安普霉素及其聯(lián)合用藥對(duì)金黃色葡萄球菌體外PAE的研究

王 新，崔一喆，黃寶明

（黑龍江省八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，黑龍江 大慶 163319）

抗生素后效應(yīng)（PAE）是指細(xì)菌與抗生素短暫接觸，當(dāng)藥物清除或藥物濃度低于最小抑菌濃度時(shí)細(xì)菌生長(zhǎng)仍受到持續(xù)抑制的效應(yīng)。在獸醫(yī)領(lǐng)域中，對(duì)抗菌藥物PAE的研究較少，尤其是安普霉素對(duì)金黃色葡萄球菌PAE的研究少見報(bào)道。因此，開展此項(xiàng)研究可以為獸醫(yī)臨床上更加合理地應(yīng)用安普霉素、有效控制疾病提供參考。

1 試驗(yàn)材料

1.1 試驗(yàn)藥品 安普霉素標(biāo)準(zhǔn)品（K0230811），購(gòu)于中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；阿莫西林標(biāo)準(zhǔn)品（130409）與氨芐西林標(biāo)準(zhǔn)品（130410），均購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所。

1.2 試驗(yàn)菌株 金黃色葡萄球菌（ATCC25923），購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所。

2 試驗(yàn)方法

2.1 菌種的活化與計(jì)數(shù) 取凍干標(biāo)準(zhǔn)菌株，接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯中，37℃孵育18h后，進(jìn)行平板劃線，觀察菌落形態(tài)。挑取2～4個(gè)單菌落接種于2mL營(yíng)養(yǎng)肉湯中，37℃培養(yǎng)過(guò)夜。用營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)后，將菌液稀釋至濁度為1×108CFU·mL-1，4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 藥物溶液的制備 精確稱取各種藥物，用無(wú)菌蒸餾水配制成濃度為1280μg·mL-1的藥液100mL，均為使用前配制。

2.3 藥物體外抗菌活性測(cè)定 采用試管二倍稀釋法和平板菌落計(jì)數(shù)法，分別測(cè)定安普霉素、阿莫西林和氨芐西林對(duì)濁度為1×105CFU·mL-1金黃色葡萄球菌的最小抑制濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC），試驗(yàn)重復(fù)3次。

2.4 體外PAE的測(cè)定

2.4.1 藥物單獨(dú)應(yīng)用PAE的誘導(dǎo) 用已滅菌的營(yíng)養(yǎng)肉湯分別將受試藥物配成濃度為20×MIC、40×MIC和80×MIC的藥液。取各濃度的藥液0.5mL分別加入含4.0mL營(yíng)養(yǎng)肉湯的試管中，每管再加入0.5mL濁度為1×108CFU·mL-1的菌液，使混合藥物最終濃度分別為2×MIC、4×MIC 和 8×MIC，此為試驗(yàn)管（T）；同時(shí)設(shè) C1、C2兩只對(duì)照管，均由4.5mL營(yíng)養(yǎng)肉湯與0.5mL菌液混合，其中C2作為抗菌藥持續(xù)作用的對(duì)照，各管旋渦混勻后，放入37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)1h。

2.4.2 藥物聯(lián)合應(yīng)用PAE的誘導(dǎo) 藥物聯(lián)用時(shí)按簡(jiǎn)易棋盤法混合，將同濃度的安普霉素0.5mL與阿莫西林或氨芐西林0.5mL加入含3.5mL營(yíng)養(yǎng)肉湯的試管中，再加入0.5mL濁度為108CFU·mL-1的菌液，其他程序同2.4.1。

2.4.3 藥物的去除及重建 采用800倍稀釋除藥法。藥物誘導(dǎo)1 h后，取T、C1和C2管中菌液0.1mL，分別加入含1.9mL 37℃預(yù)溫的營(yíng)養(yǎng)肉湯試管中，充分混勻后再吸取0.1mL菌液，分別加入另外含3.9mL 37℃預(yù)溫的營(yíng)養(yǎng)肉湯試管中重建，并在C2管的重建管中加入一定量藥物，使其中藥物濃度相當(dāng)于8MIC試驗(yàn)管中被800倍稀釋后的抗菌藥物濃度，以此作為殘留藥物造成PAE的對(duì)照。以上各重建管立即置37℃恒溫箱中孵育，此時(shí)為重建后的零時(shí)。

