補腎寧心顆粒對焦慮大鼠腦組織中5-HT含量及Na、K-ATPase活性的影響

姜麗紅，溫琦（長春中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，吉林長春130021）

·實驗研究·

補腎寧心顆粒對焦慮大鼠腦組織中5-HT含量及Na、K-ATPase活性的影響

姜麗紅，溫琦
（長春中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，吉林長春130021）

目的通過實驗觀察補腎寧心顆粒對焦慮大鼠腦組織5-HT及Na、K-ATPase活性的影響，探討補腎寧心顆粒對心臟神經(jīng)癥的作用機理。方法雄性Wistar大鼠60只隨機分為正?？瞻捉M，模型組（模型空白組，模型安定對照組，模型藥物高、中、低劑量組），每組10只，采用高架十字迷宮模型（EPM）法造焦慮模型，灌胃，用分光光度法檢測Na、K-ATPase含量以及用ELISE法檢測5-HT的含量。結(jié)果補腎寧心顆?？山档徒箲]性大鼠腦組織中5-HT濃度，提高焦慮性大鼠腦組織Na、K-ATPase活性。結(jié)論心臟神經(jīng)癥的發(fā)生與焦慮有關(guān)，中醫(yī)通過調(diào)整肝腎之法能改善其癥狀，可緩解焦慮。

補腎寧心顆粒；大鼠；腦組織；5-HT；Na、K-ATPase

補腎寧心顆粒是以中醫(yī)理論為基礎(chǔ)，本著調(diào)整肝腎以治心的原則組方研制而成，臨床應用療效確切。本研究旨在通過實驗觀察補腎寧心顆粒對焦慮大鼠腦組織中5-HT的含量及Na、K-ATPase的活性變化，探討補腎寧心顆粒對心臟神經(jīng)癥的治療作用機理。

1 實驗材料

1.1 實驗動物Wistar大鼠60只，雄性，體質(zhì)量（180 ±10）g。由吉林大學實驗動物中心提供〔動物合格證號：SCXK-（吉）2008-0005〕。

1.2 飼料及飼養(yǎng)環(huán)境將大鼠置于動物實驗室，室溫控制在20℃～30℃，濕度50%～70%，通風2～3次／d，1 h／次。大鼠分籠飼養(yǎng)，每籠5只。控制晝夜光照，避免過多噪聲及其它干擾。給予通用鼠料喂養(yǎng)，投料量每只大鼠30 g／d，根據(jù)大鼠體質(zhì)量增長情況調(diào)整。自由飲水，常規(guī)飼養(yǎng)，飲水采用自來水，不限飲水。

1.3 實驗藥品補腎寧心顆粒：吉林省中醫(yī)中藥研究院植化實驗室提供，批號：20080110，規(guī)格：8 g／袋。分別配制30%，15%，7.5%的混懸液備用（分別稱取補腎寧心顆粒30，15，7.5 g加蒸餾水至100 mL）；地西泮片（Diazepam，DZP）：國藥準字H11020898，北京益民藥業(yè)有限公司出品。

1.4 實驗試劑大鼠5-HT酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）試劑盒：上海朗頓生物科技有限公司提供；超微量ATP酶測試盒：南京建成生物工程研究所。

2 實驗方法

2.1 實驗分組將全部大鼠用隨機數(shù)字表法分為6組，為正?？瞻捉M，模型組（模型空白組，模型安定對照組，模型藥物高、中、低劑量組），每組10只。適應環(huán)境1周，活動、糞便等均未見異常后進行試驗，給藥前用電子秤稱量并記錄各大鼠的體質(zhì)量，之后用苦味酸按頭、四肢等部位做好標記。

2.2 給藥劑量及途徑6組動物每日上午灌胃1次（連續(xù)灌胃7 d）。補腎寧心顆粒高劑量組：6 g／kg體質(zhì)量（補腎寧心顆粒30%混懸液×20 mL／kg體質(zhì)量）；補腎寧心顆粒中劑量組：3 g／kg體質(zhì)量（補腎寧心顆粒15%混懸液×20 mL／kg體質(zhì)量）；補腎寧心顆粒低劑量組：1.5 g／kg體質(zhì)量（補腎寧心顆粒7.5%混懸液×20mL／kg體質(zhì)量）；DZP組給予1mg／kg（5%× 20 mL／kg體質(zhì)量）體質(zhì)量灌胃；模型空白組及正常空白對照組20mL／kg體質(zhì)量蒸餾水灌胃。以上用藥量按人／鼠公斤體質(zhì)量的等效劑量折算。

2.3 實驗周期實驗前期（觀察期）1周，試驗期（給藥期）1周，實驗后期（指標檢測期）1周。

2.4 觀察指標（1）一般觀察：包括進食、水量、體質(zhì)量、二便、外觀毛色、精神狀態(tài)、活動情況等。（2）實驗指標：檢測腦組織中5-HT的含量及Na、K-ATPase活性。

2.5 造模方法采取大鼠高架十字迷宮（elevated plus-maze，EPM）法造焦慮模型［1］。

2.6 實驗動物取材各組連續(xù)灌胃7 d。補腎寧心顆粒各組于末次給藥后1.5 h、DZP組末次灌胃0.5 h［2］、模型空白組末次灌胃0.5 h后做行為學測試；正?？瞻讓φ战M不做行為學測試，所有動物提前進入實驗室。行為學測試結(jié)束后，快速斷頭處死大鼠，迅速放在冰盤上（0.9%NaCl注射液凍制）。

