結(jié)腸康Ⅰ號對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠血清IL-6、IL-10的影響

潘 勇 舒洪權(quán) 顏景穎

1.深圳市羅湖區(qū)中醫(yī)院，廣東 深圳 518001；2.深圳市第二人民醫(yī)院，廣東 深圳 518035；3.深圳市福永醫(yī)院，廣東 深圳 518103

潰瘍性結(jié)腸炎（UC）是一種病因未明的以大腸黏膜和黏膜下層炎癥病變?yōu)橹饕卣鞯穆约膊?，久治愈，反?fù)發(fā)作，近年來發(fā)病率在我國呈不斷上升趨勢。其病因和發(fā)病機制尚不十分清楚，目前認為主要與遺傳、免疫、環(huán)境等因素的相互作用有關(guān)。細胞因子在UC發(fā)病中的重要作用，越來越引起人們的關(guān)注，大量的研究提示潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）患者有免疫異常[1-3]，如血中的抗結(jié)腸抗體[3]，循環(huán)免疫復(fù)合物等[2]，有人甚至認為它是一種自身免疫病，目前認為促炎細胞因子與抗炎細胞因子之間的平衡失調(diào)所致的免疫異常是UC的重要發(fā)病機制，在促炎因子中具有代表性的是IL-1、IL-6、TNF-α等，抗炎因子中具有代表性的是IL-4、IL-10等。目前對UC尚無滿意的治療手段，而中醫(yī)藥具有毒副作用小，遠期療效好等優(yōu)勢，本實驗主要觀察經(jīng)驗方結(jié)腸康Ⅰ號對UC大鼠結(jié)腸損傷的修復(fù)作用及血清IL-6、IL-10水平的影響，從而進一步驗證該藥的療效，探討其治療UC的免疫機理。

1 實驗材料

1.1 藥物與試劑

結(jié)腸康I號（主要由黃芪20g、黨參20g、白術(shù)15g、茯苓12g、白頭翁12g、秦皮6g、木香10g、地榆8g、元胡8g、白芍12g、甘草3g組成），由深圳市長白山制藥廠提供，批號20081012，實驗前用蒸餾水配制成100%（1g/ml）的濃度。IL-6、IL-10放免試劑盒由解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免所提供。磷酸緩沖溶液500毫升；2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBS，Sigma公司產(chǎn)品）。乙醇為國產(chǎn)分析純。

1.2 實驗動物

健康SD大鼠60只，體重200～220克，雌雄各半，購于南方醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心。隨機分為4組，每組15只，雌雄各半，分別是正常組、模型組、結(jié)腸康I號大、小劑量組。

2 實驗方法

2.1 UC大鼠模型制備

除正常組外，其余各組大鼠造模前禁食不禁水48小時，禁食24小時后提起鼠尾將其懸空，使掙扎以排出大腸遠端的大便，共2次，每次相隔6小時以上，以氯氨酮（0.2ml/100g）腹腔注射麻醉大鼠，用外徑為2mm的硅膠管插入鼠肛內(nèi)約8cm，經(jīng)管內(nèi)注入5%2.4、6-三硝基苯磺酸水溶液0.4ml（100mg/kg）+50%乙醇0.25ml，約10秒灌注完畢。

2.2 給藥及取材

造模完成（第3天）后，結(jié)腸康I號大、小劑量組，每組每只大鼠分別用配制的結(jié)腸康I號液2.5ml、5ml灌胃，每天兩次；正常組、模型組每組每只大鼠均以蒸餾水3ml灌胃，每天一次，以上均給藥15天。四組大鼠分別給予藥物和蒸餾水灌胃15天后，于第16天分別眼球取血2毫升待測。截取距肛門8cm處結(jié)腸，用10%甲醛固定，肉眼觀察結(jié)腸大體形態(tài)、結(jié)腸黏膜損傷情況。常規(guī)石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡觀察。分離血清，-20℃保存，采用放射免疫法，嚴格按試劑盒說明書檢測血清IL-6、IL-10水平。

2.3 統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件，進行兩樣本均數(shù)差別的t檢驗。

3 結(jié)果

3.1 實驗動物數(shù)量分析

60只大鼠，模型組死亡1只，存活大鼠全部進入結(jié)果分析。

3.2 結(jié)腸大體形態(tài)改變

正常組大鼠表現(xiàn)為腸道不增厚，皺襞紋理清晰，黏膜光滑潤澤，腸道無粘連，未見充血、糜爛及潰瘍。模型組大鼠可見結(jié)腸長度縮短、腸道粘連，腸脹氣，局部充血，腸壁增厚，纖維化，可見明顯潰瘍。結(jié)腸康I號低、高劑量組較模型組均有改善，其中結(jié)腸康I號高劑量組大部分未見明顯潰瘍。

3.3 結(jié)腸病理組織學(xué)改變

正常組大鼠結(jié)腸上皮完整，結(jié)構(gòu)清晰，固有層杯狀細胞豐富，腺體排列規(guī)則，偶有微量炎細胞浸潤，無充血、水腫，無潰瘍。模型組大鼠結(jié)腸全層普遍增厚，黏膜層缺失，杯狀細胞顯著減少，腺體破壞，有大量中性粒細胞、淋巴細胞及數(shù)量不等的嗜酸性粒細胞浸潤，可見纖維組織增生。結(jié)腸康I號低、高劑量組黏膜缺損、細胞浸潤較模型組明顯減輕。