2.4.4 細(xì)菌生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)曲線建立 重建后0、1、2、3、4、6、8h分別取菌液0.1mL作系列稀釋，于瓊脂平板上進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，得出CFU·mL-1值。試驗(yàn)重復(fù)3次，取平均值繪制細(xì)菌重建后恢復(fù)生長(zhǎng)的曲線，以CFU·mL-1對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)，以孵育時(shí)間（h）為橫坐標(biāo)作圖。

2.4.5 體外PAE的計(jì)算 按公式PAE=T-C計(jì)算。其中T、C分別為試驗(yàn)管與對(duì)照管細(xì)菌CFU·mL-1值高于重建后零時(shí)10倍所需要的時(shí)間（h）。

2.4.6 藥物聯(lián)用PAE的判斷標(biāo)準(zhǔn) 藥物聯(lián)用的PAE與兩種藥物單用的PAE比較，長(zhǎng)于藥物單用之和1h以上為協(xié)同作用，與藥物單用之和接近為相加作用，與藥物單用最大值相近為無(wú)關(guān)作用，小于藥物單用最小值為拮抗作用。

3 試驗(yàn)結(jié)果

3.1 藥物的體外抗菌活性 安普霉素對(duì)金黃色葡萄球菌的MIC 和 MBC 分別為 0.63μg·mL-1和 1.25μg·mL-1，阿莫西林對(duì)金黃色葡萄球菌的MIC和MBC分別為0.16μg·mL-1和 0.31μg·mL-1，氨芐西林對(duì)金黃色葡萄球菌的 MIC 和 MBC 分別為 0.63μg·mL-1和 1.25μg·mL-1。

3.2 安普霉素及其與阿莫西林或氨芐西林聯(lián)用的體外PAE 試驗(yàn)結(jié)果見表1、圖1、圖2和圖3。由表1可知，安普霉素、阿莫西林及氨芐西林對(duì)金黃色葡萄球菌均具有較長(zhǎng)的體外PAE，且隨藥物濃度的升高其體外PAE也相應(yīng)地延長(zhǎng)。安普霉素與阿莫西林或氨芐西林聯(lián)用后對(duì)金黃色葡萄球菌的體外PAE呈相加或協(xié)同作用。由圖1、圖2、圖3可見，PAE測(cè)定過(guò)程中所設(shè)的細(xì)菌對(duì)照管與殘留藥物對(duì)照管的細(xì)菌生長(zhǎng)基本一致，說(shuō)明各試驗(yàn)管中細(xì)菌生長(zhǎng)所受到的抑制是PAE造成的，而不是殘留藥物的作用，同時(shí)說(shuō)明800倍稀釋基本上可以去除藥物。此外，隨著濃度的增高，藥物對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的抑制作用越強(qiáng)，在藥物去除后，細(xì)菌恢復(fù)正常生長(zhǎng)所需的時(shí)間也越長(zhǎng)。

表1 藥物單用及聯(lián)用對(duì)金黃色葡萄球菌的體外PAE h

圖1 安普霉素PAE期金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)曲線

圖2 安普霉素與阿莫西林聯(lián)用PAE期金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)曲線

圖3 安普霉素與氨芐西林聯(lián)用PAE期金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)曲線

4 討論與小結(jié)

本試驗(yàn)采用稀釋法去除抗生素，用菌落計(jì)數(shù)測(cè)定細(xì)菌生長(zhǎng)曲線的方法，進(jìn)行了安普霉素及其與阿莫西林或氨芐西林聯(lián)用對(duì)金黃色葡萄球菌體外PAE的研究。結(jié)果證實(shí)了安普霉素對(duì)金黃色葡萄球菌具有較強(qiáng)的抗菌活性和較長(zhǎng)的體外PAE，且呈現(xiàn)出高度的濃度依賴性；安普霉素與阿莫西林或氨芐西林聯(lián)用對(duì)金黃色葡萄球菌的體外PAE也表現(xiàn)為相加或協(xié)同作用。因此，臨床應(yīng)用安普霉素治療金黃色葡萄球菌引起的感染時(shí)，建議采用大劑量間斷給藥或與β-內(nèi)酰胺類藥物聯(lián)用的給藥方案，所獲得的治療效果會(huì)更好。

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