剪開顱蓋和腦膜，分離下丘腦用鹽水沖洗，除去血污，剔除脂肪等組織，用濾紙吸去水分，取下丘腦部分腦組織100mg，加0.9mL冰生理鹽水，玻璃勻漿器制成10%的腦組織勻漿，低溫離心機離心（3 000 r／min）10min，取上清，嚴格按照試劑盒說明書用酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELAISA）檢測5-HT含量；用分光光度法測量Na、K-ATPase的活性［1］。

2.7 統(tǒng)計學處理所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差（ˉx±s）表示，采用SPSS11.5軟件進行單因素方差分析檢驗。

3 實驗結(jié)果

3.1 5組大鼠走迷宮結(jié)果比較見表1。

表1 5組大鼠走迷宮結(jié)果比較（ˉx±s，n＝10）

3.2 對焦慮模型動物腦組織中腦內(nèi)活性物質(zhì)5-HT含量的影響見表2。

表2 對焦慮模型動物腦組織中腦內(nèi)活性物質(zhì)5-HT的影響±s，n＝10）

表2 對焦慮模型動物腦組織中腦內(nèi)活性物質(zhì)5-HT的影響±s，n＝10）

注：與正常空白對照組比較，＃P＜0.05；與模型空白組比較，▲P＜0.01，▲▲P＜0.001；與DZP對照組比較，★P＜0.05，★★P＜0.01。

組別給藥劑量／（g／kg）5-HT／（mg／mL）正?？瞻讓φ战M—258.17±10.75模型空白組—296.42±17.16□DZP對照組1mg 256.23±9.53▲▲補腎寧心高劑量組6 260.89±14.60▲補腎寧心中劑量組3 267.20±9.31▲★補腎寧心低劑量組1.5 286.66±15.92＃★★

3.3 對焦慮模型動物腦組織中腦內(nèi)Na、K-ATPase活性的影響見表3。

4 討論

現(xiàn)代醫(yī)學認為，心血管神經(jīng)癥的病因不清，可能與體質(zhì)、神經(jīng)、行為、外周環(huán)境、遺傳因素有關(guān)?；颊呱窠?jīng)類型常為弱型，較抑郁和焦慮憂愁，發(fā)病大多有明確的誘發(fā)因素，在精神上受到刺激或工作較緊張時，往往不能使自己適應這種環(huán)境而易發(fā)病或使癥狀加重［3-4］。補腎寧心顆粒本著調(diào)整肝腎以治心的原則，治以補腎滋陰，鎮(zhèn)逆降沖，寧心除煩，理氣化瘀，選熟地黃、山茱萸、龜板、代赭石、珍珠母、磁石、丹參、淫羊藿、生百合、青皮、遠志、酸棗仁12味中藥，按現(xiàn)代工藝，制成無糖顆粒。

表3 對焦慮模型動物腦組織中Na、K-ATPase活性的影響（s，n＝10）

表3 對焦慮模型動物腦組織中Na、K-ATPase活性的影響（s，n＝10）

注：與正常空白對照組比較，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01；與模型空白組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；與DZP對照組比較，★P＜0.05。

組別給藥劑量／（g／kg）Na、K-ATPase（μmol／mg）正?？瞻讓φ战M—72.42±5.73模型空白組—55.40±8.31＃＃DZP對照組1mg 70.13±6.07▲▲補腎寧心高劑量組6 71.08±6.29▲▲補腎寧心中劑量組3 67.14±6.14▲補腎寧心低劑量組1.5 61.39±5.24＃★

5-HT是機體重要的神經(jīng)介質(zhì)之一，現(xiàn)代醫(yī)學認為焦慮的發(fā)病機理與5-HT等神經(jīng)遞質(zhì)含量的增多有關(guān)，Na、K-ATPase是一種調(diào)節(jié)酶，在調(diào)節(jié)心肌收縮力、維持中樞神經(jīng)興奮性方面起著重要作用。以Na、KATP酶為分子基礎(chǔ)的鈉泵，是細胞膜最重要的鈉鉀轉(zhuǎn)運系統(tǒng)［5］。腦組織中的ATP酶對腦組織的能量代謝能產(chǎn)生一定的調(diào)節(jié)作用。當Na、K-ATPase活性降低時，腦中產(chǎn)生能量相應減少，不能滿足腦內(nèi)組織的代謝需求而產(chǎn)生焦慮情緒。反之當Na、K-ATPase活性增高時，可緩解焦慮［6］。本實驗研究證明，補腎寧心顆粒可降低焦慮性大鼠腦組織中5-HT濃度，提高焦慮性大鼠腦組織Na、K-ATPase活性，可緩解焦慮。補腎寧心顆粒高劑量作用尤其明顯，作用優(yōu)于DZP且不改變大鼠的飲食及其活動度。

以上結(jié)論得出，心臟神經(jīng)癥的發(fā)生與焦慮與關(guān)，中醫(yī)通過調(diào)整肝腎之法治療可以改善其癥狀。

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R285.5

A

1007－4813（2010）06－0815－02

2010－09－03）

吉林省教育廳資助課題［吉教科合字（2005）第57號］

姜麗紅（1965－），女，碩士，教授，主任醫(yī)師。研究方向：內(nèi)科臨床。