3.4 大鼠血清IL-6、IL-10水平變化

結(jié)果見表1。

表1 各組大鼠血清IL-6、IL-10水平變化比較（）

表1 各組大鼠血清IL-6、IL-10水平變化比較（）

注：與正常組比較*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與高劑量組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01

組別 n IL-6（pg/ml） IL-10（ng/ml）正常組 10 102.12±7.24 38.78±7.09模型組 9 185.64±8.82** 18.51±3.81*低劑量組 10 151.92±5.22**△▲▲ 23.92±5.24**△▲▲高劑量組 10 114.65±6.53△△ 33.57±5.32*△△

模型組大鼠血清IL-6含量明顯高于正常組，IL-10含量明顯低于正常組，兩組比較有顯著性差異（P＜0.01）。低劑量組IL-6及IL-10含量與模型組比較有差異（P＜0.05），高劑量組大鼠血清IL-6含量低于模型組，IL-10含量高于模型組，有非常顯著性差異（P＜0.01）。低劑量組IL-6、IL-10的含量與高劑量組比較有顯著性差異（P＜0.01）。

4 討論

細胞因子分促炎性細胞因子和抗炎性細胞因子正常人群中這兩類細胞因子處于平衡狀態(tài)目前兩者之間的平衡失調(diào)所致免疫異常被視為UC的重要發(fā)病機制。IL-6是重要的促炎癥細胞因子，它是由單核巨噬細胞產(chǎn)生的多向性細胞因子，可由活化的T細胞、B細胞、纖維母細胞、內(nèi)皮細胞等產(chǎn)生，具有廣泛的生物學(xué)活性。它可以加強終末B細胞的分化、介導(dǎo)免疫球蛋白的分泌、提高T細胞活化信號及促進細胞毒T細胞和NK細胞溶解細胞的能力。研究發(fā)現(xiàn)UC患者的血清IL-6水平明顯升高，且與病變范圍和病變嚴重程度呈正相關(guān)[2-3]。IL-10是由輔助性T細胞亞群TH1和TH2、單核細胞、巨噬細胞、B細胞和角質(zhì)細胞（keratinocyte）產(chǎn)生的多效性抑炎細胞因子，其生物活性廣泛，其生物學(xué)作用是抑制炎癥反應(yīng)和致炎細胞因子的釋放、調(diào)節(jié)T細胞、B細胞等多種免疫細胞的增殖和分化。有研究顯示，在UC患者結(jié)腸中，T淋巴細胞IL-10mRNA水平顯著升高，IL-10陽性細胞出現(xiàn)的頻率增加。又有研究報道，IL-10基因剔除小鼠可自發(fā)結(jié)腸炎說明IL-10在維持正常腸道黏膜免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。

本病屬中醫(yī)“痢疾”、“腸癖”、“腸風(fēng)”、“泄瀉”、“臟毒”等范疇。祖國醫(yī)學(xué)認為飲食不節(jié)，情志內(nèi)傷，外感邪毒，勞倦過度等因素，都可損傷脾胃，導(dǎo)致泄瀉。久病及腎，火不溫土，脾腎陽虛，中氣不運，水濕停留；氣虛寒凝則血運無力，漸成瘀血阻滯，或濕熱蘊結(jié)損傷血絡(luò)，瘀阻腸絡(luò)。由于局部微循環(huán)障礙，日久形成腸粘膜潰瘍，糞下膿血粘液而成腸風(fēng)。究其病機，本虛標實，以脾腎陽虛為本，寒濕停滯，濕熱蘊結(jié)，瘀血阻滯為標。結(jié)腸康I號系著名中西醫(yī)結(jié)合內(nèi)科專家陳如山教授數(shù)十年治療潰瘍性結(jié)腸炎的經(jīng)驗方，方中黃芪、黨參、白術(shù)、茯苓健脾益氣，具有增強細胞免疫及免疫調(diào)節(jié)作用，配以地榆、白頭翁能清熱解毒，止血止瀉，經(jīng)現(xiàn)代藥理研究表明對多種革蘭氏陰性菌，陽性菌敏感，對慢性潰瘍性結(jié)腸炎有良好的效果；木香行氣導(dǎo)滯；延胡索、白芍化瘀行滯止痛，有改善組織微循環(huán)，殺菌、抗炎，促進損傷組織修復(fù)、促進代謝等作用，地榆有較好的止血，抗炎功效。全方具有健脾益氣，補脾益腎治本，清腸祛濕、活血化瘀、行氣導(dǎo)滯治標之功效，共同達到扶正祛邪，標本同治的目的。本實驗表明結(jié)腸康I號對UC大鼠結(jié)腸損傷具有明顯的修復(fù)作用，并能顯著降低大鼠血清IL-6水平，提高大鼠血清IL-10含量進一步揭示了結(jié)腸康I號治療UC的藥理機制為臨床廣泛應(yīng)用提供了理論基礎(chǔ)。

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