下，用聚酰胺吸附，用布式漏斗過濾，再用乙醇-氨水混合液洗脫。在實(shí)際操作中，由于果單皮經(jīng)組織勻漿機(jī)處理后的水溶液近似膠體溶液，很容易和聚酰胺吸附相互作用而致使聚酰胺的有效吸附性降低，并且經(jīng)布式漏斗過濾難度很大，即使勉強(qiáng)過濾，在用乙醇-氨水混合液洗脫時(shí)，由于乙醇對(duì)聚酰胺有一定的溶解性，也會(huì)導(dǎo)致過濾時(shí)空隙性差，加大過濾難度，并且對(duì)色素的提取效率影響很大。改用本方法后，避免了聚酰胺吸附、脫附，乙醇-氨水混合液洗脫，布式漏斗過濾等操作性不強(qiáng)的步驟，通過高速冷凍離心來使溶取液中的大分子物質(zhì)離心沉淀，從而使溶取液達(dá)到進(jìn)液相色譜儀的條件。實(shí)驗(yàn)證明，該方法在樣品的前處理上簡便、快速、有效。

2.2 檢測數(shù)據(jù)和結(jié)果分析

2.2.1 檢測數(shù)據(jù)（見表1）

表1 檢測數(shù)據(jù)表

由數(shù)據(jù)分析：4個(gè)平行樣結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為RSD=0.08%，并且在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對(duì)差值小于算術(shù)平均值的10%，該方法符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求。2.2.2 方法的回收率和精密度（見表2）

表2 方法的回收率和精密度表

由數(shù)據(jù)分析：該方法的加標(biāo)回收率在91±0.4%-108±0.8%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 RSD（%，n=4）=0.08%，符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求。

2.3 結(jié)論

該方法相對(duì)《食品中合成著色劑的測定》中規(guī)定的前處理方法簡便、快速、有效。方法的各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)滿足標(biāo)準(zhǔn)要求，精密度為：RSD（%，n=4）=0.08；方法回收率為 91±0.4%-108±0.8%。

[1]GB/T 5009.35-2003食品中合成著色劑的測定[S].

[2]GB/T 22400-2008原料乳中三聚氰胺快速檢測液相色譜法[S].